献血者ABO疑难血型血清学与分子生物学检测结果分析

目的 正确鉴定ABO正反定型不相符献血者的血型并研究其表型与分子生物学特性。方法 微孔板法正反定型不相符的献血者标本分别进行盐水试管法血型血清学鉴定和聚合酶链反应-序列特异性(PCR-SSP)基因分型,并对部分献血者的PCR产物进行ABO基因1—7外显子直接测序,分析献血者的血型表型、基因分型及基因序列。结果 微孔板法ABO正反定型不相符的献血者标本256份,通过试管法血型血清学鉴定,正常ABO血型119份,ABO血型抗体减弱90份,ABO亚型47份。256份标本进行了PCR-SSP基因分型试验,除了6份标本基因分型无法明确判读外,233份标本试管法血清学表型与基因型一致(91.02%),17份表型与基因型不一致(6.64%)。250份标本共计检出17种基因型:AO1(56份)、AO2(58份)、AA(50份)、BO1(31份)、BO2(17份)、BB(8份)、O1O1(2份)、O1O2(7份)、AB(13份),AO4、A205O2、A205A、A201A、O1O4、O2O2、A201B、A205B各1份。对78份标本ABO基因1—7外显子测序,共检出29个ABO等位基因,其中7个是常见等位基因:^(*)A101、^(*)A102、^(*)A104、^(*)B101、^(*)O01、^(*)O02、^(*)O04,23个是少见或罕见等位基因:^(*)A201、^(*)A205、^(*)Ax01、^(*)Ax03、^(*)Ax13、^(*)Ax19、^(*)Ax22、^(*)Ael10、^(*)B305、^(*)Bel03、^(*)Bel06/^(*)Bx02、^(*)Bw07、^(*)Bw12、^(*)Bw17、^(*)Bw37、^(*)O05、^(*)O26、^(*)O61、^(*)B(A)04、^(*)B(A)07、^(*)cisAB01和^(*)cisAB01var。另外发现6个罕见等位基因突变位点(c.101A>G;c.103_106delG;c.146_147insGC;c.259G>T;c.322C>T;c.932T>C)。结论 疑难ABO血型的鉴定需要血清学检测和分子生物学检测相结合,提供明确的血型以保障临床用血安全。

微柱凝胶检验法在RhD、ABO血型抗原鉴定中的应用价值分析

目的探讨微柱凝胶检验法在RhD、ABO血型抗原鉴定中的应用价值。方法120例需行RhD及ABO血型鉴定患者,将所有取得的血样分为两份,分别使用试管法及手工微柱凝胶免疫检验法(微柱凝胶检验法)对血型进行分析。比较两种检测方式的鉴定结果。结果120例患者血样经试管法及微柱凝胶检验法检测后,结果均发现ABO阳性112例(其中A型34例,B型33例,AB型11例,O型34例),ABO阳性率为93.33%;RhD阴性1例,RhD阴性率为0.83%。两种方法的抗原检测结果符合率为100.00%,两种方法检测血型结果比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论微柱凝胶检验法应用在RhD、ABO血型抗原鉴定中,操作简便,准确率高,值得在临床中推广应用。

ABO疑难血型的基因型鉴定与序列分析

目的 研究20例ABO疑难血型标本的基因型并鉴定其分子生物学特性。方法 应用标准血型血清学鉴定技术分析标本的血清学表型。应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)扩增标本ABO基因7个外显子,对PCR产物进行直接测序,分析ABO疑难血型的基因分型和序列。结果 20例ABO疑难血型标本的血清学表型分别为:A抗原减弱5例、A抗原减弱合并抗-A15例、A抗原正常合并抗-A12例、B抗原减弱8例,基因型分别为:Ax02/O01 3例、Ael07/O01 2例、B313/O01 2例、A204/O02、A220/O01、Ael07/O02、Ael02/O01、Ael02/O02、Ax03/O01、Ax03/O02、B313/O02、B302/O01、B302/O02、Bw19/O02、A102/B313、A101/Bw37各1例。结论 ABO基因分型技术可精准鉴定疑难标本的血型,提供明确的血型遗传学信息,保障临床用血安全。

恩施土家族苗族地区患者ABO正反定型不符原因及分子生物学分析

目的探究恩施土家族苗族地区患者ABO正反定型不符原因及分子生物学分析结果。方法以2018年10月~2022年10月我院鉴定的59例ABO正反定型不符样本为研究对象进行回顾性研究。分别对样本进行吸收放散试验、意外抗体检测以及分子生物学检测,分析ABO正反定型不符原因,并对比血清学及分子生物学检测结果。结果59例ABO正反定型不符样本中正定型异常8(13.56%)例,反定型异常47(79.66%)例,正、反定型异常4(6.78%)例。男性比例62.71%(37/59)高于女性比例37.29%(22/59)(P<0.05);≥61岁年龄段比例42.37%(25/59)高于41~50岁年龄段比例32.20%(19/59)和51~60岁年龄段比例25.42%(15/59)(P<0.05)。17例ABO亚型样本中12(70.6%)例为土家族。59例正反定型不符样本中29(49.16%)例为意外抗体,17(28.81%)例为ABO亚型,13(22.03%)例为血清抗体减弱。17例ABO亚型中,A亚型6例(A2型1例,A3型4例,Ael型1例),B亚型4例(B3型3例,Bel型1例),AB3型2例,B亚型(A型)3例,cisAB型2例。17例ABO亚型中,有8例血清学结果与基因分型结果一致,一致率47.1%(8/17)。A亚型中以A 307/O 02基因型为主,B亚型中以B 303/O 02基因型为主。结论ABO亚型是恩施土家族苗族地区ABO正反定型不符的重要原因。亚型中A亚型以A307/O02基因型为主,B亚型以B 303/O02基因型为主。

ABO血型基因分型及应用

目的 :研究ABO血型基因分型的意义。方法 :采用聚合酶链反应 序列特异性引物 (PCR SSP)基因定型方法对ABO血型基因定型并观察其基因多态性分布特征和疑难血型检定。结果 :对已知ABO基因的DNA标本进行基因定型 ,证实文中的ABO基因定型方法可靠 ;对 10 4例健康、无血源关系的汉族个体ABO血型基因定型 ,结果与血清学所定表型完全符合 ;并用ABO基因分型技术解决临床输血前血型鉴定、产前胎儿血型鉴定、亲权试验及血清学亚型的正确性验证。结论

ABO基因第7外显子c.721C>T变异导致ABO亚型的研究

目的:分析ABO基因第7外显子c.721C>T变异导致的不同亚型,探讨影响抗原表达的分子机制。方法:通过标准血型血清学方法鉴定7例样本的ABO亚型,应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)法扩增ABO基因第6、7外显子及相关内含子,并进行直接DNA测序和克隆测序。结果:7例ABO表型分别为:A_(w) 1例、B_(w) 3例、AB_(w) 2例、A2或A_(int) 1例。测序发现,ABO基因第7外显子分别在A1.02、B1.01和O.01.02等位基础上发生了c.721C>T变异,等位基因分别为AW.43(1例)、BW.03(5例)和O.01.07(1例),基因型分别为ABO*AW.43/O.01.02(1例)、ABO*BW.03/O.01.01(3例)、ABO*A1.02/BW.03(2例)和ABO*A2.05/O.01.07(1例)。结论:ABO基因c.721C>T变异引起241位氨基酸精氨酸(Arg)被色氨酸(Trp)替换,导致α-1,3-N-乙酰半乳糖胺基转移酶(GTA)或α-1,3-D-半乳糖基转移酶(GTB)活性降低,抗原表达减弱。在O.01.02基础上产生c.721 C>T变异形成的O.01.07等位基因,是一个无效等位基因,不能形成有催化功能的酶,对A2亚型抗原的表达无影响。

PCR-SSP对潜在输血需要住院患者ABO基因分型的检测效果与意义

【目的】调查潜在输血需要住院患者的ABO血型基因,分析ABO表型相同输血中ABO基因型的错配输血几率。【方法】对502例潜在输血需要的住院患者,采用血清学方法和聚合酶链反应-序列特异性扩增技术(PCR-SSP)检测ABO血型的表型及基因型。比较两种方法学对ABO血型表型的一致率;统计各ABO等位基因及各ABO基因型的频率;并分析潜在输血需要的住院患者在接受ABO血型表型相同的输血时,ABO基因错配输血几率。【结果】血清学与PCR-SSP对502例潜在输血需要的住院患者的ABO表型识别的一致率为100%。PCR-SSP技术检测出患者中常见ABO基因5个(O1、O2、A1、B1及A2)以及ABO基因型16个(O1O2、O1O1、B1O1、A1O1、A1O2、B1O2、O2O2、A1B1、A1A1、B1B1、A2O1、A2O2、A2B1和A1A2),而血清学仅能识别ABO表型。潜在输血需要住院的患者在接受ABO血型表型相同的随机输血中,与供者之间ABO基因型的错配率分别为:A型65.98%,B型57.39%,O型56.95%,AB型22.55%。【结论】PCR-SSP能识别ABO基因型,不仅可以作为血清学的有力补充,而且可能揭示输血治疗中不明原因的输血不良反应的临床原因,具有重要临床意义。

基因分型方法在ABO疑难血型鉴定中的应用

目的:探讨基因分型方法在ABO疑难血型鉴定中的临床应用。方法:通过序列特异性聚合酶链扩增技术(PCR-SSP)和基因测序对10例ABO疑难血型标本进行基因分型。同时以610例ABO血型正反定型结果相符标本作为基因分型对照组。结果:10例ABO正反定型结果不符的ABO疑难血型标本需通过高分辨的基因分型,发现为cis-AB01 3例、B(A)04 2例,cis-AB02、B(A)02、Bel03、Bw12和Ael05各1例,与基因测序比对结果一致。610例ABO血型正反定型结果相符标本的基因分型结果与血清学定型结果完全相符,ABO基因分型为A型占28.69%,B型占27.54%,AB型占8.2%,O型占35.57%;其中以O1型基因频率最高占32.87%,A2最低0.66%。结论:PCR-SSP分型可用于ABO血型的鉴定,而且可以了解亚型;针对稀有血型的PCR-SSP和测序方法对稀有疑难血型的确认起决定性作用。

北京地区汉族人群ABO血型基因分型研究

本研究建立ABO基因分型技术,研究北京地区汉族人群中ABO基因型的分布,以了解该人群基因分布特点及规律。通过Multiplex-PCR-RFLP技术和PCR-SSP技术建立起稳定的ABO血型基因分型方法,应用该方法开展对北京地区汉族人群ABO基因分型的研究。研究结果表明,A102、O1、B为北京地区汉族人群中较为常见的等位基因;在北京汉族人群中A型以A102为主,占绝对优势;未检测到A201等位基因,但发现3例O2基因样本,此结果提示在北京汉族人群中存在O2基因。结论:通过研究初步了解了北京地区汉族人群ABO基因分型规律,为ABO血型系统的深入研究提供了参考依据。

ABO血型基因分型方法的进展与应用

ABO血型系统是临床输血中最重要的血型系统。血清学技术是检测ABO血型常规检测方法,但对于鉴定如抗原或抗体减弱、血浆蛋白异常、多凝集或冷凝集素等较为复杂的ABO疑难样本,血清学存在着一定的局限性。随着分子生物学技术的发展,ABO血型基因被克隆,建立了以DNA为基础的ABO血型基因分型技术,出现了PCR-SSP、Droplet-AS-PCR、PCR-RFLP、PCR-SBT、SNaPshot、MALDI-TOF MS及NGS等不同通量的基因分型技术。基因分型技术克服了血清学的局限性,已成为解决疑难血型必不可少的方法,为ABO血型的正确鉴定提供了强力支持,为精准输血提供保障。本文就ABO血型基因分型方法的进展与应用作一综述。

基因分型技术在肿瘤患者ABO疑难血型鉴定中的应用

目的探讨基因分型技术辅助肿瘤患者ABO疑难血型的鉴定以有效避免疾病干扰。方法采用血清学方法与序列特异性引物-聚合酶链式反应(PCR-SSP)法、基因测序技术,对于20例ABO血型正反定型不符的肿瘤患者(其中10名为血液系统恶性肿瘤患者)疑难标本做鉴定;同时对这些患者的输血效果做回顾性分析。结果本组肿瘤患者的疑难血型标本中,25%(5/20)为A和(或)B抗原减弱,原发病分别为2例MDS、1例前列腺癌,2例AL;45%(9/20)A或B抗体减弱,分别为4例原发病为MM、1例WM、1例AGL、1例肝癌、1例右半结肠癌、1例食管癌;30%(6/20)为ABO亚型:1例Bel09/O02、1例B(A)04/O2、1例B(A)02/B、2例Bel03/O;1例为新的A亚型等位基因:测序结果为797位置发生突变,根据其他位点的突变判断具有A102/O01特点。基因型和血清学表型结果一致率75%(15/20)。60%(12/20)患者接受过输血治疗,均未发生溶血性输血反应,75%(9/12)患者达到了预期输血疗效。结论基因分型技术结合血清学方法应用于肿瘤患者ABO疑难血型鉴定结果准确,且可正确区分血型抗原抗体减弱或亚型。疾病导致ABO抗原抗体减弱的患者输血时可同型输血。

常见ABO抗原和稀有A2抗原同步基因分型的研究

目的建立人类ABO血型系统的同步基因分型法研究ABO血型。方法采用PCR-SSP技术,设计合成13对序列特异性引物,摸索最佳退火温度,通过调整引物浓度、Mg2+浓度等,使ABO系统等位基因在同一条件下进行同步扩增和扩增产物在同一凝胶中进行同步电泳;使用此方法,检测34例已知血清学ABO血型的与20例已知序列的A2亚型标本。结果用基因分型法检测出的ABO常见基因和A2基因,与已知血清学ABO分型结果相符合。结论该ABO基因分型方法适合中国人ABO基因常规鉴定与研究。

ABO血型基因分型诊断方法的建立

目的在北京地区建立一套稳定的ABO血型系统基因分型的诊断方法,为临床疑难血型定型工作提供技术保证和输血安全保障。方法通过Multiplex-PCR-RFLP技术和PCR-SSP技术建立起ABO血型基因分型方法。结果所建立的分型方法具有良好的重复性和稳定性,在各种分型检测中均取得了理想的试验结果。结论建立一套较为完善和实用的基因分型方法,为进一步研究中国人ABO亚型的分子基础提供参考依据。

基因分型结合血清学方法鉴定ABO血型亚型

目的准确鉴定红细胞ABO亚型。方法采用血清学方法鉴定12例ABO血型正反定型不符标本,结合PCR-SSP基因定型方法作检测鉴定,并对其中9例作基因测序确定基因型。结果 ABO基因分型结果与血型血清检测结果一致率为66.67%（8/12）;其余不相符的4例：2例为B（A）,1例为Cis AB,1例为新基因（新基因血型血清学结果不确定,PCR-SSP结果为A1/O02,测序结果为A102/O02型）。结论 ABO血型基因分型技术结合血清学定型可用于ABO亚型鉴定及ABO血型的正确定型。

15例ABO疑难血型基因检测分析

目的利用ABO血型基因分型技术辅助疑难血型的鉴定。方法收集2016年4月至2018年6月北京医院15例血型正反定型不符患者的外周静脉血样,应用血型血清学方法结合聚合酶链反应-特异性序列引物(polymerasechain reaction-sequence specific primer, PCR-SSP)法进行ABO基因分型,并对其中7例做基因测序确定基因型。结果15例疑难血型的ABO基因分布为1例A/B、1例A/O2、3例B1/O01、1例Bel09/O02、1例CisAB01/O2、1例Bw12/O01、1例A102/Bw12、1例B(A)04/O2、1例B(A)02/B、2例Bel03/O、1例Ael05/O;1例为新基因,测序结果为797位置发生突变,根据其他位点的突变具有A102/O01特点。结论 ABO血型基因分型技术结合血清学定型可用于疑难血型的准确定型。

孕妇外周血胎儿ABO血型基因分型技术的建立

本研究目的是建立孕妇外周血胎儿ABO血型基因分型技术,用于ABO血型不合引起的新生儿溶血病的产前诊断。根据ABO血型基因DNA全序列和mRNA序列设计4对引物,选择20例健康供者血浆,提取血浆中DNA进行扩增,探索最佳的血浆DNA提取及PCR扩增条件,初步建立单人ABO血型基因分型技术。将O型血浆DNA与A型或B型血浆DNA按1:1、2:1、4:1、8:1、10:1、20:1、40:1、100:1进行混合,模拟孕妇外周血胎儿与孕妇自身ABO基因混合状态,建立混合ABO血型基因分型技术。选取14例孕30周以上的孕妇外周血标本,进行胎儿ABO血型基因型鉴定,并对孕妇进行追踪,尽量获取胎儿出生以后的外周血标本进行ABO血型鉴定,以评价孕妇外周血胎儿ABO血型基因分型技术的灵敏度与准确性。结果表明:单人血浆进行准确血型鉴定的最少模板DNA量约为0.625ng,500μl血浆提取的DNA量即可达到PCR扩增要求;当混合血浆中O型DNA所占比例≤10时,可以准确检测出非O基因的存在;14名O型孕妇外周血标本中9例标本扩增出非O型基因,5例未扩增出非O基因;通过血清学方法对5例胎儿出生后外周血进行ABO血型鉴定,其中A型3例,B型1例,O型1例,与其基因分型结果一致,符合率100%。结论:本研究建立的孕妇外周血胎儿ABO血型基因提取、分型技术,可以对妊娠中晚期胎儿ABO血型基因型进行准确鉴定,从而为新生儿溶血病的产前诊断与预防提供指导意见。

复合PCR技术在ABO血型基因分型中的应用

目的探讨复合PCR技术在ABO血型基因分型方法中的应用。方法通过实验研究摸索复合PCR的条件和规律,采用单管同时扩增出ABO基因的第6、7外显子后,使用限制性内切酶对复合PCR产物进行酶切消化。结果通过最佳实验反应条件的获得,可建立ABO血型基因分型方法。结论复合PCR技术在建立ABO血型基因分型方法的应用中,具有其特殊性。

全自动微柱凝胶技术在ABO、RhD血型鉴定中的应用研究

目的探讨全自动微柱凝胶技术在ABO、RhD血型鉴定中的应用。方法采用全自动微柱凝胶技术对5150例标本进行ABO及RhD血型鉴定,并与纸板法进行比对实验。对实验中出现因ABO正反定型不一致而无法定型的标本改用试管法,并增加吸收放散实验、唾液型物质抑制实验及H抗原强度检测以确定最终血型。结果5150例标本中全自动微柱凝胶法ABO血型一次准确定型率为99.9%(5145/5150),纸板法ABO血型一次准确定型率为99.7%(5135/5150),两种方法比较有显著性差异(P﹤0.05);全自动微柱凝胶法RhD血型一次准确定型率为100%(5150/5150),纸板法RhD血型一次准确定型率为99.9%(5146/5150),两种方法比较无显著性差异(P﹥0.05)。全自动微柱凝胶法发现疑似亚型标本1例,经进一步实验确认为A3亚型。结论全自动微柱凝胶技术安全、可靠,较纸板法更为灵敏,易于发现亚型;实现了实验操作规范化、标准化,降低了人为错误的发生率;实验结果可永久保存,便于查询和医疗举证。

PCR-SSP法在ABO 疑难血型鉴定中的临床应用

目的应用PCR-SSP法对临床ABO疑难血型的标本做血型基因的检测,为临床准确、快速的确认患者血型提供依据和实验室检测方法,保障输血的安全性和有效性。方法从本院临床科室2016年1月—2017年2月,送检输血科经常规血清学检测为疑难血型的标本中,选择典型的20例,采用PCR-SSP法作ABO基因分型,根据基因分型的结果,结合血清学的反应格局,分析正反定型不符产生的原因和提出处理对策。结果 20例ABO疑难血型通过PCR-SSP方法确证了其中5例为亚型,其余的15例血型基因表达正常而血清学难以判断的原因是由于疾病、多次输血等原因,造成抗原或抗体减弱或增多所致。通过检出的基因型证实了相应基因的存在并得以最终确定血型。结论 PCR-SSP方法用于临床ABO疑难血型,能在较短时间内,对血清学无法判别的疑难血型做出准确的定型。

改良微柱凝胶法检测ABO变异型血型

目的:建立用于检测ABO变异型血型的改良微柱凝胶法。方法:选取2016年11月至2018年5月温州医科大学附属第二医院育英儿童医院、温州市人民医院和瑞安市人民医院ABO血型凝集强度改变或正反定型不一致的患者12例。采用血型血清学检查和血型基因检测结合临床表现确认标本ABO血型;对已知血型标本用微柱凝胶法复核;用1% O型、A3亚型和A抗原减弱红细胞调整微柱凝胶法离心方式建立改良微柱凝胶法,并对全部标本进行检测。结果:12例标本中A3亚型1例,B(A)型3例,类孟买型3例,ABO抗原减弱5例;微柱凝胶法和盐水试管法检测敏感度相似,12例标本中只检出2例,检出比例为2/12;选定改良微柱凝胶法的离心方式为900 r/min离心2 min、4 ℃孵育30 min、1 800 r/min离心3 min;用改良微柱凝胶法检测12例标本,1例不能检出,检出比例为11/12。结论:本研究建立的改良微柱凝胶法通过改变微柱凝胶血型卡的离心方式、增加孵育时间和孵育温度,提高了检测敏感度,适合ABO变异型血型的筛检。