ABO基因第7外显子c.539G>C突变致A_(2)B亚型结果分析

目的:探讨ABO基因第7外显子c.539G>C突变致A_(2)B亚型结果分析。方法:采用试管凝集法检测ABO血型,采用Sanger测序法进行基因测序及序列分析。结果:4例先证者红细胞为A弱B表型,根据血清学特征定义为A_(2)B血型,先证者1、3、4血清中无抗-A_(1)抗体;先证者2血清中存在抗-A_(1)抗体;4例血型基因型为ABO^(*)A2.08/ABO^(*)B.01,测序结果与A102基因序列比对,A208在c.467C>T和c.539G>C位发生突变,导致多肽链P156L和R180P替换。结论:α-1,3-N-乙酰半乳糖胺转移酶基因c.539G>C突变产生A208表型。

山东省ABO亚型等位基因的分析研究

目的对山东省内医疗机构及血站送检的疑似ABO亚型的标本进行血清学、ABO基因测序及单倍型序列测定,分析山东省人群ABO亚型等位基因的分布和分子机制。方法血清学检测疑似为ABO亚型的无偿献血者标本239例及临床就诊患者标本701例,共940例采用PCR-SBT方法进行ABO基因序列分析;采用单克隆测序方法检测单体型;软件分析比对测序结果,确定该标本的等位基因型。结果分子测序发现山东省A基因亚型等位基因12种,以ABO*A2.05最为常见;B基因亚型等位基因15种,以ABO*BW.03最为常见;复合型ABO糖基转移酶基因6种,以ABO*BA.04最为常见;嵌合体血型6例。结论山东省B亚型的数量和种类均多于A亚型;A亚型以ABO*A2.05和ABO*A3.07最为常见;B亚型以ABO*BW.03和ABO*BW.27多见;ABO*BA.04和ABO*cisAB.01等位基因是最常见的复合型ABO糖基转移酶等位基因类型。

25例B亚型/AB亚型的ABO基因序列分析

目的探讨25例B亚型/AB亚型标本的分子生物学机制。方法应用PCR-SSP对血型血清学确认为B抗原减弱的标本进行ABO*B基因检测或应用Sanger一代测序技术对ABO基因的第6-7外显子或第1-7外显子测序;对最终无法定型的标本进一步用PacBio:SMRT三代测序技术进行检测。结果25例B亚型/AB亚型标本均经过基因序列分析,共发现7种已知的ABO*B等位基因,分别为ABO*BW.27(3/25,12.00%)、ABO*BW.03(5/25,20.00%)、ABO*B3.03(2/25,8.00%)、ABO*BEL.03(1/25,4.00%)、ABO*BW.07(7/25,28.00%)、ABO*B3.05(1/25,4.00%)、ABO*BW.12(1/25,4.00%);5种未知的ABO*B等位基因,其中已发表但未被ISBT收录的2例,分别为ABO*B.01 with c.28+5885C>T、ABO*B.01 with c.28+5875C>T,另外3例为本研究首次报道的ABO*B新等位基因,分别为ABO*B.01(with c.3G>C)、ABO*B.01(with c.28+5862A>G)、ABO*B.01(with c.204-3C>G),均已被Genebank收录并公布。结论研究阐释了25例B亚型/AB亚型的分子生物学机制,并发现了5例ABO*B新等位基因。该研究丰富了ABO*B等位基因基因库,为更好地制定输血策略提供了理论依据。

无偿献血者人群中ABO亚型漏检及人群频率研究

目的探讨无偿献血者人群中弱ABO亚型的漏检及真实人群频率。方法收集2009年1月-2017年12月上海地区2945643(人)份无偿献血者标本,使用全自动血型仪器(微量板法)初筛及复核其ABO血型;对疑似ABO亚型标本使用试管法、吸收放散法等确证。结合2009-2017年所有ABO亚型献血者人数及理论漏检率,统计得出ABO亚型的真实频率。结果2009-2017年上海地区无偿献血者ABO亚型检出率为0.031%(927/2945643);对其中192位ABO亚型重复献血者统计分析显示,所有ABO亚型的理论漏检率为27.81%。纳入漏检的亚型后,本组无偿献血者人群中ABO亚型的理论频率为0.044%。结论目前献血者的血型检测漏检了较多的ABO亚型;本研究获得了更为接近真实情况的ABO亚型人群频率。

36例ABO血型亚型检测及血清学分析

目的对本院2008～2011年36例ABO血型亚型患者及献血者进行血型血清学分析,以探讨ABO亚型的分布状况及亚型患者的临床输血安全。方法采用输血相容性检测实验室全自动血型/配血系统、试管法检测ABO正反定型,通过检出血清中不规则抗-A、抗-B,吸收放散试验等方法进行ABO血型亚型的鉴定。结果 36例ABO血型亚型中有12例A亚型,23例B亚型和2例cisAB亚型。结论准确鉴定ABO血型亚型对于降低亚型患者输血治疗风险有重要意义。

B抗原减弱表型的表型频率与ABO基因分析

目的对血清学表现为B抗原减弱的血液样本进行筛查和ABO基因分析,了解其分布特征和分子遗传学基础。方法筛查并收集B抗原减弱(与抗-B血清试管法凝集强度中等)的样本,采用血型血清学方法进行鉴定分析,采用直接测序的方法对ABO基因的第6、7外显子及第6内含子进行序列分析,对可追踪家庭进行家系分析。结果从241 952份样本中检出13例B抗原减弱表型,其中B型9例、AB型4例;所有样本的红细胞与抗-H反应均增强;其中2例可检出不规则抗-B;ABO基因型分别为A102/B w12(1例)、B101/B101(2例)、B101/O02(3例)、A102/B101(3例)、B101/O01(4例)。在1例基因型为B101/O01个体的家系成员(父亲)中检出相同表型。结论该类表型在B型人群中的频率约为1∶7 000;除1例样本的B等位基因存在278C>T突变(B w12)外,其余样本在第6、7外显子和第6内含子中均未检出突变;ABO基因酶催化活性区域编码序列以外的基因变异,可能是导致B抗原减弱的原因之一。

常见ABO抗原和稀有A2抗原同步基因分型的研究

目的建立人类ABO血型系统的同步基因分型法研究ABO血型。方法采用PCR-SSP技术,设计合成13对序列特异性引物,摸索最佳退火温度,通过调整引物浓度、Mg2+浓度等,使ABO系统等位基因在同一条件下进行同步扩增和扩增产物在同一凝胶中进行同步电泳;使用此方法,检测34例已知血清学ABO血型的与20例已知序列的A2亚型标本。结果用基因分型法检测出的ABO常见基因和A2基因,与已知血清学ABO分型结果相符合。结论该ABO基因分型方法适合中国人ABO基因常规鉴定与研究。

基因分型结合血清学方法鉴定ABO血型亚型

目的准确鉴定红细胞ABO亚型。方法采用血清学方法鉴定12例ABO血型正反定型不符标本,结合PCR-SSP基因定型方法作检测鉴定,并对其中9例作基因测序确定基因型。结果 ABO基因分型结果与血型血清检测结果一致率为66.67%（8/12）;其余不相符的4例：2例为B（A）,1例为Cis AB,1例为新基因（新基因血型血清学结果不确定,PCR-SSP结果为A1/O02,测序结果为A102/O02型）。结论 ABO血型基因分型技术结合血清学定型可用于ABO亚型鉴定及ABO血型的正确定型。

改良微柱凝胶法检测ABO变异型血型

目的:建立用于检测ABO变异型血型的改良微柱凝胶法。方法:选取2016年11月至2018年5月温州医科大学附属第二医院育英儿童医院、温州市人民医院和瑞安市人民医院ABO血型凝集强度改变或正反定型不一致的患者12例。采用血型血清学检查和血型基因检测结合临床表现确认标本ABO血型;对已知血型标本用微柱凝胶法复核;用1% O型、A3亚型和A抗原减弱红细胞调整微柱凝胶法离心方式建立改良微柱凝胶法,并对全部标本进行检测。结果:12例标本中A3亚型1例,B(A)型3例,类孟买型3例,ABO抗原减弱5例;微柱凝胶法和盐水试管法检测敏感度相似,12例标本中只检出2例,检出比例为2/12;选定改良微柱凝胶法的离心方式为900 r/min离心2 min、4 ℃孵育30 min、1 800 r/min离心3 min;用改良微柱凝胶法检测12例标本,1例不能检出,检出比例为11/12。结论:本研究建立的改良微柱凝胶法通过改变微柱凝胶血型卡的离心方式、增加孵育时间和孵育温度,提高了检测敏感度,适合ABO变异型血型的筛检。

15例ABO疑难血型基因检测分析

目的利用ABO血型基因分型技术辅助疑难血型的鉴定。方法收集2016年4月至2018年6月北京医院15例血型正反定型不符患者的外周静脉血样,应用血型血清学方法结合聚合酶链反应-特异性序列引物(polymerasechain reaction-sequence specific primer, PCR-SSP)法进行ABO基因分型,并对其中7例做基因测序确定基因型。结果15例疑难血型的ABO基因分布为1例A/B、1例A/O2、3例B1/O01、1例Bel09/O02、1例CisAB01/O2、1例Bw12/O01、1例A102/Bw12、1例B(A)04/O2、1例B(A)02/B、2例Bel03/O、1例Ael05/O;1例为新基因,测序结果为797位置发生突变,根据其他位点的突变具有A102/O01特点。结论 ABO血型基因分型技术结合血清学定型可用于疑难血型的准确定型。

中国人群血型ABO亚型的分子基础研究

目的:对我国人群血型ABO亚型的表型与基因型进行关联性研究,以探讨ABO亚型的分布特点及分子背景。方法:采用血清学方法对2014年7月至2019年6月间1545505名献血者和116209例受血者中检出的血型ABO亚型进行表型鉴定,用直接测序或克隆后测序分析ABO基因的DNA序列。结果:血型血清学鉴定在1545505名献血者和116209例受血者中共检出ABO亚型617例,检出率为3.71/万,检出率最高的表型为B(A)(0.066‰),其次是B3(0.045‰)和Bx(0.039‰)。544例ABO亚型样本经基因测序鉴定出42种ABO亚型等位基因,其中ABO*BA.04的检出构成比最高(25.20%),其次为ABO*BA.02(11.55%)和ABO*cis-AB.01(9.71%)。关联分析提示,ABO亚型等位基因所对应的表型可与首次检测的表型不一致,即一种基因型可对应多种表型。结论:中国人群血型ABO亚型检出率为3.71/万,B(A)表型是中国人群中最常检出的ABO亚型,B3和Bx相关的亚型次之;较常检出的亚型等位基因则是ABO*BA.04、ABO*BA.02和ABO*cis-AB.01。

北京地区献血人群ABO亚型研究

目的探讨北京地区献血人群中ABO亚型分布特点及在ABO亚型中不规则ABO抗体的发生率。方法应用全自动血型分析仪对北京市红十字血液中心2009-2012年的1020404份献血者血样进行ABO定型,对于正反定型不符的血样采用试管法正反定型、吸收放散等血清学试验及分子生物学分析,并分类。结果检出511份ABO亚型血样,最常见亚型为A2B(242份),占人群总数的2.37/万,确认其他ABO亚型(包括类孟买型)共计269份,占人群总数的2.64/万。ABO亚型中分别检出不规则抗-A、抗-B(同时存在A抗原和抗-A抗体或B抗原和抗-B抗体)205份,分别占84.9%(174份)和15.1%(31份)。结论北京地区中国人群中B亚型多于A亚型;A亚型产生抗-A抗体的比例明显多于B亚型产生抗-B抗体;ABO血型定型中存在的不规则抗体现象提示ABO亚型的存在;各种AB亚型的检出率明显高于期望值,提示A、B基因在遗传过程中存在相互作用。

ABO血型系统中1种新A2等位基因的发现及在中国福建地区汉族人群中A2亚型调查

本研究探讨ABO血型系统中A2亚型在中国福建地区汉族人群中的分布频率及其分子机制。采用血清学方法鉴定1例A2亚型标本,PCR扩增ABO基因第6、7外显子及第6内含子,PCR产物经割胶纯化后直接测序,并对含有突变位点的扩增片段进行单倍体序列分析;用抗-A1单克隆血清筛查福建地区3 176例A或AB型汉族无偿献血者。结果表明,该例A2亚型的基因型鉴定为A/Olv,与A101相比,其第7外显子存在467C>T和607G>A突变,分别导致多肽链P156L和E203K替换;经标准血清学方法检测,3 176例随机A或AB型献血者(同时期健康献血者约16 527人)未检出A2亚型。结论:首次发现467C>T和607G>A组合的A2等位基因,A2亚型在福建地区汉族人群中罕见。

15例ABO亚型的血型血清学分析

目的了解ABO亚型在怀化地区的分布情况。方法对正反定型不符及疑难配血的标本通过红细胞抗原、血浆抗体及唾液中血型物质检测以及红细胞吸收放散试验进行亚型鉴定。结果 15例可疑标本共检出A亚型4例,B亚型11例,亚型种类为A2、A3、Ael、B3、AB3和Bx。结论鉴定血型亚型对临床安全输血至关重要。

静脉丙种球蛋白治疗新生儿ABO溶血症对免疫功能影响的临床观察

目的 通过新生几ABO溶血病使用静脉丙种球蛋白（IVIG）前后的免疫指标变化观察，观察IVIG使用对新生儿免疫功能的影响。方法 随机将新生儿ABO溶血症患儿分为两组，常规＋IVIG治疗为观察组，常规治疗为对照组，IVIG治疗剂量为800～1000mg／kg，分别测定使用IVIG前，使用IVIG后2d、28d、2个月体内IgG、IgM、IgA及T细胞亚群数值并与对照组对照。结果 观察组IgG、IgM在用药后2d、IgA在用药后28d与对照组比较有统计学意义，其余指标两组对照无统计学意义。CD3、CD8、CD4／CD8在治疗前后与对照组对照无统计学意义（P〉0．05）；CD4在用药前、用药后28d、2个月与对照组无统计学意义（P〉0．05），而在用药后2d与对照组相比有统计学意义（P〈0．05）。结论 IVIG治疗新生儿ABO溶血症剂量在800～1000mk/kg时，对新生儿的IgG、CD3、CD4、CD4／CD8数值不受影响，而在半衰期内可致IgM、IgA合成减少．CD4数值下降：提示有免疫抑制现象发生。

ABO变异型B305血型基因亚型的鉴定及序列分析

目的:研究和鉴定1例ABO变异型B3亚型的分子生物学特性。方法:在标准血型血清学方法鉴定的基础上,采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)、ABO基因第6、7外显子PCR产物直接测序及克隆测序等方法进行ABO亚型基因分型和序列分析。结果:先证者红细胞含有弱B抗原,同时血清中含有抗-A抗体。PCR-SSP结果显示样本基因型为BO1。直接测序分析发现261del G,297A/G、425 T/C、526C/G、657C/T、703A/G、796C/A、803G/C和930G/A 8个位点杂合。克隆测序得到两个等位基因B305和O01。B305等位基因序列与B101等位基因序列比对仅第425位碱基为T>C突变,导致多肽链M142T替换。结论:α-1,3半乳糖基转移酶基因425位碱基T>C突变产生B305等位基因,导致B抗原表达减弱。

10例肿瘤导致ABO血型系统抗原减弱病例分析

探讨肿瘤因素导致ABO血型系统抗原减弱所引起的定型困难,解放军总医院2002年以来,在血型鉴定时发现10例肿瘤患者血标本,正向定型出现弱凝集或不凝集;反向定型正常,正反定型不一致。其自身对照为阴性,且排除假凝集所致。通过吸收放散、唾液型物质中和试验、H抗原强度等实验检测弱抗原,并对患者进行随访,在患者病情缓解后重新进行血型鉴定。结果表明10例受检者红细胞上确有弱抗原存在,其中3例血清学实验呈现较明显亚型特征,但肿瘤经过治疗缓解后,亚型特征逐渐减弱甚至消失,定型恢复正常。说明某些肿瘤可以导致ABO血型系统抗原减弱,出现正反定型不一致,血清学呈现亚型特征,应综合病情、输血史、家系调查及特殊血清学检查来确定血型,并与亚型相鉴别。