低氧训练对大鼠心肌组织血管内皮祖细胞标记AC133表达的影响

目的:探讨低氧训练对大鼠心肌组织血管内皮祖细胞标记AC133表达的影响。方法:健康雄性SD大鼠16只,随机分为2组:对照组、高住高练组。高住高练组采用10周递增负荷跑台运动训练,每周训练6天,运动量由第1周的速度为15m/min、持续时间为25min递增至第10周速度为28m/min、持续时间为50min,每周二、四、六在相当于海拔1500m的低氧环境中训练,并且在低氧环境中居住,低氧程度由第1周相当于海拔1800m递增至第10周相当于海拔3600m。采用免疫组织化学方法检测CD34,定位心肌组织微血管;采用免疫组织化学及免疫电镜方法,检测微血管上AC133蛋白表达。结果:CD34可较好地标记心肌组织微血管;对照组大鼠心肌组织微血管内皮上有微弱的AC133蛋白表达,高住高练组大鼠心肌组织微血管内皮上有较多的AC133蛋白表达。结论:大鼠心肌内皮祖细胞归巢参与血管新生可能是低氧训练促进心肌血管新生的机制之一。

AC133抗原在急性白血病细胞中的表达

为了解AC133抗原在急性白血病细胞中的表达情况及其临床意义 ,采用常规三色直接免疫荧光标记法 ,使用流式细胞仪测定AC133抗原及其它白血病相关抗原在 61例急性白血病患者细胞中的表达。检测结果显示 ,61例中有 2 7例 (44 .3% )AC133表达阳性 ,其中ALL 13例 (13 2 9) ,AML M0 M16例 (6 8) ,AML M2 4例 (4 16) ,AML M4 M54例 (4 8)。 2 7例AC133+病例中2 5例 (92 .6% )同时表达CD34,13例 (48.1% )同时表达CD117。本研究结果提示 ,AC133抗原与CD34和CD117的表达有相关性。AC133抗原可表达于各型白血病中 ,但在AML M0

翼状胬肉组织中CD_(34)、AC133、STRO-1、C-KIT的表达

目的评估源自骨髓的干细胞与翼状胬肉发病的相关性,探寻翼状胬肉的发病机制。方法选择翼状胬肉头部达到瞳孔缘的病例12例(12眼),其中男6例,女6例;年龄51～66岁;原发性翼状胬肉8例,复发性翼状胬肉4例,均长于鼻侧。对照组材料来自同一眼球、距翼状胬肉边缘约10mm的正常球结膜组织。采用EnVision免疫组织化学法检测骨髓干细胞标志物来源的CD34、AC133、STRO-1、C-KIT的表达。结果光镜下可见翼状胬肉组织中有大量带有骨髓干细胞或祖细胞阳性标志物来源的细胞,翼状胬肉组织头部阳性表达更强。4种阳性细胞的分布及细胞形态类似。C-KIT阳性表达细胞聚集于翼状胬肉上皮基底组织和基质组织。上皮基底部阳性细胞呈圆形或椭圆形,而在基质组织中呈纺锤形且主要分布于血管周围。CD34阳性表达细胞主要分布于翼状胬肉组织上皮基底层,在血管内皮也有阳性表达,类似于C-KIT,但比C-KIT上皮层组织阳性细胞少。细胞形态在上皮基底部呈圆形或椭圆形。AC133阳性表达细胞主要分布于上皮层,基质和血管内皮中也有阳性表达,形态类似CD34和C-KIT。STRO-1阳性表达细胞的分布不同,主要见于基质层,阳性细胞形态呈纺锤形,而上皮层中未见表达。各种因子的表达在原发性和复发性翼状胬肉间无明显差别。对照组切片中标志物的表达均呈阴性。结论带有源自骨髓干细胞阳性标志物的细胞在翼状胬肉的发病和术后复发过程中可能起重要作用。

脐血来源AC133^+细胞在不同诱导条件下神经分化标志物的表达(英文)

背景:近年来,在啮齿类动物中发现,造血干细胞具有向神经分化的塑型性,而在人类,这种造血的塑型性仍然具有争议。目的:检测人脐血来源的AC133+造血干细胞是否具有向神经分化的潜能。设计、时间及地点:本实验为成组对照设计实验,于2005-08/2007-12在天津血液学研究所和清华大学玉泉医院神经中心实验室完成。材料:人脐带取自健康足月新生儿。胎脑滋养层细胞来源于22周流产胎儿脑组织。方法:应用免疫磁珠分选人脐血AC133+细胞,流式细胞仪检测其纯度为99%以上。同时以机械分离及酶消化法制备胎脑滋养层细胞。选用4种培养条件对脐血来源AC133+造血干细胞进行诱导分化:①生长培养液DMEM/F12加上皮生长因子和碱性成纤维生长因子。②DMEM/F12加上皮生长因子和碱性成纤维生长因子并联合使用脑源性生长因子,其间用全反式维甲酸处理3d。③非细胞接触的共培养体系,先将制备的胎脑滋养层细胞生长在培养板内插件的半透膜上,与培养板内的脐血来源的AC133+细胞进行共培养。④细胞直接接触共培养,将预先用BrdU标记的脐血来源的AC133+细胞直接种在胎脑滋养层细胞上进行共培养。主要观察指标:1,2,4周收集诱导分化的脐血细胞,以RT-PCT检测是否有巢蛋白、骨形态生成蛋白2及神经细胞黏附分子的表达,免疫细胞化学方法检测细胞分型特异性抗原。结果:部分脐血来源的AC133+细胞,在体外存在生长必需的因子上皮生长因子和碱性成纤维生长因子时,能表达一些与神经细胞分化有关的基因,如巢蛋白、骨形态生成蛋白,条件不同时,这些基因出现下调和关闭。在DMEM/F12加上皮生长因子和碱性成纤维生长因子联合使用脑源性生长因子诱导培养液中,上述基因表达在2周时可检测到,同时可检测到神经发育过程中出现的另一分子神经细胞黏附分子,这一分子在造血过程中并不出现,在使用内插件的胎脑滋养层细胞共培养的脐血细胞中也检测到相同结果。在优化的非细胞接触条件中主要表达胶质酸性蛋白,在细胞直接接触的共培养体系中出现神经元分化的标志物Ⅲβ-tubulin蛋白的表达。这种基因表达变化提示,在特定的培养环境下,脐血来源的AC133+细胞内可能出现了基因重排,使造血潜能的干细胞表达神经细胞发育分子。结论:脐血来源的AC133+细胞包含部分具有向神经分化潜能的多能干细胞,在适合条件下,表达神经分化相关抗原。

AC133-2分子的克隆及其逆转录病毒表达载体的构建

目的克隆人AC133-2全长基因,构建PGEZ-Term-AC133—2逆转录病毒表达载体。方法采用分段克隆的方法,通过聚合链式反应从胎肝文库中克隆AC133-2,并构建AC133—2基因的逆转录病毒表达载体。结果成功克隆AC133—2全长基因并构建PGEZ-Term-AC133-2逆转录病毒表达载体。结论AC133-2全长基因克隆及构建逆转录病毒表达载体的成功,为构建AC133-2转基因细胞和制备抗人AC133-2单克隆抗体和研究AC133-2的生物学功能奠定了物质基础。

人胎盘AC133^+造血干/祖细胞的集落形成能力

探究了人体胎盘组织AC133+造血干/祖细胞(HSPC)的集落形成能力。选用新鲜的人胎盘组织制成单个细胞(有核细胞)悬液,经流式细胞术(FCM)分析其AC133+造血干/祖细胞的纯度,采用免疫磁性分选法(MACS)分选AC133+和AC133-HSPC,分别进行粒-单集落形成单位(CFU-GM)、红系集落形成单位(CFU-E)、混合集落形成单位(CFU-Mix)培养,以评价其增殖分化能力。结果显示胎盘组织AC133+细胞百分率为4.11%,其细胞亚群集落培养形成CFU-GM的集落数为(37±3)/1×103;形成CFU-Mix的集落数为(34±5)/1×103;形成CFU-E集落数为(33±4)/1×103。胎盘AC133-细胞未见集落形成。结论:人胎盘组织含HSPC,AC133+细胞具有分化为CFU-GM、CFU-Mix、CFU-E的能力;AC133膜抗原可作为胎盘HSPC的分选标志。

SDF-1／CXCR4对脐血AC133^＋细胞趋化功能的影响

本研究探讨SDF1/CXCR4系统在脐血AC133+细胞趋化中的作用。用跨膜迁移实验(Transwell实验)确定SDF-1最佳趋化浓度,采用双色直接免疫荧光标记法和流式细胞仪测定脐血AC133+细胞表面CXCR4表达水平,并评价SDF-1最佳趋化浓度条件下细胞迁移率。结果发现,随着SDF-1浓度的增加,新鲜脐血AC133+细胞迁移率升高,但SDF-1浓度达到150ng/ml时迁移率趋于平稳;当CXCR4阻断型抗体作用后,迁移率与未加SDF-1组无差异。重组人造血生长因子组合SCF、FL、TPO体外培养AC133+细胞时,在培养的早期趋化因子SDF-1受体CXCR4的表达升高,同时迁移率也升高,但随着培养时间的延长,CXCR4表达量渐渐降低,迁移率随之降低。结论:AC133+细胞趋化率与CXCR4表达量间存在相关性。

AC133和EpCAM在人肺腺癌中的表达及双阳性细胞的分选

目的:通过双重免疫荧光染色法检测人肺腺癌组织标本中AC133以及上皮细胞黏附分子(EpCAM)的表达,并以流式细胞术分选AC133+EpCAM+细胞,为后续人肺腺癌干细胞研究提供实验基础。方法:取人肺腺癌组织标本,冰冻切片,进行双重免疫荧光染色,通过激光共聚焦显微镜检测腺癌组织内AC133和EpCAM的表达。以胶原酶和分散酶将新鲜肺腺癌组织标本制为单细胞悬液,滤除其中的胶原并去除红细胞后,以AC133和EpCAM共同标记单细胞,上流式细胞仪进行分选。结果:在人肺腺癌标本中具有AC133和EpCAM的表达;通过流式细胞术可分选到AC133和EpCAM共表达细胞。结论:验证了人肺腺癌组织中AC133和EpCAM的表达情况;通过流式细胞术分选获得AC133和EpCAM双标记阳性细胞,可为人肺腺癌干细胞的后续研究提供实验基础。

细胞因子组合对受照射脐带血AC133^+细胞周期和早期凋亡的影响

采用免疫标记法,使用流式细胞仪测定受到2.5Gy6MV-X射线照射的脐带血AC133+细胞加细胞因子组合(IL-3+FL+SCF)在培养不同天数后的细胞周期及早期凋亡情况的变化。结果表明,新鲜分离的未受照的脐带血AC133+细胞在无细胞因子的短期液体培养体系中培养2天,99%的细胞处于G0/G1期;受照的脐带血AC133+细胞加细胞因子组合(IL-3+FL+SCF)培养不同天数后,脐带血AC133+细胞迅速进入增殖循环,在照后第3天,有近50%的细胞进入S期。脐带血AC133+细胞受照后不加细胞因子,培养48小时后,镜下观察到细胞全部死亡;加细胞因子组合(IL-3+FL+SCF)培养48小时后,有(38.0±6.8)%的受照的脐带血AC133+细胞被“救活”,且随着培养时间的延长,被“救活”的AC133+细胞又出现了增殖。因此,可认为细胞因子组合(IL-3+FL+SCF)对受照的脐带血AC133+细胞具有保护作用。

不同细胞因子组合对脐带血AC133^+细胞体外扩增效率的影响

目的探讨不同细胞因子组合对脐带血AC133+细胞体外扩增效率的影响。方法采用免疫荧光标记法,使用流式细胞仪测定新鲜分离的、不同培养条件下体外培养7、14d的脐带血AC133+细胞的扩增效率。结果新鲜脐带血AC133+细胞的比例为(0.93±0.2)%。短期液体扩增培养后,脐带血AC133+细胞的比例发生明显变化,其中在细胞因子SCF、FL和IL-3组合下,AC133+细胞的细胞数及扩增倍数与SCF、FL和IL-11组合相比较,差异非常显著(P<0.01)。结论在体外短期扩增培养中,早期效应细胞因子能显著上调脐带血AC133+细胞的比例;用SCF、FL和IL-3组合扩增脐带血造血干/祖细胞,能够获得更高的体外扩增效率。

不同组合方式的细胞因子对人骨髓AC133^+和CD34^+细胞增殖的影响

目的探讨细胞因子不同的组合方式对人骨髓CD34+富集细胞及AC133+富集细胞体外扩增潜能的影响。方法常规富集人骨髓CD34+及AC133+细胞,应用本研究组设计并已经证实的细胞因子组合方式,对人骨髓CD34+及AC133+富集细胞进行体外对照培养,分别观察CD34+和AC133+富集细胞的扩增情况;应用甲基纤维素半固体培养法,观察不同组别培养7、14、21 d CD34+和AC133+富集细胞的集落形成情况及细胞凋亡率。结果AC133+细胞实验组在相同条件下细胞扩增倍数以及集落生成数目上均明显高于CD34+细胞实验组,相同条件下细胞凋亡率明显低于CD34+细胞实验组。结论AC133+细胞包含有更多原始的造血干细胞,AC133作为造血干细胞抗原标记明显优于CD34。

脐血AC133^+细胞迁移率与趋化因子受体CXCR4相关性研究

目的探讨脐血AC133+细胞迁移率与趋化因子受体CXCR4相关性。方法采用双色直接免疫荧光标记法,使用流式细胞仪测定在含干细胞因子(SCF)、Flt3配体(FL)、血小板生成素(TPO)培养条件下,在培养的第0、4、7、10、14天脐血AC133+细胞表面CXCR4表达水平,并用跨膜迁移实验(Transwell实验)来评价在相同趋化因子基质细胞衍生因子(SDF)-1浓度条件下细胞迁移率。结果重组人造血生长因子组合SCF、FL、TPO体外培养AC133+细胞时,培养的早期,SDF-1受体CXCR4的表达升高,同时迁移率也升高。但随着培养时间的延长,CXCR4表达量渐渐降低,迁移率随之降低。结论通过Transwell Plate可以有效地模拟细胞穿越内皮现象。AC133+细胞迁移率与趋化因子受体CXCR4表达量间存在相关性,应用CXCR4阻断抗体后AC133+细胞迁移率与未加SDF-1差异无统计学意义。

细胞因子不同的组合方式对人骨髓Ac133+细胞增殖的影响

目的探讨细胞因子不同的组合方式对人骨髓AC133+富集细胞体外扩增的影响。方法常规富集AC133+细胞,按照细胞因子不同的组合方式分为2组,在不同细胞因子组合刺激下进行体外对照培养,观察AC133+富集细胞的扩增情况;应用甲基纤维素半固体培养法,观察不同组别培养7天、14天、21天AC133+富集细胞的集落形成情况及细胞凋亡率。结果观察组的细胞因子组合扩增倍数、集落形成数目于培养7天后明显高于对照组,P<0.01;细胞凋亡率于培养21天后低于对照组,P<0.05。结论观察组的细胞因子组合方式既维持了干细胞自我更新的能力又在很大程度上扩增了造血祖细胞,显示了充分的优越性。

干细胞表面抗原AC133研究进展

AC133抗原是最近干细胞研究领域的热点。本文从基因及蛋白结构、转录调控、抗原表达、生物功能以及应用前景等方面进行综述。

Syndecan-1在神经干细胞的表达及其与AC133的关系

目的研究syndecan-1(CD138)在人的胚胎神经干细胞上的表达及其与AC133的关系。方法采用免疫荧光标记和流式细胞仪分析,通过CD138、AC133直标单克隆抗体(mAb)观察神经干细胞细胞膜上CD138和AC133荧光标记阳性率;同时通过双重免疫荧光标记法,观察神经干细胞细胞膜上共表达CD138和AC133的百分比。结果神经干细胞上均表达CD138和AC133分子,同时,表达AC133分子的神经干细胞约有50%左右表达CD138分子。结论在神经干细胞的早期已有CD138分子的表达,其对神经干细胞的生长、分化等作用值得进一步研究。

造血干细胞表面标志物AC133的研究进展

AC133是近几年才发现的分子质量为119 ku的新型糖蛋白,主要选择性表达于成人骨髓、胎肝、脐带血及外周血等造血组织的CD34^+造血干、祖细胞(HSPC),而不表达于血管内皮细胞。AC133抗原是继CD34之后发现的又一重要的HSPC表面标志,并且可能更优于CD34原始细胞标志,具有很好的应用前景。本文就AC133的研究进展作一综述,重点介绍其抗原结构、抗体的制备和分析、表达、与其他抗原关系及应用前景。

AC133:一个新的人造血干细胞表面标记

ACl33是最近识别的一个新的造血干细胞表面标记,本文就其抗体制备、蛋白表达分布及其与CD34的关系等作一综述。