一个抑制AP-1活性的人类新基因AC3-33的克隆和初步功能研究

Activator protein-1(AP-1)是重要的转录因子,其活性失调与肿瘤等多种疾病直接相关。本文运用"高通量高内涵细胞筛选技术(high throughput-high content cell-based screening technology)"对650个以未知功能基因为主的人类基因进行AP-1双荧光素酶报告基因筛选(Dual-Luciferase reporter gene screening),获得了一个可抑制佛波酯(PMA)加离子霉素(Inonmycin)诱导的AP-1活性的人类新基因AC3-33(GenBank中该基因名为C3orf33,No.FLJ31139)。生物信息学分析该基因序列全长1931bp,由6个外显子和5个内含子组成,定位于3q25.31,从271～1026有一个编码251个氨基酸的可读框,编码一个约29kDa的蛋白,在肾上腺和宫颈等多种组织都有表达。AC3-33与其他人类已知蛋白质没有明显的同源性,亚细胞定位于细胞质中,许多氨基酸序列高度保守。初步实验结果显示AC3-33是一个有重要功能的人类新基因。

AC3-33基因沉默对乳腺癌细胞体外迁移能力的抑制作用

乳腺癌是女性高发恶性肿瘤之一,其发生发展是一个多基因参与的复杂过程。AC3-33是一个可以抑制AP-1活性的分泌蛋白,本研究旨在探讨AC3-33在乳腺癌细胞中的表达及其调控乳腺癌迁移的功能。首先采用定量-PCR检测了AC3-33在ZR-75-30、MDA-MB-231、T-47D和MCF-7 4种乳腺癌细胞中的表达差异;然后构建了3个特异性沉默AC3-33表达的载体,采用双荧光素酶实验、定量-PCR和绿色荧光观察筛选沉默效果最明显的质粒用于后续实验;最后采用Transwell迁移实验检测了过表达或沉默内源性AC3-33对MCF-7细胞迁移的影响。研究表明AC3-33在4种乳腺癌细胞中均高表达;通过双荧光素酶实验、定量-PCR和绿色荧光强度的检测确定si-AC3-33沉默AC3-33表达的效果最佳;迁移实验表明过表达AC3-33可以抑制MCF-7细胞的迁移能力,而特异性沉默内源性AC3-33的表达,MCF-7细胞的迁移能力则会显著增强。本研究证明了AC3-33具有抑制乳腺癌细胞迁移的作用,希望为乳腺癌的防治提供新的防治靶点。