中国人群血型ABO亚型的分子基础研究

目的:对我国人群血型ABO亚型的表型与基因型进行关联性研究,以探讨ABO亚型的分布特点及分子背景。方法:采用血清学方法对2014年7月至2019年6月间1545505名献血者和116209例受血者中检出的血型ABO亚型进行表型鉴定,用直接测序或克隆后测序分析ABO基因的DNA序列。结果:血型血清学鉴定在1545505名献血者和116209例受血者中共检出ABO亚型617例,检出率为3.71/万,检出率最高的表型为B(A)(0.066‰),其次是B3(0.045‰)和Bx(0.039‰)。544例ABO亚型样本经基因测序鉴定出42种ABO亚型等位基因,其中ABO*BA.04的检出构成比最高(25.20%),其次为ABO*BA.02(11.55%)和ABO*cis-AB.01(9.71%)。关联分析提示,ABO亚型等位基因所对应的表型可与首次检测的表型不一致,即一种基因型可对应多种表型。结论:中国人群血型ABO亚型检出率为3.71/万,B(A)表型是中国人群中最常检出的ABO亚型,B3和Bx相关的亚型次之;较常检出的亚型等位基因则是ABO*BA.04、ABO*BA.02和ABO*cis-AB.01。

基因分型结合血清学方法鉴定ABO血型亚型

目的准确鉴定红细胞ABO亚型。方法采用血清学方法鉴定12例ABO血型正反定型不符标本,结合PCR-SSP基因定型方法作检测鉴定,并对其中9例作基因测序确定基因型。结果 ABO基因分型结果与血型血清检测结果一致率为66.67%（8/12）;其余不相符的4例：2例为B（A）,1例为Cis AB,1例为新基因（新基因血型血清学结果不确定,PCR-SSP结果为A1/O02,测序结果为A102/O02型）。结论 ABO血型基因分型技术结合血清学定型可用于ABO亚型鉴定及ABO血型的正确定型。

ABO变异型B305血型基因亚型的鉴定及序列分析

目的:研究和鉴定1例ABO变异型B3亚型的分子生物学特性。方法:在标准血型血清学方法鉴定的基础上,采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)、ABO基因第6、7外显子PCR产物直接测序及克隆测序等方法进行ABO亚型基因分型和序列分析。结果:先证者红细胞含有弱B抗原,同时血清中含有抗-A抗体。PCR-SSP结果显示样本基因型为BO1。直接测序分析发现261del G,297A/G、425 T/C、526C/G、657C/T、703A/G、796C/A、803G/C和930G/A 8个位点杂合。克隆测序得到两个等位基因B305和O01。B305等位基因序列与B101等位基因序列比对仅第425位碱基为T>C突变,导致多肽链M142T替换。结论:α-1,3半乳糖基转移酶基因425位碱基T>C突变产生B305等位基因,导致B抗原表达减弱。

ABO亚型B(A)04的鉴定及分子机制研究

目的研究B(A)04血型的特性,为B(A)04血型的临床输血提供理论基础。方法应用血型血清学技术和基因分型技术鉴定B(A)04血型的特性,采用PCR方法扩增其ABO基因7个外显子、侧翼内含子,PCR产物采用直接测序和克隆测序方法,以确定B(A)血型的分子机制。结果血型血清学有相应的反应格局,患者正定型:A弱B,反定型:A1c 2+,Bc阴性,ABO基因测序发现第7外显子640位碱基发生A>G突变,导致214位蛋氨酸被缬氨酸替换,ABO血型基因型为ABO*B(A)04/O01。结论亚型或稀有血型的鉴定分析要慎重,必要时应用血型基因分型技术辅助定型,保障输血安全。

ABO变异型A102Bw33血型基因亚型遗传学鉴定

目的:对1例血清学检测为ABw亚型的样本进行了分子生物学研究及鉴定。方法:在标准血型血清学方法鉴定的基础上,采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP),ABO基因第6、7外显子PC R产物直接测序及克隆测序等方法进行ABO亚型基因分型和单倍型分析。结果:先证者红细胞含有A和B抗原,同时血清中含有抗-B抗体。PCR-SSP结果显示,样本基因型为A1B。直接测序分析发现,297A/G、467C/T、526C/G、657C/T、703A/G、803G/C和9306/A 7个位点杂合。克隆测序得到2个等位基因A102和Bw33。Bw33基因序列与B101基因比对仅第796位碱基为A>C突变,796C是A基因的特性。结论:796碱基A>C突变导致产生Bw33的表型,其血清中产生抗-B抗体。

无锡地区无偿献血者ABO亚型血型血清学及分子生物学特征研究

目的调查并分析无锡地区无偿献血者ABO亚型血型血清学及分子生物学特征。方法2016年5月~2019年6月,有19例无偿献血者标本经血型血清学初步判定为ABO亚型。14/19例标本进行分子生物学检测,其中11例同时采用PCRSSP(序列特异性引物聚合酶链反应)方法及DNA测序方法进行ABO基因检测,另3例仅采用了DNA测序方法检测。结果120118名无偿献血者中,用血型血清学方法检出ABO亚型的频率约为1.6/万,且B亚型数量多于A亚型;分子生物学检测获得Ael 02、A201、Bw27、Bel 03、Bw22、B 310、A217、CisAB 01、B(A)02九种ABO突变等位基因;3例标本在第1-7号外显子未见异常,发现1例新等位基因(GenBank:MT281528)。结论用血型血清学、PCR-SSP和DNA基因测序三种方法结合更能准确地鉴定ABO亚型。

青岛市胶州地区B(A)亚型患者的血型血清学及基因检测分析

目的调查并分析青岛市胶州地区某三级医院就诊患者B(A)亚型的血清学及分子生物学特征。方法2019年11月至2023年2月,12名患者血液标本经微柱玻璃珠法和盐水试管法ABO血型检测疑为AB亚型,进一步对其ABO基因第6、7外显子进行直接扩增、测序和分析,确定ABO等位基因型别。结果青岛市胶州地区26065名患者中共检测发现9例B(A)亚型,检出率为0.345‰(9/26065);9例B(A)亚型中,8例血清学反应表现A_(w)B,基因检测为BA.04基因与O基因杂合,1例血清学反应表现为ABw,基因检测为BA.04基因与A基因杂合。结论血型血清学结合基因检测可准确鉴定ABO血型,在AB_(w)血清学反应的个体中,有可能存在B(A)亚型等位基因。

α1,3-D-半乳糖基转移酶基因425C→T突变导致B3亚型分析

目的:探讨B3亚型及其家系成员的血型血清学特点及分子机制。方法:对B3亚型及其家系成员进行ABO血型血清学定型,血浆α1,3-D-半乳糖基转移酶活性测定,ABO基因第6、7外显子及其侧翼序列的PCR扩增,基因测序和克隆分析。结果:先证者血型血清学鉴定ABO血型为B3亚型,血浆中α1,3-D-半乳糖基转移酶活性<1,该家系中2份标本ABO基因序列与标准序列相比,在第7外显子存在c.425C→T的杂合突变,致α1,3-D-半乳糖基转移酶的第142位氨基酸由甲硫氨酸替换为苏氨酸,先证者ABO基因型为B305/O102,且能在家系中稳定遗传。结论:基因位点突变425C→T是导致B3亚型的分子遗传基础,DNA测序能够阐述ABO血型亚型的分子机制及其稳定遗传特性。

在1名幼儿及其家系中发现538C>T变异新B等位基因

目的对1名ABO血型正反定型不符的患儿及其家属做ABO血型血清学鉴定和基因检测以弄清原因。方法采用常规血型血清学方法检测患儿ABO血型,以PCR-SSP方法对患儿做ABO基因及ABO血型B亚型基因分型鉴定,并对ABO等位基因直接测序;最后对患儿做家系调查。结果血清学检测:患儿ABO血型为ABx亚型;ABO基因测序并将结果与NCBI网站数据库中ABO血型基因序列比对:患儿除有1个正常的A102基因外,还存在1个未见报道新的点突变型(538C>T)B型变异基因,该位点变异使得基因产物B糖基转移酶第180位氨基酸由精氨酸转变为半胱氨酸,使抗原表达减弱,改变了血型表现型;家系调查:患儿父亲、奶奶、姑姑都拥有相同的新型B变异基因。结论首次在中国汉族儿童中发现1例新的538C>T变异B型等位基因,该B变异基因具有家族遗传性;而且当它与O基因等位共存时,血清学表现型为正常B型,当它与A基因等位共存时,血清学表现出ABx亚型。

基因测序鉴定CisAB/B血型2例

目的探讨ABO血型鉴定中正反定型不一致时,采用基因测序方法鉴定血型的意义。方法对本血液中心在ABO血型鉴定时发现的无偿献血者正反定型结果不一致样本,采用试管法进行血型血清学分析和亚型鉴定;对血清学检测为ABO亚型的样本,再采用PCR-SBT方法对6、7外显子和部分内含子进行基因序列分析。结果 2例血清学鉴定为A亚型B的样本,经ABO基因测序确定基因型为Cis AB/B,分别为Cis AB01/B101和Cis AB05/B101。结论由于B基因的作用,Cis AB血型经血清学方法难以被发现并确定,基因测序有助于更准确地鉴定血型。

BW.03等位基因的鉴定及序列分析——附1例报告

目的对1例Bw血型的血清学及分子生物学特性进行分析。方法应用聚合酶链反应-序列特异性引物(polymerase chain reaction-sequence specific primer,PCR-SSP)和ABO等位基因第6、7外显子PCR产物直接测序方法进行ABO亚型基因分型。结果先证者红细胞未检测到B抗原,但血清中含有抗-A。PCR-SSP结果显示标本基因型为B/O2。直接测序分析发现c.297A>G、c.526C>G、c.657C>T、c.703G>A、c.721C>T、c.796C>A、c.803G>C和c.930G>A 8个突变,可推断为BW.03/O.02.01基因型。该序列与B.01基因序列比对仅在721位发生C>T的突变导致多肽链R241S替换。结论B等位基因c.721C>T突变产生BW.03等位基因,导致B抗原表达减弱。

罕见的AEL.05亚型等位基因的鉴定及家系分析

目的Ael是中国人群中1种较为常见的ABO亚型,其分子机理尚未完全阐明。本文对1例Ael亚型家系进行分子机制研究。方法在常规血型血清学鉴定的基础上,应用吸收放散法鉴定弱血型抗原;PCR-SSP方法进行ABO基因初步分型;PCR方法扩增ABO基因的7个外显子;对扩增产物进行直接测序和克隆后测序分析。构建3D分子模型,并就突变对α-1,3-N-乙酰半乳糖胺基转移酶稳定性改变(ΔΔG)的影响进行预测。结果吸收放散试验证明患者红细胞上存在弱A抗原,血清学定型为典型的Ael表型;ABO基因初步分型为A1/O型,测序发现第7外显子767位碱基T>C突变,导致A糖基转移酶第256位异亮氨酸被苏氨酸替换,血型基因型为ABO*AEL.05/O.01.01。分子模建与分析提示突变导致蛋白局部氢键作用力改变不显著,但突变导致ΔΔG值的升高,表明蛋白稳定性降低。结论α-1,3-N-乙酰半乳糖胺基转移酶p.I256T突变可能通过降低了酶的稳定性导致Ael表现型。

B糖基转移酶p.R168W突变导致B_(el)亚型的分子机制研究

目的对B糖基转移酶R168W突变导致B_(el)亚型的分子机制进行研究。方法免疫血清学、ABO基因型SSP-PCR检测及直接测序患者及其家系成员ABO基因第6、第7外显子测序。构建3D分子模型,并就GTB蛋白突变对结构影响进行预测。结果经吸收放散试验在患者红细胞上检出弱B抗原,血清中未检测到抗-A、检出抗-B;患者女儿血清学结果呈正常B型。SSP-PCR结果证实患者及其女儿ABO血型基因型为O1/B和B/B型。对ABO基因第6、第7外显子测序,患者及其女儿带有c.502C>T突变,即B_(el)03等位基因,导致氨基酸置换R168W。分子模建与分析提示突变可能降低了蛋白结构的稳定性,影响了B转移酶的总体活性。结论 ABO基因c.502C>T突变通过减低GTB的稳定性导致患者出现B_(el)表型。

Bx02等位基因的鉴定及其编码GTB酶3D建模

目的对2例ABO正反定型不一致的血液标本进行鉴定并探索其分子机制。方法采用血清学标准方法对2例ABO正反定型不一致的标本进行ABO血型鉴定,采用PCR-SSP技术进行ABO基因分型,并对ABO基因外显子6和7进行直接测序和克隆测序。应用Pymol软件模拟3D结构模型并预测GTB蛋白突变对结构影响。同时采集先证者父亲的血液标本进行检测。结果先证者红细胞检测有B抗原,血清中有抗-B。PCR-SSP基因分型结果为O1/B。直接测序显示第6外显子261delG/G、297A/G,第7外显子526C/G、646A/T、657C/T、681A/G、703A/G、771C/T、796A/C、803C/G、829A/G、905A/G、930A/G和1096A/G杂合,基因型为Bx02/O02。克隆测序结果与ABO*B.01等位基因相比较,905位存在A>G突变。3D结构模拟提示Asp302Gly可能造成GTB酶活性或功能改变。结论鉴定了2例Bx02等位基因,血清学和基因分型的方法联合检测对于准确鉴定ABO血型有重要意义。

A_x04亚型的血清学特征及基因序列分析

目的分析A_x04亚型的血清学特性及分子机制。方法对1例Ax亚型在标准血型血清学方法鉴定的基础上,采用聚合酶链反应-序列特异性引物（PCR-SSP）和ABO基因第6、7外显子PCR产物直接测序等方法进行ABO亚型基因分型。结果先证者红细胞含有A抗原,同时血清中含有抗-A。PCR-SSP结果显示样本基因型为A/O1。直接测序分析发现261G/del G和646T/A和681G/A杂合位点。单倍型序列分析得到2个等位基因A_x04和O01。A_x04基因序列与A101基因序列比对在646 T〉A的突变和681G〉A突变,导致多肽链F216I替换。结论α-1,3-N-乙酰半乳糖胺转移酶基因646T〉A突变导致A抗原表达减弱。

罕见B(A)亚型的血清学特征及基因序列分析

目的:分析罕见的B(A)亚型血清学特征及基因测序结果。方法:选取2013年3月至2021年6月温州医科大学附属第二医院的8例ABO血型正反定型不一致或抗原减弱的标本,分别采用序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)法检测ABO基因分型,直接测序法进行基因测序分析,聚凝胺法与A型、B型、AB型、O型供血者进行交叉配血。结果:8例标本血清学正定型结果表现为A弱B型,基因测序表现为B(A)型,其中基因型B(A).04/O.01.022例、B(A).02/O.01.022例、B(A).04/O.01.012例、B(A).04/A.01.011例、B(A).02/O.01.011例;与O型、B型供血者交叉配血主测均阴性,与AB型供血者交叉配血次测阴性。结论:罕见的B(A)亚型基因型以B(A).04、B(A).02为主,其血清学表现特征“A弱B强”。

两例ABO变异型Bw亚型的分子遗传学分析

目的研究ABO变异型Bw亚型的分子生物学特性。方法通过标准血型血清学方法鉴定2例Bw亚型，采用聚合酶链反应一序列特异性（polymerasechainreactioIsequencespecificprimer，PCR-SsP）技术进行ABO基因分型，特异性扩增B基因第6～7外显子，PCR产物纯化后直接测序分析。结果血清学鉴定2例Bw亚型，PCR-SSP结果显示样本基因型为B／（）2。B基因直接测序结果发现1例与B101序列比对第7外显子存在721C〉T突变，导致多肽链R241S替换；另1例与B101比对第6外显子存在278C〉T突变，导致多肽链P93L替换。结论发现Bw03、Bw12亚型各1例，其表达B抗原的强弱存在差异。

中国人群ABO亚型中一个新的Ax等位基因的鉴定

目的Ax是一种罕见的ABO亚型,其分子机理尚未完全阐明。本文以一个Ax亚型家系和一个无关的Ax亚型献血者个体为对象,研究中国人群Ax亚型的分子基础。方法ABO血清学定型、血浆N-乙酰-D-半乳糖胺基转移酶(A酶)活性测定、ABO基因7个外显子及其侧翼序列的PCR扩增、基因克隆和测序分析。结果DNA克隆和测序分析显示,家系先证者和无关献血者个体的ABO基因分别为A/O01和A/O02基因型,在第7外显子均存在426G>C杂合突变,导致N-乙酰-D-半乳糖胺基转移酶的氨基酸发生M142I改变。在120个正常样本中未检出此突变。结论ABO基因426G>C突变导致的N-乙酰-D-半乳糖胺基转移酶第142位氨基酸置换改变了酶的保守区域,从而降低了酶的催化活性,导致Ax表现型。本突变为国际首次报道。

三例罕见ABO变异型Bw亚型的基因鉴定及序列分析

目的对3例ABO变异型Bw亚型进行基因鉴定及序列分析。方法采用常规血清学检测ABO血型,并应用Sanger测序进行ABO基因鉴定。结果3例ABO血型鉴定均符合Bw亚型,基因分型分别为ABO*Bw.11/0.01.02、ABO*Bw.12/0.01.01、ABO*Bw.34/A1.02,测序发现分别存在c.695T>C变异致多肽链Leu232Pro替换,c.278C>T变异致多肽链Pro93Leu替换,c.889G>A变异致多肽链Glu297Lys替换。结论本研究分别发现了Bw11、Bw12、Bw34亚型各一例。基因检测可作为血清学结果的补充确定ABO血型的亚型。

ABO变异型基因c.425 T>C突变致B抗原弱表达的鉴定分析

目的探讨1例ABO变异型基因c.425 T>C突变对B抗原弱表达的鉴定分析。方法采用凝集法鉴定ABO血型,采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)、ABO亚型基因分型等技术进行基因鉴定和序列分析。结果先证者红细胞上含弱B抗原,血清中含抗-A抗体;血型基因型为B01,克隆测序等位基因为B305和O01;B305等位基因序列与标准序列相比发现c.425 T>C突变,引起多肽链P.Met 142Thr替换。结论ABO变异型基因c.425 T>C突变产生B305等位基因,引起B抗原弱表达。