白藜芦醇通过介导GAL-3表达促进卵巢癌细胞凋亡并增强其化疗感性

目的 探讨白藜芦醇(RES)对卵巢癌细胞凋亡和化疗敏感性的影响及其作用机制。方法研究样本为卵巢癌SKOV3细胞,分为3组,每组11株,均进行常规培养,对照组不给予干预,顺铂组给予10μmol/L顺铂干预,RES+顺铂组给予50μmol/L RES+10μmol/L顺铂干预。采用CCK-8实验检测细胞活力,BrdU实验检测细胞增殖,Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡试验检测细胞凋亡,比色测定试验检测caspase-3活性,Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移能力,侵袭试验检测细胞侵袭能力,蛋白质印迹分析caspase-3、GAL-3、p-Akt、AKT、Iκβα、P65、Bcl-2、 p-IKKα/β蛋白相对表达。结果 RES+顺铂组、顺铂组、对照组细胞活力分别为(62±14)%、(74±16)%、(98±16)%,细胞增殖率分别为(59±16)%、(76±17)%、(97±17)%,RES+顺铂组、顺铂组细胞活力、细胞增殖率显著低于对照组,RES+顺铂组显著低于顺铂组(P<0.05);RES+顺铂组、顺铂组、对照组细胞凋亡率分别为(64.29±13.14)%、(47.48±9.52)%、(14.72±3.03)%,RES+顺铂组、顺铂组细胞凋亡率显著高于对照组,RES+顺铂组显著高于顺铂组(P<0.05);RES+顺铂组caspase-3活性、蛋白相对表达显著高于顺铂组、对照组(P<0.05);RES+顺铂组、顺铂组细胞迁移量、细胞侵袭量显著低于对照组,RES+顺铂组显著低于顺铂组(P<0.05);RES+顺铂组GAL-3、p-Akt蛋白相对表达显著低于顺铂组、对照组(P<0.05),各组AKT蛋白表达差异无统计学意义(P<0.05);RES+顺铂组、顺铂组p-IKKα/β、P65、Bcl-2、蛋白相对表达显著低于对照组,RES+顺铂组显著低于顺铂组(P<0.05);RES+顺铂组、顺铂组Iκβα蛋白相对表达显著高于对照组,RES+顺铂组显著高于顺铂组(P<0.05)。结论 RES诱导癌细胞凋亡可能与GAL-3水平降低有关。其作用机制可能是通过调节卵巢癌细胞凋亡、转移相关蛋白表达抑制其增殖、侵袭并增强其对顺铂的敏感性。

ABT-737对M2型TAM来源外泌体处理的卵巢癌细胞SKOV3自噬性凋亡与干性特征的影响

目的探讨Bcl-2小分子抑制剂ABT-737对经肿瘤相关巨噬细胞(TAM)来源外泌体(Exo)处理的卵巢癌细胞自噬性凋亡及干性特征的作用。方法利用佛波酯(PMA)与重组人白细胞介素-4(IL-4)诱导人外周血单核细胞THP-1为M2型TAM,流式细胞术检测细胞表面巨噬细胞相关标志物表达;差速离心法提取外泌体,透射电镜与纳米粒子追踪技术观察外泌体形态及径粒分布,Western blot检测外泌体标志蛋白表达,Dil结合PKH67染色检测TAM来源外泌体被卵巢癌细胞系SKOV3摄取情况;实验分组为对照组、Exo组、Exo+ABT-737组,采用TAM来源外泌体与ABT-737按照分组处理SKOV3细胞,流式细胞术检测细胞凋亡率,双荧光mRFP-GFP-LC3实验检测细胞自噬水平,Western blot检测细胞自噬相关蛋白(LC3-Ⅱ/LC-3Ⅰ、Beclin-1、p62)与凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase3)表达,肿瘤细胞成球实验检测细胞干性,Western blot检测肿瘤干细胞相关蛋白(CD133、OCT4、SOX2)表达。结果经PMA与IL-4诱导后,THP-1细胞形态发生改变,M1型巨噬细胞标记物CD86表达比例降低而M2型巨噬细胞标记物CD206表达比例升高(P<0.05)。分离的颗粒物为球形囊泡,大小均匀,粒径峰值约为140 nm,外泌体标志蛋白Alix、CD63、TSG101表达明显,由此判断成功分离到M2型TAM来源Exo,且其能被SKOV3摄取。与对照组比较,Exo组SKOV3细胞凋亡率减少,GFP与mRFP的荧光斑点减少,细胞内LC3-Ⅱ/LC-3Ⅰ、Beclin-1、Bax及Cleaved-caspase3表达均下调,p62与Bcl-2表达均上调,此外,细胞成球数量增加,CD133、OCT4及SOX2表达均上调,差异均具有统计学意义(P<0.05)。与Exo组比较,Exo+ABT-737组SKOV3细胞凋亡率增加,GFP与mRFP的荧光斑点也增加,细胞内LC3-Ⅱ/LC-3Ⅰ、Beclin-1、Bax及Cleaved-caspase3表达均上调,p62与Bcl-2表达均下调,细胞成球数量减少,且CD133、OCT4及SOX2表达均下调,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论ABT-737能够在M2型TAM来源外泌体处理的卵巢癌细胞中发挥促自噬性凋亡的作用,并且可以抑制卵巢癌肿瘤干性特征。

LncRNA PICSAR敲低对卵巢癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其作用机制

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)PICSAR在卵巢癌中的表达,探究LncRNA PICSAR对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响以及其可能的作用机制。方法使用荧光定量PCR法检测卵巢癌组织和细胞系A2780、OVCAR-3、HO-8910以及正常卵巢组织和细胞系IOSE386中LncRNA PICSAR的表达水平。将LncRNA PICSAR表达最高的卵巢癌细胞系分为对照组和实验组,通过脂质体转染技术分别转染阴性对照小干扰RNA(siRNA-NC)或PICSAR小干扰RNA(siRNA-PICSAR)。细胞计数实验(CCK-8)、克隆形成实验、划痕实验和Transwell实验以及流式细胞术分别分析LncRNA PICSAR敲低对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。Western blot法测定各组细胞的凋亡蛋白Bcl-2、Bax和自噬蛋白LC3B、ATG7、Beclin-1的表达水平。使用雷帕霉素和羟氯喹分别作为自噬激活剂和抑制剂处理卵巢癌细胞,并通过Western blot实验检测细胞凋亡水平。结果与正常卵巢组织相比,卵巢癌组织中LncRNA PICSAR表达水平升高。与IOSE386细胞系比较,卵巢癌细胞系A2780、OVCAR-3、HO-8910中LncRNA PICSAR表达水平均升高。与si-NC组比较,si-PICSAR组卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力均降低,细胞凋亡率增高。si-PICSAR组卵巢癌细胞的自噬水平较si-NC组降低,siRNA-PICSAR转染后,用雷帕霉素激活自噬降低了细胞凋亡水平,而用羟氯喹抑制自噬促进了细胞凋亡。结论LncRNA PICSAR在卵巢癌组织和细胞系中高表达,LncRNA PICSAR敲低能够抑制卵巢癌细胞的恶性生物学行为。敲低LncRNA PICSAR可能是通过调节自噬促进卵巢癌细胞凋亡。

科罗索酸抑制人卵巢癌细胞SKOV-3过度增殖和诱导细胞凋亡

目的探究科罗索酸(corosolic acid,CRA)对人卵巢癌细胞SKOV-3增殖和凋亡的作用及机制。方法将细胞分为空白对照(Ctrl)组、CRA(10μmol/L)、CRA(20μmol/L)、CRA(50μmol/L)组,使用相应浓度的CRA处理细胞,CCK-8检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹检测抗原Ki67(Ki67)、周期蛋白D1(cyclin D1)、周期蛋白依赖性激酶6(cyclin-dependent kinases 6,CDK6)、B细胞淋巴瘤(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、活化型半胱天冬酶3(cleaved caspase-3)、cleaved caspase-9、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)、p-AKT蛋白表达,构建SKOV-3裸鼠移植瘤模型并记录肿瘤体积,免疫组化检测Ki67和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)阳性细胞率。结果在细胞实验中,与Ctrl组比较,CRA(10μmol/L)、CRA(20μmol/L)、CRA(50μmol/L)组细胞增殖水平显著降低,Bcl-2/Bax、p-AKT/AKT比率降低,Ki67、Cyclin D1、CDK6、PI3K蛋白表达水平降低,同时细胞凋亡水平显著升高,cl-caspase-3和cl-caspase-9蛋白表达水平升高。在动物实验中,与Ctrl组比较,CRA(10μmol/L)、CRA(20μmol/L)、CRA(50μmol/L)组肿瘤体积显著降低,Ki67和VEGF阳性细胞率显著降低。结论科罗索酸可抑制人卵巢癌细胞SKOV-3的过度增殖,并诱导细胞凋亡,起作用机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路有关。

去甲斑蝥素干预Wnt/β-catenin信号通路诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡

目的:讨论去甲斑蝥素对人卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,将浓度为52μmol/L去甲斑蝥素作用于人卵巢癌SKOV3细胞后,将卵巢癌SKOV3细胞分为对照组、去甲斑蝥素组(52μmol/L),等待卵巢癌细胞贴壁药物作用6 h后,在倒置显微镜下观察卵巢癌SKOV3细胞的形态学变化,荧光显微镜观察细胞核的变化;药物作用24 h后,采用流式细胞术检测线粒体膜电位的变化情况,采用Western blot法检测药物作用后对卵巢癌SKOV3细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2以及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin表达水平的影响。结果:与对照组比较,去甲斑蝥素抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖,降低线粒体膜电位,诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡,升高Bax的表达水平,抑制Bcl-2蛋白表达水平,降低Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin的表达水平。结论:去甲斑蝥素诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡的机制可能与调控Wnt/β-catenin信号通路相关。

柚皮苷诱导卵巢癌细胞凋亡的机制研究

目的:探究柚皮苷在卵巢癌中的抗肿瘤活性并评估其潜在信号传导机制。方法:⑴将雌性Balb/c裸鼠随机分为6组:阴性对照组(PBS溶液)、0.5 mg·kg^(-1)柚皮苷组(柚皮苷0.5 mg·kg^(-1))、1.0 mg·kg^(-1)柚皮苷组(柚皮苷1.0 mg·kg^(-1))、2.0 mg·kg^(-1)柚皮苷组(柚皮苷2.0 mg·kg^(-1))、阳性对照组(顺铂25.0 mg·kg^(-1))、联合用药组(顺铂25.0 mg·kg^(-1)、柚皮苷2.0 mg·kg^(-1)),取对数生长期的SKOV3细胞皮下注射Balb/c裸鼠,当肿瘤大小达到50 mm3时,按照分组情况在腹膜内注射相应试剂。给药10 d后处死并切除小鼠整个肿瘤,测量肿瘤大小及体积并通过RT-PCR检测各组肿瘤凋亡相关基因mRNA的表达。⑵将SKOV3细胞随机分为4组:阴性对照组(PBS溶液)、10μmol·L^(-1)柚皮苷组、20μmol·L^(-1)柚皮苷组、40μmol·L^(-1)柚皮苷组。ELISA检测各组相关蛋白表达。⑶取对数生长期SKOV3细胞,以每孔2×10^(5)个细胞接种于6孔板中。将SKOV3细胞随机分8组:空白对照组(不导入质粒及siRNA)、空质粒对照组、siRNA对照组、NF-κB过表达组、NF-κB siRNA组、P38MAPK过表达组、P38MAPK siRNA组、PKC抑制剂组。RT-PCR检测各组细胞P-gp和ERK mRNA表达。⑷对NF-κB过表达组和P38MAPK过表达组SKOV3细胞进行柚皮苷干预,测量各组细胞P-gp和ERK mRNA表达。结果:⑴给药10 d后,肿瘤体积及重量由大到小依次为阴性对照组、0.5 mg·kg^(-1)柚皮苷组、1.0 mg·kg^(-1)柚皮苷组、2.0 mg·kg^(-1)柚皮苷组、阳性对照组、联合用药组,且与阴性对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。⑵与阴性对照组相比,2.0 mg·kg^(-1)柚皮苷组、阳性对照组、联合用药组Caspase-3和Caspase-7 mRNA表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05);与阴性对照组相比,0.5 mg·kg^(-1)柚皮苷组、1.0 mg·kg^(-1)柚皮苷组、2.0 mg·kg^(-1)柚皮苷组、阳性对照组、联合用药组Bcl-2、Bcl-xl mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与阴性对照组相比,2.0 mg·kg^(-1)柚皮苷组、阳性对照组、联合用药组Cyclin D1、C-Myc和Survivin mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。⑶与阴性对照组相比,40μmol·L^(-1)柚皮苷组PKC、P38MAPK、ERK、NF-κB、P-gp、COX-2蛋白表达降低,Caspase-3和Caspase-7蛋白表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。⑷与空白对照组相比,空质粒及siRNA对照组的ERK和P-gp mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05),P38MAPK过表达组ERK mRNA表达增加,P38MAPK siRNA组及PKC抑制剂组ERK mRNA表达降低,NF-κB过表达组P-gp mRNA表达增加,NF-κB siRNA组及P-gp mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。⑸与空质粒组比较,柚皮苷+P38MAPK过表达组PKC、ERK、COX-2 mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05),P38MAPK mRNA无明显差异;柚皮苷+NF-κB过表达组PKC、NF-κB、P-gp表达降低,Caspase-3、Caspase-7表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:柚皮苷能够通过抑制PKC所介导的不同信号路径调控卵巢癌细胞凋亡与生长,并具有剂量依赖性。

木犀草素通过AKT⁃mTOR通路诱导人卵巢癌A2780细胞凋亡和自噬的研究

目的:探讨木犀草素对人卵巢癌A2780细胞的作用,并揭示其可能机制。方法:通过CCK-8检测木犀草素对A2780细胞活力的影响,确定加药浓度;克隆斑、划痕和Transwell实验检测木犀草素对A2780细胞增殖和转移能力的影响;并使用流式细胞术检测木犀草素作用下细胞凋亡水平的变化;凋亡、自噬及AKT-mTOR信号通路相关蛋白的表达情况则通过Western blot实验检测。结果:木犀草素抑制了A2780细胞活力、增殖和转移的能力;流式细胞术结果表明木犀草素呈浓度依赖性诱导A2780细胞凋亡;且自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比例增加,P62表达下降,P-AKT、P-mTOR与抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平降低。结论:木犀草素通过AKT-mTOR信号通路诱导人卵巢癌A2780细胞凋亡和自噬,从而抑制卵巢癌细胞恶性进展。

MST1R抑制剂BMS-777607对卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨在卵巢癌SKOV3细胞中应用MST1R抑制剂BMS-777607并观察对其增殖及凋亡的影响,阐明其作用机制。方法根据是否对卵巢癌SKOV3细胞进行加药处理将实验分为对照组(DMSO)、实验组(BMS-777607)。将卵巢癌SKOV3细胞用不同浓度的BMS-777607进行处理,并使用MTT实验、克隆形成实验和EdU细胞成像检测细胞增殖率,采用流式实验检测细胞凋亡率,使用Western Blot实验检测细胞中Bax、p-ERK蛋白表达水平。结果MTT实验显示与对照组比较,实验组卵巢癌SKOV3细胞随着药物浓度的升高,其增殖率明显下降(P<0.05)。流式细胞术实验显示,实验组卵巢癌SKOV3细胞凋亡比例明显增加(P<0.05)。由Western Blot实验显示,与对照组相比,实验组卵巢癌SKOV3细胞中Bax蛋白表达水平随药物浓度的升高而显著升高(P<0.01)。而p-ERK蛋白表达水平则随药物浓度的升高却显著降低(P<0.05)。结论在卵巢癌SKOV3细胞中,应用MST1R抑制剂BMS-777607能够抑制细胞的增殖并诱导其凋亡。

芍药苷-6-氧-苯磺酸酯(CP-25)通过TLR-4/NF-κB信号通路对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨芍药苷-6-氧-苯磺酸酯(CP-25)通过Toll样受体4(TLR-4)/核因子κB(NF-κB)信号通路对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响。方法:CCK-8实验检测人卵巢癌细胞A2780、SK-OV-3、HO8910及正常卵巢细胞HOSEpiC的活性。A2780细胞分为对照组(0.01%二甲基亚砜)、CP-25低(0.5 mg/ml CP-25)、中(1 mg/ml CP-25)、高(2 mg/ml CP-25)浓度组和CP-25高浓度+LPS组(2 mg/ml CP-25和0.1μg/ml TLR-4激活剂LPS)。CCK-8和克隆形成实验评估细胞增殖能力;流式细胞术和TUNEL染色分析细胞凋亡情况;Western blot分析增殖蛋白Ki67、凋亡相关蛋白(Cleaved caspase-3、Caspase-3、Bax、Bcl-2)、TLR-4、p-NF-κB p65、NF-κB p65蛋白表达水平;免疫荧光染色观察TLR-4、NF-κB p65蛋白表达。结果:与HOSEpiC细胞相比,A2780、SK-OV-3、HO8910细胞活性随CP-25浓度增加而逐渐减弱(P<0.05),且CP-25在低、中、高浓度下对A2780细胞的生长有50%左右的抑制作用,故采用A2780细胞进行实验。与对照组相比,CP-25低、中、高浓度组A2780细胞克隆形成率显著下降,细胞凋亡率和凋亡指数明显上升,Ki67、Bcl-2、TLR-4、p-NF-κB p65表达水平和细胞核NF-κB p65水平显著降低,Cleaved caspase-3/Caspase-3、Bax表达显著升高(P<0.05),且呈现浓度依赖性。与CP-25高浓度组相比,CP-25高浓度+LPS组细胞活性、克隆形成率明显升高,细胞凋亡率和凋亡指数明显降低,Ki67、Bcl-2、TLR-4、p-NF-κB p65表达水平和细胞核NF-κB p65水平明显升高,Cleaved caspase-3/Caspase-3和Bax表达明显降低(P<0.05)。结论:CP-25通过抑制TLR-4/NF-κB信号通路抑制卵巢癌细胞增殖并促进其凋亡。

探讨失巢凋亡相关生物标志物在卵巢癌患者评估中的应用价值

目的:分析检测失巢凋亡相关生物标志物水平在卵巢癌患者病情评估中的应用价值。方法:选取2021年1月至2023年12月在苏州市立医院进行治疗的103例卵巢癌患者为研究对象,自患者腹腔积液中分离SKOV3细胞株,建立失巢凋亡模型,取对数生长期细胞并分为miR-101质粒组、miR-NC组和阴性对照组。检测并对比各组细胞miR-101、c-fos mRNA表达水平、透膜细胞数、细胞凋亡率及24h、48h迁移距离。结果:与Mir-NC组及阴性对照组相比,miR-101质粒组miR-101表达水平更高,c-fos mRNA表达水平更低,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-NC组与阴性对照组miR-101及c-fos mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。与miR-NC组及阴性对照组相比,miR-101质粒组透膜细胞数显著更少,细胞凋亡率显著更高,24h及48h迁移距离均明显更短,差异具有统计学意义(P<0.05)。miR-NC组与阴性对照组透膜细胞数、细胞凋亡率、24h及48h迁移距离差异无统计学意义(P>0.05)。结论:miR-101过表达可造成SKOV3细胞失巢凋亡,使得细胞迁移能力下降,作用分子机制可能为c-fos基因表达下调,检测miR-101表达水平有助于为临床评估患者的病情及预后情况提供重要指导。

长链非编码RNA MALAT1靶向miR-218对卵巢癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响及其作用机制

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)MALAT1靶向miR-218对卵巢癌细胞系OVCAR3增殖、侵袭及凋亡的影响及作用机制。方法应用实时PCR检测lncRNA MALAT1和miR-218在人卵巢癌细胞系(OVCAR3)和正常人卵巢上皮细胞系(HOSE)中的表达。利用脂质体转染法将无意义序列阴性对照(si-NC)组、MALAT1干扰序列(si-MALAT1)组以及si-MALAT1+miR-218抑制剂组分别转染卵巢癌细胞,MTT法检测各组细胞增殖情况,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,Transwell实验检测各组细胞侵袭情况。生物信息学分析及双荧光素酶报告基因实验验证MALAT1和miR-218的靶向关系。实时PCR检测各组OVCAR3细胞中MALAT1、miR-218的表达;Western blotting检测各组OVCAR3细胞中Runx2的表达。结果与人正常卵巢上皮细胞比较,卵巢癌OVCAR3细胞中MALAT1表达升高(P<0.05),miR-218表达下降(P<0.05)。与si-NC组比较,si-MALAT1组OVCAR3细胞的增殖和侵袭能力下降,凋亡率升高(均P<0.05)。与si-MALAT组比较,si-MALAT1+miR-218抑制剂组OVCAR3细胞的增殖和侵袭能力升高,凋亡率下降(均P<0.05)。与si-NC组比较,si-MALAT1组OVCAR3细胞中miR-218表达升高(P<0.05)。生物信息学分析和双荧光素酶报告基因实验结果显示MALAT1可以靶向调控miR-218。Western blotting结果显示,与si-NC组比较,si-MALAT1组Runx2蛋白表达降低(P<0.05),与si-MALAT1组比较,si-MALAT1+miR-218抑制剂组Runx2蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论lncRNA MALAT1在卵巢癌细胞中高表达,抑制MALAT1表达能够抑制卵巢癌OVCAR3细胞的增殖和侵袭,并促进OVCAR3细胞凋亡,其机制可能与通过miR-218调控Runx2蛋白表达有关。

血清lncRNA LOXL1-AS1、lncRNA MALAT1与上皮性卵巢癌患者临床病理特征、血清细胞凋亡分子和预后不良的关系研究

目的 探讨血清长链非编码核糖核酸(lncRNA)中的赖氨酰氧化酶样1(LOXL1-AS1)、肺腺癌转移性相关转录本1(MALAT1)与上皮性卵巢癌(EOC)患者临床病理特征、血清细胞凋亡分子和预后不良的关系。方法 选取2017年1月至2020年1月该院收治的EOC患者68例作为EOC组,另选取70例卵巢良性肿瘤患者作为良性组,选取同期体检健康者60例作为对照组;对比3组患者血清中lncRNA LOXL1-AS1与lncRNA MALAT1表达水平,以lncRNA LOXL1-AS1、lncRNA MALAT1表达水平中位值(1.90、1.38)分别将EOC患者分为lncRNA LOXL1-AS1低表达组(34例)和lncRNA LOXL1-AS1高表达组(34例),以及lncRNA MALAT1低表达组(33例)和lncRNA MALAT1高表达组(35例),对比EOC患者各表达组的临床病理特征、血清细胞凋亡分子[B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、生存素(Survivin)、B细胞CLI/淋巴瘤2关联凋亡基因1(Bag-1)]水平,并采用Pearson相关性分析法探讨其相关性;采用Kaplan-Meier生存曲线分析EOC患者各表达组的预后差异,多因素Cox分析EOC患者的预后不良的影响因素。结果 3组血清lncRNA LOXL1-AS1、lncRNA MALAT1、Bcl-2、Survivin、Bag-1水平从高到低依次为EOC组、良性组、对照组(P<0.05);血清Bax水平从低到高依次为EOC组、良性组、对照组(P<0.05)。不同年龄和病理类型的EOC患者lncRNA LOXL1-AS1、lncRNA MALAT1表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05),不同国际妇产科联盟(FIGO)分期、淋巴结转移、组织分期的EOC患者lncRNA LOXL1-AS1、lncRNA MALAT1表达水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。lncRNA LOXL1-AS1、lncRNA MALAT1高表达组Bcl-2、Survivin、Bag-1水平均高于lncRNA LOXL1-AS1、lncRNA MALAT1低表达组,Bax水平低于lncRNA LOXL1-AS1、lncRNA MALAT1低表达组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,血清lncRNA LOXL1-AS1与lncRNA MALAT1表达水平均与Bcl-2、Survivin、Bag-1均呈正相关(P<0.05),与Bax呈负相关(P<0.05)。随访2年后,lncRNA LOXL1-AS1低表达组累积生存率为85.29%,高于lncRNA LOXL1-AS1高表达组的55.88%,lncRNA MALAT1低表达组累积生存率为81.82%,高于lncRNA MALAT1高表达组的60.00%(P<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示,淋巴结转移、lncRNA LOXL1-AS1与lncRNA MALAT1高表达是EOC患者预后不良的独立影响因素(P<0.05)。结论 EOC患者血清lncRNA LOXL1-AS1与lncRNA MALAT1水平呈高表达,且与淋巴结转移、FIGO分期、组织分期、凋亡因子表达及预后相关,其表达水平升高提示患者有EOC的可能,且其预后较差,检测血清lncRNA LOXL1-AS1与lncRNA MALAT1水平可能对EOC的诊断及治疗具有重要意义。

石蒜碱诱导卵巢癌Skow3和乳腺癌MDA-MB-468细胞凋亡、侵袭迁移机制的研究

目的:研究石蒜碱在体外对卵巢癌Skov3和乳腺癌MDA-MB-468细胞的作用,为石蒜碱治疗生殖道多发性原发癌提供理论依据。方法:经不同浓度的石蒜碱处理卵巢癌Skov3和乳腺癌MDA-MB-468细胞72h后,MTT法检测细胞的增殖抑制率;Hoechst33258染色观察细胞的凋亡形成;结晶紫染色法观察不同浓度石蒜碱处理的细胞侵袭迁移细胞率的变化;Western blotting法检测凋亡蛋白(Bax、Bcl-2及caspase-3)、迁移侵袭相关蛋白(MMP2,MMP9)的表达。结果:Skov3和MDA-MB-468细胞的增殖抑制率随石蒜碱药物浓度的增加而升高;用25μg/mL的石蒜碱处理Skov3和MDA-MB-468细胞24h、48h和72h后,细胞的凋亡率倍数渐增加;石蒜碱能减弱Skov3和MDA-MB-468细胞的侵袭迁移能力;石蒜碱使凋亡相关蛋白Bax和caspase-3的表达明显上调(P<0.05),Bcl-2、侵袭迁移相关蛋白MMP2和MMP9的表达亦下调(P<0.05)。结论:石蒜碱能诱导卵巢癌Skov3细胞和乳腺癌MDA-MB-468细胞的凋亡,抑制肿瘤细胞的迁移和侵袭。

扶正抗癌汤含药血清对人卵巢癌HO-8910PM细胞增殖、凋亡与周期进程的影响

目的探讨扶正抗癌汤(Fuzheng kangai decoction,FZKAD)含药血清对人卵巢癌HO-8910PM细胞增殖、凋亡与周期进程的影响。方法SD大鼠40只随机分为对照组及FZKAD低(4.725 g/kg)、中(9.45 g/kg)、高(18.9 g/kg)剂量组,灌胃给药7 d后制备含药血清,用于HO-8910PM细胞的培养。分别采用噻唑蓝(MTT)实验检测细胞增殖能力,平板克隆形成实验检测克隆形成能力,膜联蛋白V(Annexin V)-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(FITC/PI)双染法流式细胞术检测细胞凋亡,PI单染法流式细胞术检测细胞周期进程,Western blot法检测蛋白表达水平。结果与对照组比较,除低、中剂量组处理24 h后的细胞存活率无显著性降低外(P>0.05),其余各组处理24、48及72 h后的细胞存活率均显著性降低(P<0.05或P<0.01),且各剂量组细胞克隆形成能力也显著降低(P<0.01);与对照组比较,低、中、高剂量组的细胞凋亡率及P53、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平增加(P<0.05或P<0.01),而B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达水平降低(P<0.01);与对照组比较,低、中、高剂量组G0/G1期细胞百分比增加(P<0.05或P<0.01),而S期、G2/M期细胞百分比及细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、CDK6蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01)。结论FZKAD含药血清对人卵巢癌HO-8910PM细胞的增殖具有抑制作用,该作用与诱导凋亡及周期进程阻滞有关。

地龙提取物通过抑制wnt/β-catenin通路促进人卵巢癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨地龙提取物对人卵巢癌细胞凋亡的影响及生物学机制。方法获取正常人卵巢上皮细胞和卵巢癌细胞,应用免疫组化检测细胞内wnt3a、β-catenin、c-Myc、Cyclin D1蛋白表达,应用PCR检测细胞wnt3a mRNA、β-catenin mRNA、c-Myc mRNA、Cyclin D1mRNA相对表达量,应用western-blot检测细胞wnt3a、β-catenin、c-Myc、Cyclin D1蛋白表达;分别应用终浓度400 mg/L和800 mg/L地龙提取物干预卵巢癌细胞生长72 h后、应用免疫组化检测细胞内wnt3a、β-catenin、c-Myc、Cyclin D1蛋白表达,应用PCR检测细胞wnt3a mRNA、β-catenin mRNA、c-Myc mRNA、Cyclin D1 mRNA相对表达量,应用western-blot检测细胞wnt3a、β-catenin、c-Myc、Cyclin D1蛋白表达,应用Tunel法分别检测卵巢癌细胞24、48、72 h凋亡率。结果与正常人卵巢上皮细胞比较,免疫组化结果显示卵巢癌细胞表达蛋白wnt3a[(5.61±1.13)分vs(0.79±0.21)分,t=9.60,P=0.00]、β-catenin[(5.27±1.40)分vs(0.74±0.25)分,t=7.12,P=0.00]、c-Myc[(4.15±1.70)分vs(1.10±0.30)分,t=3.88,P=0.01]、Cyclin D1[(5.42±1.90)分vs(1.00±0.38)分,t=5.07,P=0.00]均增多,PCR结果显示卵巢癌细胞wnt3amRNA[(7.20±2.12)倍vs(1.00±0.10)倍,t=6.92,P=0.00]、β-catenin mRNA[(6.44±1.27)倍vs(0.99±0.09)倍,t=10.03,P=0.00]、c-Myc mRNA[(3.65±1.10)倍vs(1.00±0.10)倍,t=5.26,P=0.00]、Cyclin D1mRNA[(6.50±1.72)倍vs(1.00±0.10)倍,t=20.44,P=0.00]相对表达量均增高,western-blot结果显示卵巢癌细胞wnt3a[(0.61±0.20)vs(0.18±0.10),t=4.00,P=0.00]、β-catenin[(1.24±0.43)vs(0.32±0.09),t=4.88,P=0.00]、c-Myc[(0.80±0.27)vs(0.11±0.08),t=4.95,P=0.00]、Cyclin D1[(0.51±0.18)vs(0.10±0.07),t=11.19,P=0.00]均增多;经地龙提取物干预后,免疫组化结果显示卵巢癌细胞表达蛋白wnt3a[0 mg组(5.80±1.40)分,400 mg组(3.10±1.00)分,800 mg组(1.60±0.30)分,F=22.28,P=0.00]、β-catenin[0 mg组(5.00±1.60)分,400 mg组(3.70±1.10)分,800 mg组(2.40±1.00)分,F=5.31,P=0.02]、c-Myc[0 mg组(4.60±2.11)分,400 mg组(3.58±1.75)分,800 mg组(1.20±0.40)分,F=6.49,P=0.01]、Cyclin D1[0 mg组(5.70±1.80)分,400 mg组(2.61±1.20)分,800 mg组(1.82±0.54)分,F=12.91,P=0.00]均降低,PCR结果显示卵巢癌细胞wnt3a mRNA[0 mg组(1.00±0.12),400 mg组(0.63±0.18),800 mg组(0.20±0.09),F=40.00,P=0.00]、β-catenin mRNA[0 mg组(1.00±0.09),400 mg组(0.41±0.09),800 mg组(0.10±0.08),F=112.10,P=0.00]、c-Myc mRNA[0 mg组(1.00±0.07),400 mg组(0.71±0.22),800 mg组(0.30±0.09),F=31.84,P=0.00]、Cyclin D1mRNA[0 mg组(1.00±0.10),400 mg组(0.48±0.20),800 mg组(0.23±0.09),F=40.83,P=0.00]相对表达量均减少,western-blot结果显示卵巢癌细胞表达蛋白wnt3a[0 mg组(1.33±0.42),400 mg组(0.81±0.30),800 mg组(0.10±0.08),F=20.96,P=0.00]、β-catenin[0 mg组(1.81±0.52),400 mg组(0.90±0.27),800 mg组(0.38±0.19),F=19.87,P=0.00]、c-Myc[0 mg组(1.41±0.40),400 mg组(0.28±0.10),800 mg组(0.10±0.06),F=40.83,P=0.00]、Cyclin D1[0 mg组(1.10±0.38),400 mg组(0.78±0.26),800 mg组(0.11±0.06),F=20.79,P=0.00]均减少,Tunel结果显示72h卵巢癌细胞凋亡率增高[0 mg组(2.17±1.10)%,400 mg组(17.20±3.65)%,800mg组(28.64±7.11)%,F=40.62,P=0.00]。结论地龙提取物可以通过抑制wnt/β-catenin通路来促进人卵巢癌细胞的凋亡,并且以终浓度800 mg/L为佳。

caspase3在卵巢癌非凋亡进展过程中的治疗作用

卵巢癌由于缺乏特异性症状和体征,使其在确诊时多为晚期。近些年卵巢癌放化疗耐药性的出现导致患者的高死亡率。研究卵巢癌的非凋亡程序对于提高卵巢癌的存活率至关重要。caspase3在卵巢癌非凋亡调控中发挥着重要作用,是卵巢癌各种抗癌治疗过程中的主要介导因子,如细胞毒性药物、放疗、化疗及免疫治疗等。探索caspase3介导的非凋亡程序在卵巢癌治疗中的作用和价值对于提高患者的存活率有着重要作用。本文综述了近年来caspase3在卵巢癌治疗中的最新研究进展,以期为卵巢癌的临床治疗研究提供方向。

长链非编码RNA NR2F1-AS1靶向微小RNA-493-5p表达调控卵巢癌细胞增殖及凋亡的机制研究

目的探讨长链非编码RNA NR2F1-AS1(LncRNA NR2F1-AS1)靶向微小RNA-493-5p(miR-493-5p)的表达调控卵巢癌细胞增殖及凋亡的机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测NR2F1-AS1与miR-493-5p在不同卵巢癌细胞株中的表达水平;采用双荧光素酶报告基因检测NR2F1-AS1与miR-493-5p的相互作用;采用MTT增殖实验检测干扰NR2F1-AS1表达或miR-493-5p过表达后卵巢癌细胞增殖能力的变化;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用Western blot检测CyclinD1、p21、p27、Bcl-2、Bax、cleaved-caspase 3蛋白表达。结果与正常卵巢上皮细胞比较,NR2F1-AS1在卵巢癌细胞中的表达水平升高,而miR-493-5p的表达水平则降低,差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶实验证实NR2F1-AS1能与miR-493-5p特异性结合,并可负性调控miR-493-5p的表达及活性。干扰NR2F1-AS1表达或miR-493-5p过表达后可抑制卵巢癌细胞增殖能力,促进细胞凋亡,并可显著上调p21、Bax、p27、cleaved-caspase 3蛋白的表达,下调CyclinD1、Bcl-2蛋白的表达。抑制miR-493-5p表达可逆转干扰NR2F1-AS1表达对卵巢癌细胞增殖及凋亡的作用。结论干扰NR2F1-AS1表达可通过上调miR-493-5p的表达抑制卵巢癌细胞增殖及诱导细胞凋亡。

缺氧诱导因子-1α与X染色体连锁凋亡抑制蛋白在人卵巢癌中的表达及意义

目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)与X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)在人卵巢癌中的表达及意义。方法用免疫组织化学技术法检测人正常卵巢组织标本10例、良性卵巢肿瘤标本10例、交界性卵巢肿瘤标本10例及恶性卵巢癌组织标本30例中HIF-1α和XIAP的表达情况;培养人卵巢癌细胞系SKOV3,向细胞培养瓶中加入HIF-1α激动剂和抑制剂,提取细胞总RNA,用RT-PCR技术观察XIAP和HIF-1α基因表达变化。结果XIAP、HIF-1α在恶性上皮性卵巢癌组及交界性肿瘤组表达率均明显高于良性卵巢肿瘤组(P<0.05)。恶性上皮性卵巢癌组织中HIF-1α与XIAP在临床分期晚期(Ⅲ期和Ⅳ期)组的阳性表达率明显高于临床分期早期(Ⅰ期和Ⅱ期)组(P<0.05),与患者年龄、病理分型和淋巴结转移无关(P>0.05)。在恶性上皮性卵巢癌中HIF-1α与XIAP呈正相关(P<0.05)。随缺氧时间延长,SKOV3细胞系中HIF-1αmRNA表达量渐增;低氧24 h时HIF-1αmRNA表达量达高峰,36 h时HIF-1αmRNA表达量有所回落;添加HIF-1α抑制剂雷帕酶素后,HIF-1αmRNA表达量明显减少,XIAPmRNA亦减少。SKOV3细胞系中XIAP mRNA随HIF-1αmRNA而变化。结论HIF-1α和XIAP可能参与了恶性卵巢肿瘤的发生;HIF-1α和XIAP的高表达可能提示预后不良;HIF-1α对XIAP可能存在调控作用,两者可能协同促进卵巢癌的发生。

鱼藤素通过调控miR-520a-3p影响卵巢癌SKOV3细胞的增殖和凋亡

目的:探讨鱼藤素通过调控miR-520a-3p表达对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响。方法:将SKOV3细胞分为对照组(鱼藤素0μmol/L)、鱼藤素低剂量(5μmol/L)、中剂量(10μmol/L)、高剂量(20μmol/L)组,miR-NC组、过表达miR-520a-3p组,鱼藤素+anti-miR-NC组、鱼藤素+anti-miR-520a-3p组。CCK-8法、细胞集落形成实验、FCM以及qPCR法分别检测SKOV3细胞的增殖抑制率、细胞克隆形成数、凋亡率以及miR-520a-3p表达水平。结果:与对照组比较,鱼藤素(低、中、高剂量)组SKOV3细胞增殖抑制率、凋亡率、miR-520a-3p表达水平均显著升高(均P<0.05),细胞克隆形成数显著减少(P<0.05)。与miR-NC组比较,过表达miR-520a-3p组SKOV3细胞的增殖抑制率、凋亡率均显著升高(均P<0.05),细胞克隆形成数显著减少(P<0.05)。与鱼藤素+anti-miR-NC组比较,鱼藤素+anti-miR-520a-3p组SKOV3细胞的增殖抑制率、凋亡率均显著降低(均P<0.05),细胞克隆形成数显著增多(P<0.05)。结论:鱼藤素通过增加miR-520a-3p表达抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖能力,并诱导其凋亡。

p53对核仁应激诱导卵巢癌细胞凋亡的影响

目的:探究p53对核仁应激诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响。方法:体外培养SKOV3细胞,根据实验药物不同分成4个实验组:control组、BMH-21(核仁应激诱导剂)组、pifithrin-α(PFT-α;p53抑制剂)+BMH-21组和RG7112(抑制p53降解并激活p53通路)+BMH-21组。MTT法检测细胞活力;免疫荧光染色检测细胞中p53蛋白定位和表达水平,以及BMH-21诱导的核仁应激的发生;Western blot法检测蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:MTT结果显示,BMH-21组细胞活力比control组显著下降(P<0.01),PFT-α+BMH-21组细胞活力与BMH-21组相比无显著变化(P>0.05),而RG7112+BMH-21组比BMH-21组显著下降(P<0.01);荧光显微镜观察发现,BMH-21组p53蛋白表达水平比control组显著升高,PFT-α+BMH-21组p53蛋白表达水平比BMH-21组显著降低,而RG7112+BMH-21组比BMH-21组显著升高,且大部分入核堆积;Western blot结果显示,BMH-21组p53蛋白及线粒体途径凋亡相关蛋白表达水平比control组显著升高(P<0.01),PFT-α+BMH-21组p53蛋白表及线粒体途径凋亡相关蛋白表达水平比BMH-21组显著降低(P<0.05),而RG7112+BMH-21组比BMH-21组显著升高(P<0.01);流式细胞术结果显示,BMH-21组细胞凋亡率比control组显著升高(P<0.01),PFT-α+BMH-21组细胞凋亡率与BMH-21组相比无显著变化(P>0.05),而RG7112+BMH-21组比BMH-21组显著升高(P<0.01)。结论:BMH-21诱导人卵巢癌SKOV3细胞发生核仁应激时,抑制p53对细胞凋亡无明显影响,而激活和稳定p53会促进细胞凋亡。