ABT199通过增加Drp-1依赖的线粒体分裂诱导人皮肤鳞癌A431细胞凋亡

目的观察抗凋亡蛋白Bcl-2特异性抑制剂ABT199对A431细胞活力及凋亡的影响并探讨其机制。方法体外培养A431细胞,MTT法检测ABT199对A431细胞活力的影响,流式细胞术检测ABT199对A431细胞凋亡的影响,共聚焦显微镜观察ABT199联合线粒体分裂蛋白(mitochondrial dynamin-related protein-1,Drp-1)与线粒体分裂抑制剂-1 (mitochondrial division inhibitor-1,Mdivi-1)对线粒体长度变化的影响,Western blot检测ABT199联合mdivi-1对Cyto C释放、Drp-1线粒体转位及caspase-3和caspase-9活化的影响。流式细胞术检测ABT199联合mdivi-1对线粒体膜电位的影响。结果 MTT结果显示ABT199能以剂量依赖性的方式抑制A431细胞活力,24 h的IC50值为(10.33±0.93)μM。流式细胞术结果进一步表明ABT199能显著诱导A431细胞的凋亡,5μM、10μM、20μM ABT199作用A431细胞24 h,其细胞凋亡率分别为(16.10±2.65)%、(25.51±4.21)%、(54.21±4.89)%。荧光显微镜观察显示mdivi-1能减弱ABT199诱导的线粒体平均长度减短。Western blot结果显示mdivi-1能减弱ABT199诱导的Cyto C的释放、Drp-1线粒体转位及caspase-3和caspase-9的活化。流式细胞术结果表明mdivi-1减弱了ABT199诱导的线粒体膜电位下降。结论 ABT199在体外能抑制A431细胞活力并诱导其凋亡,其机制与增加Drp-1依赖的线粒体分裂有关。

高效液相色谱法检测ABT199的含量

建立反相高效液相色谱法快速测定ABT199原料药的含量。方法 采用Angilent Zorbax RX C8(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱;配制乙腈-1.0%三乙胺溶液(磷酸调Ph3.0)的混合溶液(60:40)作为流动相;调节1.0ml·min-1的流速,设置285nm作为检测波长,柱温设定为 30℃,吸取10μL进样。结果 空白溶剂峰不影响主峰的测定,ABT199色谱峰的理论塔板数不低于10000,本方法的线性良好,准确度高。结论 本研究开发的液相色谱方法简便、准确、高效,可以作为ABT199原料药质量标准中的含量检测方法。