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巴西橡胶树ACA/ECA基因家族鉴定及分析
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作者 杨晶晶 方永军 +4 位作者 张鸿韬 龙翔宇 秦云霞 阳江华 肖小虎 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2023年第11期2244-2255,共12页
Ca^(2+)是植物细胞的第二信使,Ca^(2+)-ATPase(ACA/ECA)作为Ca^(2+)运输的重要蛋白,在保证细胞内钙离子的平衡和植物非生物胁迫方面发挥着至关重要的作用。为了研究巴西橡胶树中Ca^(2+)-ATPase(ACA/ECA)的生物学功能,以模式植物拟南芥的... Ca^(2+)是植物细胞的第二信使,Ca^(2+)-ATPase(ACA/ECA)作为Ca^(2+)运输的重要蛋白,在保证细胞内钙离子的平衡和植物非生物胁迫方面发挥着至关重要的作用。为了研究巴西橡胶树中Ca^(2+)-ATPase(ACA/ECA)的生物学功能,以模式植物拟南芥的ACA/ECA蛋白序列为探针,从橡胶树基因组中鉴定得到45个ACA/ECA基因家族成员,其中ACA成员38个,ECA成员7个。利用Expasy、Plant-mPLoc等工具对45个成员的理化性质、基因结构、染色体定位、系统进化和表达进行全面分析。理化性质分析表明:各成员编码蛋白的氨基酸数目为86~1142个,氨基酸分子量在10048.04~125412.75 Da之间,蛋白产物多定位于细胞质膜,有少量成员定位于内质网、叶绿体、液泡和细胞核。在进化方面,ACA/ECA家族成员明显聚于ACA和ECA两个分枝,2个分支中橡胶树始终与木薯紧靠,表明在系统进化过程中橡胶树与木薯存在较近的亲缘关系。染色体定位结果显示:ACA/ECA家族的45个成员不均匀地分布在橡胶树的14条染色体和1个contig上,其中2号和9号染色体上成员分布最多,为11个。表达分析显示:部分成员在不同组织中的表达存在显著差异,HbACA31在叶片中表达丰度最高,HbACA36在胶乳中表达丰度最高,并且HbACA36经乙烯利刺激处理后在胶乳中的表达明显上调。另外,本研究还分析了割胶对ACA/ECA家族成员基因表达的影响,发现HbACA36在PR107和热研8-79两个橡胶树品种割胶过程中均处于较高的表达水平,并且在高产品种热研8-79开割过程中明显上调表达,推测HbACA36参与橡胶树产胶排胶调控,并在其中起重要作用。本研究结果首次揭示了橡胶树ACA/ECA家族成员的理化性质和表达模式,为进一步研究ACA/ECA基因在巴西橡胶树中的生物学功能,特别是橡胶树产胶调控方面的功能奠定基础。 展开更多
关键词 巴西橡胶树 Ca^(2+)-ATPase(aca/ECA) 基因家族 生物学功能 表达分析
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牛ACAS2基因的克隆、序列分析及染色体物理定位 被引量:1
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作者 马云 许尚忠 +4 位作者 高雪 张英汉 辛亚平 高树新 任红艳 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2006年第10期21-26,共6页
以中国西门塔尔牛肝脏组织为材料,运用同源序列克隆技术并结合RT-PCR技术,对牛ACAS 2基因的部分cDNA进行了克隆与序列分析,应用SUN bRH 7000型辐射杂种板对分离的牛ACAS 2基因进行了染色体定位。结果显示,本研究所获得的长为1 535 bp的c... 以中国西门塔尔牛肝脏组织为材料,运用同源序列克隆技术并结合RT-PCR技术,对牛ACAS 2基因的部分cDNA进行了克隆与序列分析,应用SUN bRH 7000型辐射杂种板对分离的牛ACAS 2基因进行了染色体定位。结果显示,本研究所获得的长为1 535 bp的cDNA序列为牛ACAS 2基因的部分编码序列,该段序列与人(G enB ank登录号:NM-139274)和小鼠(G enB ank登录号:NM-019811)的ACAS 2基因mRNA序列的相似性分别为91%和88%;牛ACAS 2基因被定位于牛的13号染色体上,与该染色体上的标记D IK 4350的距离为1.51 cR。 展开更多
关键词 乙酰辅酶A合成酶2基因 基因克隆 辐射杂种板 染色体定位
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GL-7-ACA酰化酶基因片段的酶谱分析及基因定位 被引量:3
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作者 杨蕴刘 恽定芳 +1 位作者 彭惠琳 焦瑞身 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1992年第1期15-22,共8页
本文报道了从假单胞菌130菌株(Pseudomonas sp.130)染色体上克隆得到的6.8kb的GL-7-ACA酰化酶基因片段的限制酶谱,基因定位以及在不同的大肠杆菌基因启动子控制下酰化酶基因的表达水平。结果表明,所克隆的片段上,不存在EcoR Ⅰ、Hind Ⅱ... 本文报道了从假单胞菌130菌株(Pseudomonas sp.130)染色体上克隆得到的6.8kb的GL-7-ACA酰化酶基因片段的限制酶谱,基因定位以及在不同的大肠杆菌基因启动子控制下酰化酶基因的表达水平。结果表明,所克隆的片段上,不存在EcoR Ⅰ、Hind Ⅱ、Cla Ⅰ切点,分别具有一个Hpa Ⅰ、两个Xho Ⅰ、三个BamH Ⅰ以及四个Pst Ⅰ切点,同时初步确定了这些酶切位点之间的相对位置。经过一系列次级克隆研究,GL-7-ACA酰化酶基因已被定位在3.0kb的B_2-B_3-Hpa Ⅰ片段上。实验比较了以pACYC184、pDR540、pUC10等为载体的次级克隆株(分别为pMR9、pMR10和pMR11)在大肠杆菌中酰化酶基因的表达水平,测定数据表明tac启动子的启动活力比tet启动子强,即pMR10的产酶量比pMR9高一倍,而当tac启动子前再串接一个lac启动子时(pMR11),产酶水平并不进一步提高。本文还对假单胞菌基因在大肠杆菌中的表达进行了讨论。 展开更多
关键词 基因定位 基因表达 GL7aca酰化酶
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GL-7-ACA酰化酶基因克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量:8
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作者 杨蕴刘 恽定芳 +4 位作者 关颖谦 彭惠林 陈剑民 何云生 焦瑞身 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1991年第2期99-107,共9页
本文报道了利用BamHI酶解的载体pBR322 DNA与Sau3A部分酶解的假单胞菌Ps.130染色体DNA片段构建重组质粒,并用^(32)P标记的寡核苷酸探针从3205个含有外源片段的重组质粒中检测得到7株阳性克隆株。进一步经^(125)I一标记的抗体/抗原放射... 本文报道了利用BamHI酶解的载体pBR322 DNA与Sau3A部分酶解的假单胞菌Ps.130染色体DNA片段构建重组质粒,并用^(32)P标记的寡核苷酸探针从3205个含有外源片段的重组质粒中检测得到7株阳性克隆株。进一步经^(125)I一标记的抗体/抗原放射免疫反应、GL-7-ACA酰化酶活力测定以及酶反应产物的纸谱色层分析,由上述7株阳性株中鉴定出3株能在大肠杆菌中表达酰化酶活力的基因克隆株。对该3株菌的重组质粒——pMR 5、pMR 6和pMR7 DNA的初步凝胶电泳分析表明,pMR 5和pMR 7质粒中插入片段的分子量为6.8kb,质粒pMR 6则带有5.7kb的外源片段。实验还比较了重级质粒pMR5在8株不同的大肠杆菌宿主菌中,GL-7-ACA酰化酶的表达水平。 展开更多
关键词 7-aca酰化酶 基因克隆 基因表达
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尾穗苋凝集素(ACA)基因植物表达载体的构建 被引量:1
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作者 田华英 庞彩红 +7 位作者 夏阳 包颖 咸洋 李双云 李丽 刘翠兰 毛秀红 燕丽萍 《山东农业科学》 2011年第6期10-13,共4页
尾穗苋凝集素(Amaranthus caudatusagglutin in,ACA)是一种存在于尾穗苋种子中的贮藏蛋白,属苋菜凝集素家族,对同翅目害虫如蚜虫、褐飞虱、叶蝉等有明显的致死作用。植物表达载体pCAMB IA2300-35S-OCS带有35S启动子及终止序列、卡那霉素... 尾穗苋凝集素(Amaranthus caudatusagglutin in,ACA)是一种存在于尾穗苋种子中的贮藏蛋白,属苋菜凝集素家族,对同翅目害虫如蚜虫、褐飞虱、叶蝉等有明显的致死作用。植物表达载体pCAMB IA2300-35S-OCS带有35S启动子及终止序列、卡那霉素(Kan)抗性基因NPTⅡ。载体pGEMT-ACA含有ACA基因,通过PCR扩增出ACA基因。把植物表达载体pCAMB IA2300-35S-OCS和扩增后的ACA基因用KpnⅠ和SalⅠ双酶切后经连接酶连接,得到植物表达载体pCAMB IA2300-ACA。将该载体分别导入农杆菌GV3101和LBA4404进行保存。 展开更多
关键词 aca基因 植物表达载体 构建
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大白菜ACA基因家族的全基因组鉴定与表达分析 被引量:6
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作者 王洁 吴晓宇 +2 位作者 杨柳 段巧红 黄家保 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第22期4851-4868,共18页
【目的】通过对大白菜ACA(Ca^(2+)-ATPase)基因家族鉴定与表达分析,研究其家族基因间的共性与特性,为进一步揭示ACA家族进化关系提供数据支撑,为深入解析BraACAs在低温胁迫、盐胁迫以及自交不亲和方面的功能研究奠定基础。【方法】根据... 【目的】通过对大白菜ACA(Ca^(2+)-ATPase)基因家族鉴定与表达分析,研究其家族基因间的共性与特性,为进一步揭示ACA家族进化关系提供数据支撑,为深入解析BraACAs在低温胁迫、盐胁迫以及自交不亲和方面的功能研究奠定基础。【方法】根据已报道的拟南芥ACA基因家族,同源比对出大白菜ACA基因家族,利用在线软件Expasy预测其分子量、理论等电点等理化性质;采用MEGA 5.0软件构建系统进化树;运用在线软件GSDS 2.0绘制基因结构图谱;TBtools对其染色体定位;McscanX软件进行拟南芥与大白菜ACA家族基因共线性分析;利用在线软件PlantCARE预测大白菜ACA基因家族启动子元件;通过在线工具Pfam和MEME进行蛋白保守结构域分析;利用qRT-PCR技术检测BraACAs在不同组织、非生物胁迫和自交异交授粉后的表达量。【结果】大白菜ACA基因家族有18个基因成员,分布在大白菜10条染色体上;根据进化树关系分成4组,分别包含3、4、4和7个成员;蛋白结构域分析显示,有13个成员包含N端自抑结构域。qRT-PCR结果表明,BraACAs主要在花与果荚中高表达;低温胁迫下,Bra002762与Bra035649表达量总体上调;盐胁迫下,Bra031701表达量显著上调;自交和异交授粉中,Bra003276和Bra024117差异性表达。对Bra002762、Bra035649、Bra031701、Bra003276和Bra024117亚细胞定位分析,发现这些基因均定位在细胞质膜上。【结论】大白菜ACA家族基因蛋白结构均含有4个ACA基因特有的高度保守结构域。该家族在大白菜不同组织中表达模式不同,5个ACA家族基因成员编码蛋白定位于细胞膜上,其中Bra002762、Bra035649、Bra031701与低温和盐胁迫响应有关;Bra003276和Bra024117与自交不亲和性相关。 展开更多
关键词 aca家族 Ca^(2+)-ATPase 低温胁迫 盐胁迫 自交不亲和 大白菜
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GL-7-ACA酰化酶发酵培养基的均匀优化设计 被引量:4
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作者 胡爱红 莫章桦 《生命科学研究》 CAS CSCD 2004年第1期89-91,共3页
采用国产原料,应用均匀设计优选试验方法,对GL-7-ACA酰化酶生产用的发酵培养基配方进行了优化,取得了良好的效果,最终摇瓶效价达3919.03 U/L。
关键词 GL-7-aca酰化酶 发酵培养基 基因工程菌 7-氨基头孢烷酸 抗生素
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两种凝集素基因在转基因烟草中表达的研究 被引量:12
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作者 刘召华 张振山 +3 位作者 郭洪年 贾燕涛 郑光宇 田颖川 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第7期758-763,共6页
构建了含尾穗苋凝集素基因(ACA)的cDNA序列和改造后的雪花莲凝集素基因(GNA)的植物表达载体pBACG。在此表达载体中,ACA和GNA基因的表达分别由35S启动子和CoYMV启动子控制。通过农杆菌介导,将ACA和GNA基因转化到烟草中,经卡那霉素筛选获... 构建了含尾穗苋凝集素基因(ACA)的cDNA序列和改造后的雪花莲凝集素基因(GNA)的植物表达载体pBACG。在此表达载体中,ACA和GNA基因的表达分别由35S启动子和CoYMV启动子控制。通过农杆菌介导,将ACA和GNA基因转化到烟草中,经卡那霉素筛选获得60株转化再生植株。对PCR检测呈阳性的50株植株进行接蚜虫实验,结果表明,其平均抑虫率达83.9%。Southernblotting分析表明,ACA和GNA基因都已整合到烟草基因组中。Westernblotting结果显示这两个基因在不同植株中都可表达其相应的蛋白质,但表达水平不同。部分Westernblotting分析呈阳性植株的抗蚜性与T0代相近,达85.3%,说明这两个基因的抗蚜功能可以稳定遗传。 展开更多
关键词 aca基因 GNA基因 转基因烟草 抗蚜性
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辽宁地区PPARγ2基因Pro12Ala多态性与2型糖尿病的相关性研究 被引量:6
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作者 王玉霞 吴志香 +1 位作者 高淑兰 宋玉萍 《陕西医学杂志》 CAS 2010年第7期788-790,793,共4页
目的:探讨PPARγ2外显子B的Pro12Ala多态性与辽宁地区2型糖尿病的的关系。方法:应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP),对358例2型糖尿病患者和326例的非糖尿病对照人群PPARγ2基因外显子的Pro12Ala多态性基因型进行对... 目的:探讨PPARγ2外显子B的Pro12Ala多态性与辽宁地区2型糖尿病的的关系。方法:应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP),对358例2型糖尿病患者和326例的非糖尿病对照人群PPARγ2基因外显子的Pro12Ala多态性基因型进行对照分析。结果:PPARγ2基因12Ala等位基因在对照组和2型糖尿病组的频率分别为5.21%,3.35%,两者间无有显著性差异。结论:PPARγ2基因外显子的pro12Ala多态性与2型糖尿病有无明显相关性。 展开更多
关键词 糖尿病 非胰岛素依赖型/免疫学 @过氧化物酶体增殖物激活受体γ2 @Pro12Ala基因 多肽现象(遗传学) 基因表达
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Identification and evolution-ary implication of four novel box H/ACA snoRNAs from Giardia lamblia
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作者 LUO Jun ZHOU Hui CHEN Chongjian LI Yan CHEN Yueqin QU Lianghu 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2006年第20期2451-2456,共6页
From a specialized cDNA library, four novel box H/ACA snoRNAs, named GLsR22, GLsR23, GLsR24 and GLsR25, were identified from the primitive eukaryote, Giardia lamblia. Bioinformat- ics analyses indicated that all of th... From a specialized cDNA library, four novel box H/ACA snoRNAs, named GLsR22, GLsR23, GLsR24 and GLsR25, were identified from the primitive eukaryote, Giardia lamblia. Bioinformat- ics analyses indicated that all of them can be poten- tially folded into double hairpins, the typical secon- dary structures of box H/ACA snoRNAs. GLsR24 and GLsR25 are predicted to guide the site-specific pseudouridylation at U1753 and U2396 on 23S rRNA, respectively, while GLsR22 and GLsR23 belong to the family of “orphan” snoRNAs. All of the four novel snoRNAs are encoded by single copy genes and located in small intergenic regions. Interestingly, compared with the counterparts previously reported in Archaea and other unicellular protozoan, the box H/ACA snoRNAs identified from G. lamblia have unique structural features, implying that snoRNAs evolved from prokaryotes to eukaryotes in different ways. 展开更多
关键词 贾第虫 兰氏鞭毛虫 基因工程 核糖核酸
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