人胎盘AC133^+造血干/祖细胞的集落形成能力

探究了人体胎盘组织AC133+造血干/祖细胞(HSPC)的集落形成能力。选用新鲜的人胎盘组织制成单个细胞(有核细胞)悬液,经流式细胞术(FCM)分析其AC133+造血干/祖细胞的纯度,采用免疫磁性分选法(MACS)分选AC133+和AC133-HSPC,分别进行粒-单集落形成单位(CFU-GM)、红系集落形成单位(CFU-E)、混合集落形成单位(CFU-Mix)培养,以评价其增殖分化能力。结果显示胎盘组织AC133+细胞百分率为4.11%,其细胞亚群集落培养形成CFU-GM的集落数为(37±3)/1×103;形成CFU-Mix的集落数为(34±5)/1×103;形成CFU-E集落数为(33±4)/1×103。胎盘AC133-细胞未见集落形成。结论:人胎盘组织含HSPC,AC133+细胞具有分化为CFU-GM、CFU-Mix、CFU-E的能力;AC133膜抗原可作为胎盘HSPC的分选标志。

不同细胞因子组合对脐带血AC133^+细胞体外扩增效率的影响

目的探讨不同细胞因子组合对脐带血AC133+细胞体外扩增效率的影响。方法采用免疫荧光标记法,使用流式细胞仪测定新鲜分离的、不同培养条件下体外培养7、14d的脐带血AC133+细胞的扩增效率。结果新鲜脐带血AC133+细胞的比例为(0.93±0.2)%。短期液体扩增培养后,脐带血AC133+细胞的比例发生明显变化,其中在细胞因子SCF、FL和IL-3组合下,AC133+细胞的细胞数及扩增倍数与SCF、FL和IL-11组合相比较,差异非常显著(P<0.01)。结论在体外短期扩增培养中,早期效应细胞因子能显著上调脐带血AC133+细胞的比例;用SCF、FL和IL-3组合扩增脐带血造血干/祖细胞,能够获得更高的体外扩增效率。

不同组合方式的细胞因子对人骨髓AC133^+和CD34^+细胞增殖的影响

目的探讨细胞因子不同的组合方式对人骨髓CD34+富集细胞及AC133+富集细胞体外扩增潜能的影响。方法常规富集人骨髓CD34+及AC133+细胞,应用本研究组设计并已经证实的细胞因子组合方式,对人骨髓CD34+及AC133+富集细胞进行体外对照培养,分别观察CD34+和AC133+富集细胞的扩增情况;应用甲基纤维素半固体培养法,观察不同组别培养7、14、21 d CD34+和AC133+富集细胞的集落形成情况及细胞凋亡率。结果AC133+细胞实验组在相同条件下细胞扩增倍数以及集落生成数目上均明显高于CD34+细胞实验组,相同条件下细胞凋亡率明显低于CD34+细胞实验组。结论AC133+细胞包含有更多原始的造血干细胞,AC133作为造血干细胞抗原标记明显优于CD34。

脐血AC133^+细胞迁移率与趋化因子受体CXCR4相关性研究

目的探讨脐血AC133+细胞迁移率与趋化因子受体CXCR4相关性。方法采用双色直接免疫荧光标记法,使用流式细胞仪测定在含干细胞因子(SCF)、Flt3配体(FL)、血小板生成素(TPO)培养条件下,在培养的第0、4、7、10、14天脐血AC133+细胞表面CXCR4表达水平,并用跨膜迁移实验(Transwell实验)来评价在相同趋化因子基质细胞衍生因子(SDF)-1浓度条件下细胞迁移率。结果重组人造血生长因子组合SCF、FL、TPO体外培养AC133+细胞时,培养的早期,SDF-1受体CXCR4的表达升高,同时迁移率也升高。但随着培养时间的延长,CXCR4表达量渐渐降低,迁移率随之降低。结论通过Transwell Plate可以有效地模拟细胞穿越内皮现象。AC133+细胞迁移率与趋化因子受体CXCR4表达量间存在相关性,应用CXCR4阻断抗体后AC133+细胞迁移率与未加SDF-1差异无统计学意义。

细胞因子不同的组合方式对人骨髓Ac133+细胞增殖的影响

目的探讨细胞因子不同的组合方式对人骨髓AC133+富集细胞体外扩增的影响。方法常规富集AC133+细胞,按照细胞因子不同的组合方式分为2组,在不同细胞因子组合刺激下进行体外对照培养,观察AC133+富集细胞的扩增情况;应用甲基纤维素半固体培养法,观察不同组别培养7天、14天、21天AC133+富集细胞的集落形成情况及细胞凋亡率。结果观察组的细胞因子组合扩增倍数、集落形成数目于培养7天后明显高于对照组,P<0.01;细胞凋亡率于培养21天后低于对照组,P<0.05。结论观察组的细胞因子组合方式既维持了干细胞自我更新的能力又在很大程度上扩增了造血祖细胞,显示了充分的优越性。

细胞因子组合对受照射脐带血AC133^+细胞周期和早期凋亡的影响

采用免疫标记法,使用流式细胞仪测定受到2.5Gy6MV-X射线照射的脐带血AC133+细胞加细胞因子组合(IL-3+FL+SCF)在培养不同天数后的细胞周期及早期凋亡情况的变化。结果表明,新鲜分离的未受照的脐带血AC133+细胞在无细胞因子的短期液体培养体系中培养2天,99%的细胞处于G0/G1期;受照的脐带血AC133+细胞加细胞因子组合(IL-3+FL+SCF)培养不同天数后,脐带血AC133+细胞迅速进入增殖循环,在照后第3天,有近50%的细胞进入S期。脐带血AC133+细胞受照后不加细胞因子,培养48小时后,镜下观察到细胞全部死亡;加细胞因子组合(IL-3+FL+SCF)培养48小时后,有(38.0±6.8)%的受照的脐带血AC133+细胞被“救活”,且随着培养时间的延长,被“救活”的AC133+细胞又出现了增殖。因此,可认为细胞因子组合(IL-3+FL+SCF)对受照的脐带血AC133+细胞具有保护作用。

细胞因子介导的体外扩增对脐血干/祖细胞粘附分子表达的影响

目的比较脐血（ＣＢ）ＡＣ１３３＋细胞扩增前后ＣＤ３４＋ 细胞亚群表面归巢相关粘附分子ＶＬＡ－４（ＣＤ４９ｄ）、ＶＬＡ－５（ＣＤ４９ｅ）、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ）、Ｌ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ（ＣＤ６２Ｌ）和ＰＥＣＡＭ－１（ＣＤ３１）等的表达情况，以评价细胞因子介导的体外扩增对干／祖细胞（ＨＳＰＣ）归巢功能的影响。方法将从新鲜ＣＢ标本中纯化的ＡＣ１３３＋ 细胞接种于无血清培养基ＱＢＳＦ－６０的无基质悬浮体系培养扩增１４ｄ，加入早期作用因子ＦＬ、ＳＣＦ和ＴＰＯ组合（ＦＳＴ），并在接种０ｄ时添加一剂ＩＬ－３，分别于培养０，７、１０和１４ｄ检测扩增潜能和上述几种粘附分子的表达情况。结果（１）在１４ｄ的培养扩增中，各阶段的ＨＳＰＣ均得到有效扩增，至１４ｄ时ＡＣ１３３＋和ＣＤ３４＋细胞分别增加３３．５０和６４．５６倍；（２）表达上述粘附分子的各ＣＤ３４＋ 细胞亚群均有不同程度（约２０～１６０倍）的扩增；（３）扩增后ＣＤ３４＋ 细胞表面的粘附分子ＣＤ１１ａ、ＣＤ４９ｅ和ＣＤ４９ｄ的表达与原代ＣＤ３４＋细胞持平或上升，而ＣＤ６２Ｌ和ＣＤ３１的表达则有不同程度的下调。结论我们建立的短期培养体系不仅可以支持ＣＢ ＨＳＰＣ的?

人骨髓造血干细胞体外扩增培养及其生物学特性研究

目的:探讨人骨髓单个核细胞(MNCs)、人骨髓AC133+富集细胞在不同的细胞因子组合刺激下的体外扩增潜能及不同细胞因子组合对其生物学特性的影响。方法:常规分离人骨髓MNCs,富集AC133+细胞,将细胞因子分为6个组合,在不同细胞因子组合刺激下进行体外培养,观察人骨髓MNCs及AC133+富集细胞的扩增情况及AC133细胞表型的表达;应用甲基纤维素半固体培养法,观察在不同细胞因子刺激下的不同培养时间的人骨髓MNCs及AC133+富集细胞的集落形成。结果:相同条件下,人骨髓MNCs明显高于AC133+富集细胞扩增倍数(P<0.05);在细胞因子组合6刺激下人骨髓MNCs及AC133+富集细胞扩增倍数有明显优势(P<0.05),集落生成也高于其他组合(P<0.05),细胞表型AC133的表达与集落形成数目一致。结论:通过4周的体外短期培养,人骨髓MNCs较AC133+富集细胞更有优势,细胞因子组合6为体外扩增的首选组合。

FL联合TPO体外培养AC133^+细胞表面标记的变化

目的 :探讨脐血造血干 /祖细胞的体外扩增。方法 :免疫磁珠法分离纯化脐血 AC133+细胞 ,在细胞因子 FL T3配体、血小板生成素作用下 ,体外扩增 ,检测有核细胞扩增的倍数。采用流式细胞仪分析细胞表面标志的变化。结果 :FL T3联合血小板生成素体外培养 2周。有核细胞扩增 ( 18± 8)倍。CD3 4 细胞扩增 2 .8倍 ,AC133+未获扩增 ,CD3 4 细胞纯度由 ( 5 6± 2 3) %下降到 ( 8± 1) % ,AC133+细胞由 85 %下降到 ( 0 .1± 0 .1) %。随着体外培养时间延长至 4周 ,有核细胞 ,CD+3 4 进一步扩增。分别扩增 475倍和 17倍。但细胞随之发生分化 ,CD+3 4 细胞占有核细胞中的比例下降至 2 % ,AC133+细胞消失。 CD45 细胞上升到 1.3%。结论 :FL联合 TPO长期培养 AC133+细胞能使CD3 4