运用多重PCR-直接测序法检测ABO基因型及其遗传多态性

根据ABO基因座第6和7外显子9个SNP位点设计引物,复合扩增后直接测序,根据测序结果判定不同物证检材ABO基因型及其在藏族群体中的多态性分布。成功地检测出经过不同方法处理的血痕、毛发、口腔拭子、骨骼、混合斑等101例腐败、降解及微量检材的ABO基因型,结果与免疫血清学分型一致,且该方法具有灵敏度高、特异性好、操作简单、结果准确、客观及能够发现新等位基因等优点。对80名青海藏族无关个体的调查表明,ABO基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡,杂合度H为0.675,多态信息含量PIC为0.672,个人识别力DP值为0.874,非父排除率PE值为0.391,偶合度I为0.126;青海藏族ABO等位基因频率O>B>A,且O等位基因频率高达0.6125。多重PCR-直接测序法检测ABO基因型适用于法医学不同来源的样本,提高了ABO血型系统的个体识别能力;ABO基因型在青海藏族人群中的分布具有较高多态性,可用于法医学个体识别及群体遗传学研究。

运用二重PCR和DNA芯片技术检测ABO基因型

目的以玻片为载体,用寡核苷酸探针杂交技术检测ABO基因型。方法根据ABO基因座外显子6和外显子7的3个SNP点的序列分布特征设计4条寡核苷酸探针,制成分型芯片。将待测样品DNA用末端标记了Cy5的引物进行二重PCR扩增,产物与芯片上的探针进行杂交,根据杂交产生的荧光信号确定样品的ABO基因型。结果利用ABO芯片,可对血斑、毛发等微量检材进行ABO基因型检测。对115名汉族无关个体的调查表明,ABO基因型的分布符合Hardy-Weinberg平衡,等位基因杂合度观察值和期望值分别为0.591、0.616,多态信息含量为0.544,二联体和三联体非父排除率分别为0.188、0.334,个体识别能力为0.777。结论通过DNA芯片检测ABO基因型的技术适用于法医学样本,可满足高通量的检测需求。

单管实时PCR快速检验ABO基因型

目的建立快捷特异的ABO基因分型检测方法。方法根据ABO基因结构特点,设计特异性引物和四色双链探针,采用单管实时PCR方法检测ABO基因,结果与传统免疫学方法相对比。结果该方法可检出常见的3个等位基因,区分常见的6种基因型,全部检测过程可在100min内完成。110例中国人的随机个体定型结果与传统免疫学方法一致。结论实时PCR法进行ABO基因分型,简便快捷,灵敏度高,可以有效地为侦查破案服务。

改良AS-PCR引物对ABO基因分型的影响

目的通过改进AS-PCR引物,提高ABO基因型分型正确率。方法把引物P13′末端第5位碱基由G改为C,其分型图谱与改进前进行对比分析。结果改进AS-PCR引物后,OO型非特异产物减少,避免了将OO型误判为AO型。结论引物P13′末端第5位碱基由G改为C后,可有效防止OO型被误判为AO型。

血型血清学结合PCR-SSP基因分型法在新生儿ABO血型鉴定中的应用

目的建立ABO血型基因的PCR检测方法,评价常规ABO血清学正定法用于新生儿ABO定型的可靠性,探讨血型血清学结合PCR-SSP基因分型法在新生儿ABO血型鉴定中的价值。方法采用血清学方法鉴定110例新生儿血型,结合PCR-SSP基因分型方法做检测,并对其中4例PCR-SSP方法未明确血型的通过测序确定ABO基因型。结果110例新生儿ABO血型标本,血清学检测方法中,2例抗原强度较弱,无法诊断血型,通过PCR-SSP方法诊断为AB型;PCR-SSP检测方法中,106例确定基因型,PCR-SSP方法未明确血型的4例标本通过测序确定基因型,所有基因分型结果与血清学检测结果一致率为100%;新生儿ABO血型正反定型不符率为63%,A、B、O型正反定不符率比较,P>0.05。结论ABO血型基因分型结合血清学分型可用于新生儿ABO血型鉴定,一定程度上可弥补血清学方法的不足。

荧光标记的ASP-PCR法对ABO基因分型的研究

目的建立一种方便准确的ABO基因分型检验方法。方法选取ABO基因外显子6和7上的3个位点nt261、nt297和nt803,分别对第6和7外显子进行扩增,并对扩增产物进行测序得出样本的基因型;然后用荧光标记的等位基因特异性引物对已知基因型的样本进行扩增,并用3130遗传分析仪进行电泳分析。结果该方法检出的基因型与测序得出的基因型完全一致。结论等位基因特异性引物法分型结果准确,特异性高,可用于法医学中对犯罪嫌疑人的筛查。

ABO基因分型的等位基因特异性引物消耗法

目的建立一种新的ABO基因型分型的等位基因特异性引物消耗法(CASPA)。方法根据ABO基因碱基序列中的第261、297、803nt3处多态性位点设计6条特异性引物及1条公用引物,采用CASPA法鉴定146名中国汉族无关个体血液斑样品的ABO基因型。结果146名中国汉族无关个体血液斑样品中检出AAb、AB、AO1、BOv、O1Ov、AA、BB、O1O1、BO1等9种基因型,结果明确,其基因频率分布符合Hardy-Weinberg平衡。结论ABO基因型CASPA分型方法为ABO血型的鉴定提供了一个新的检测方法。

PCR-RFLP方法鉴定ABO血型基因型

ABO基因中几个碱基的替换、单碱基缺失导致A、B、O三种等位基因的产生,可使红细胞膜表面带有不同抗原,进而形成四种血型表型。根据三种等位基因关键位点的不同,采用PCR-RFLP方法扩增DNA片段并进行特异性酶切,根据酶切结果可以初步判断基因型,再通过测序的方法验证酶切结果。本实验对笔者和另一名同学进行了ABO基因型鉴定,结果显示,PCR-RFLP结果与测序结果相一致。

人类ABO血型基因型检测的研究

ABO血型一直采用血清学方法鉴定ABO血型的基因产物,结果可靠、准确,但不能检测出基因型。本文通过ABO血型基因中几个不同位点的差异,设计出特异性引物,采用PCR-SSP技术特异性地扩增A、B和O基因,该方法简单、快速,可鉴定出6种ABO血型基因型AB、AA、AO、BB、BO、OO。本文利用该技术对240名献血者进行了ABO血型的基因型多态性分析,结果p基因频率0.2292,q基因频率0.2125,r基因频率0.5683。

B(A)血型的血清学特点及基因分析-附1例报告

目的分析B(A)血型的血型血清学及分子生物学鉴定特征。方法采用血型血清学方法鉴定ABO血型表型,基因测序法鉴定ABO血型基因型。结果血型血清学鉴定ABO血型正反定型不一致,正定型A抗原弱凝集,B抗原强凝集,H抗原凝集强度与正常Oc相同,反定型检出弱抗-A1,考虑A_(2)B或A_(亚)B型;ABO基因第6、7外显子进行正反直接基因测序,第6外显子有ABO*O.01.02等位基因,第7外显子存在独特的单碱基c.700C>G变异,可导致p.Pro234Ala改变,证实该患者基因型为ABO*BA.02,血清学表型为B(A)型。结论血型血清学鉴定为A_(2)B型或A_(亚)B时应进一步采用分子生物学分型确定是否为B(A)型,本例经基因测序分型鉴定为罕见的B(A)/O 02,基因型为ABO*BA.02/O.01.02。

B(A)血型的血清学特点及基因分析—附1例报告

目的探讨1例B(A)血型的血清学特点,及采用基因测序技术对B(A)血型进行鉴定。方法采用血型血清学技术检测ABO血型表型,采用直接测序和克隆测序方法确定其ABO基因型。结果血清学结果正反定型不符,正定型为AB型,A抗原较弱,H抗原较正常B型明显增强;反定型血浆中有较弱的抗-A1;对ABO基因第6、7外显子进行基因测序,第6外显子有O_(02)等位基因,第7外显子存在640A>G突变,证实为B(A)_(04)等位基因,基因型确定为B(A)_(04)/O_(02)。结论血型确定为B(A)血型,进一步基因型鉴定为罕见的B(A)_(04)/O_(02)。

ABO血液基因型引物特异性PCR体系的构建及在1个B_(w11)亚型家系分析中的应用

目的构建1个简单、有效,用于ABO基因分型的AS-PCR体系,及基于AS-PCR体系的PCR测序方法,并将此方案用于1个B亚型家系分析。方法参照ABO血液基因型cDNA的261,297,467和803位点,通过设计针对这些位点的AS-PCR引物构建可用于ABO血液基因型分型的AS-PCR体系,并将该AS-PCR体系应用于1个B亚型家系进行分析,并依据其分析结论设计PCR测序方法,以进行单体型分型。结果该家系成员母亲和两名子女的基因型分别为O01Bw11、O01Bw11和O02Bw11。结论 AS-PCR体系和PCR测序相结合的方案,操作简单、耗时短、结果准确,可用于ABO亚型的基因型分型。

Ax基因致血清型与基因型不符的家系遗传研究——附1例报告

目的对一家系ABO血型不符合遗传规律的原因进行分析研究,为今后临床类似问题提供参考依据。方法采用血清学方法分析ABO表型,采用DNA直接测序方法检测ABO基因的第6、7外显子序列,分析家系ABO血型不符合遗传规律的原因。结果血清学鉴定为父亲B型,母亲O型,孩子AB型。DNA直接测序结果:父亲Bw14(B110)/O01,母亲Ax26/O02,孩子Bw14(B110)/Ax26。表明母亲的Ax26基因没有表达A抗原。结论 Ax等位基因在不同杂合状态的个体中会呈现出不同血清表型。

PCR-SSP法检测胎儿、新生儿ABO血型

目的 研究用PCR SSP法鉴定胎儿、新生儿血型及基因型。方法 用PCR SSP法检测 5 6例 16周以上孕妇的胎儿、新生儿脐血红细胞基因型 ;用常规法检测双亲及胎儿、新生儿血红细胞ABO血型。结果 用PCR SSP法检测出全部 5 6例脐血ABO血型及基因型 ;PCR SSP法检测出的子代血型与由父母血型按孟德尔遗传规律推测的子代血型符合率达 10 0 % ;用常规法检测脐血ABO血型 ,检出率为 87.5 %。结论 PCR SSP法检测子代ABO血型方法可靠 。

PCR-SSP法在ABO疑难血型鉴定中的应用

目的采用PCR-SSP法检测ABO基因型。方法 ABO血型血清学正反定型不符样本10个,用PCR-SSP法检测其基因型。结果 10个疑难血型标本PCR-SSP法均得出明确的ABO血型结果。结论 PCR-SSP法检测ABO血型方法可靠,可应用于临床输血。

Bel亚型新等位基因c.620T>C 1例的分子研究

目的对1例ABO血型Bel亚型新等位基因(c.620T>C)先证者进行分子生物学研究,以揭示该突变对α-1,3-半乳糖苷转移酶(GTB)结构的影响。方法选取2023年2月11日于郑州大学第一附属医院输血科就诊的1例先证者为研究对象。首先采用血清学方法进行ABO表型的鉴定,接着对ABO基因的7个外显子进行直接测序,进一步采用单倍体特异性引物进行单链测序,最后用Modeller软件对突变的GTB进行同源建模,并用PyMOL软件分析突变对GTB空间结构的影响。结果先证者血清学表型为Bel亚型,直接测序发现了1个新的突变位点c.620T>C,导致多肽链发生p.Leu207Pro氨基酸替换。结合单链测序,最终确定基因型为ABO*BELnew/ABO*O.01.02。蛋白质三维结构建模显示,与野生型相比,脯氨酸与p.Gly272之间的1条氢键距离变大,另1条氢键消失。结论上述研究鉴定出1例新的B等位基因突变c.620T>C(p.Leu207Pro),该突变影响了GTB空间结构的稳定性,酶的活性减弱导致了B抗原表达减弱,血清学表现Bel亚型。

PCR-SSP法检测羊水细胞A^(1、2)、BO^(1、2)血型基因型

目的 通过PCR -SSP法检测羊水细胞A1、2 、BO1、2 血型基因型 ,产前诊断胎儿ABO血型。方法 用PCR -SSP检测 5 6例孕 16w以上孕妇羊水细胞ABO血型基因型、用常规方法检测双亲及其胎儿或新生儿脐血ABO血型。结果 (1) 5 6例羊水细胞用PCR -SSP法均检测出ABO血型基因型及其分型 ;(2 )用常规血型检测方法检测脐血红细胞ABO血型抗原检出率为 87 5 % ;(3)PCR -SSP法检测出羊水细胞ABO血型与父母血型按孟德尔遗传规则测出的胎儿血型符合率为 10 0 %。结论 (1)PCR -SSP法检测羊水细胞ABO血型基因型是准确产前诊断胎儿血型的方法。 (2 )PCR -SSP法检测羊水细胞ABO血型基因型可以精确至其亚型。

献血者A_(el)亚型1例及其家系调查

目的通过1例ABO亚型及其家系血型的鉴定,探讨ABO亚型的正确鉴定及对ABO亚型的输血原则。方法应用ABO血型鉴定、吸收放散试验、血型物质测定等血清学技术及ABO基因直接测序分析来进行鉴定。结果本例献血者父子血型血清学均符合Ael亚型特征,先证者ABO基因第5~7外显子序列分析确定其ABO基因型为Ael01/O 01。结论在当前国内对ABO亚型的输血原则尚无明确的规定情况下,临床用血应该严格遵循同型输注/相容性输注原则。

ABO位点限制性扩增片段长度多态性的研究

建立了PCR扩增、限制性酶切、8％（T）、5％（C）聚丙烯酸胺凝胶垂直电泳和银染检测ABO位点的限制性片段长度多态性的方法体系。应用Amp-RFLP技术对185名中国人（哈尔滨）ABO位点的基因频率和基因型分布进行了调查和统计分析。ABO位点特异片段长度为140～200bp，基因频率为0．2000～0．5568。6种基因型频率为0．973～0．3135，杂合度0．5838，Dp值0．7146。经H－W平衡吻合度检测，完全符合群体遗传多态分布。通过对11个家庭33名相关个体的分析，证明完全符合孟德尔遗传定律。ABO基因型检验适用于法庭科学的个体识别和亲权鉴定。

一例ABO血型系统Aw43亚型的基因突变研究

目的研究1例AB0血型A亚型的分子机制。方法先证者及其家系成员（父母和姐姐）的AB0血型正反定型采用标准血清学技术。用PCR扩增先证者及其家系成员ABO基因的全部编码序列并进行双向测序分析。结果先证者红细胞与抗A呈现混合视野凝集，与抗B不凝集；其血清与A、0细胞均不凝集，与B细胞呈现凝集，血清学特性可定义为Aw亚型。ABO基因测序分析显示先证者1A／G、106G／T、188A／G、189C／T、220C／T、261G／del、297A／G、467C／T、646A／T、681A／G杂合。家系调查显示其母亲血清学表型特性和测序结果与先证者完全一致，其父亲基因型为B10I／002、姐姐为002／002。结合家系成员结果，可推断先证者AB0基因型中一个等位基因为002，另一个等位基因为新等位基因；它与A102相比存在1A＞G，导致起始密码子改变，已被红细胞血型基因数据库正式命名为Aw43。结论发现1例Aw43亚型，其α-1，3-N-乙酰半乳糖胺转移酶基因存在1A＞G和467C＞T变异。