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Isolation and Characterization of Cucumber ACC Oxidase Gene and Its Upstream 被引量:3
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作者 CHENYin-hua OUYANGBo +2 位作者 LIHan-xia ZHANGJun-hong YEZhi-biao 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2005年第1期1-6,共6页
Ethylene has been implicated as a sex-determining hormone in cucumber. Its exogenous application increases femaleness,and gynoecious genotypes were reported to produce more ethylene. 1-aminocyclopropane-1-carboxylate ... Ethylene has been implicated as a sex-determining hormone in cucumber. Its exogenous application increases femaleness,and gynoecious genotypes were reported to produce more ethylene. 1-aminocyclopropane-1-carboxylate (ACC) oxidase(ACO) is the key enzyme in ethylene biosynthesis. In this study, a 1200 base pair (bp) candidate fragment was amplifiedfrom the cucumber genome with degenerated primers derived from the ACO amino acid consensus sequence amongdifferent plant species. The coding region and its upstream (1 155 bp) were obtained by vector-mediated inverse PCR. Thenovel gene was analyzed by bioinformatics tools. Four exons and three introns were identified in the coding sequence.The spliced length of mRNA was 933 nucleotides (nts) and it encoded 311 amino acids. Phylogenic analysis result of thenew gene (CsACO4, GenBank accession number AY450356) was in accordance with the evolution relationship of geneticsamong various plant species. Northern blotting showed that the gene expressed among female flowers of gynoecious andmonoecious genotypes, it could not express in other organs. This implied that the gene might be correlated with the femalebehavior positively. Further work is on the way to demonstrate the complexity of the relationship between the endogenousethylene and the sex determination. 展开更多
关键词 CUCUMBER acc oxidase Gene cloning bioinformatics PROMOTER Gene expression
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桃果实ACC氧化酶基因的克隆及序列分析 被引量:11
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作者 徐培华 李唯 +2 位作者 杨德龙 王旺田 张亚林 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2010年第2期44-50,共7页
乙烯是调控果实成熟衰老的内源激素,有效地调控乙烯的生物合成便是控制果实成熟的关键,而ACC氧化酶是植物乙烯生物合成途径中的限速酶之一。本研究以成熟的白粉桃为材料提取果实总RNA,克隆ACC氧化酶基因,旨在利用反义技术抑制乙烯合成,... 乙烯是调控果实成熟衰老的内源激素,有效地调控乙烯的生物合成便是控制果实成熟的关键,而ACC氧化酶是植物乙烯生物合成途径中的限速酶之一。本研究以成熟的白粉桃为材料提取果实总RNA,克隆ACC氧化酶基因,旨在利用反义技术抑制乙烯合成,延迟桃果实成熟,提高硬度。将克隆片段与pMD18-T载体连接并转化到E.coliDH5α,经PCR、酶切和测序鉴定。分析表明该基因全长为1246bp,其中编码区长960bp,共编码319个氨基酸,与已登陆的ACC氧化酶基因(AF319166)核苷酸序列和氨基酸序列的同源性分别为99%和98%,表明成功的克隆了ACC氧化酶基因。经生物信息学分析,推测该蛋白的分子式为C1626H2542N420O485S12,相对分子质量为36.12kDa,等电点为5.27;该蛋白为亲水性非分泌型蛋白,无信号肽存在;其蛋白质二级结构以α-螺旋、β-折叠和无规卷曲为主,是一个紧凑型球状结构域。 展开更多
关键词 acc氧化酶 克隆 生物信息学分析
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梨ACC氧化酶基因(ACO)的片段克隆及其RNAi载体构建 被引量:10
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作者 胡钟东 乔玉山 +2 位作者 王三红 姚泉洪 章镇 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期877-879,共3页
以若光梨成熟果实为材料,提取总RNA,在ACC氧化酶基因(ACO)cDNA序列同源性较高区域设计一对特异引物,利用RT-PCR克隆了ACC氧化酶(ACO)基因片段。将ACO反义基因、与副球菌中类胡罗卜素合成有关的间隔基因YYT和ACO正义基因3个片段串联在一... 以若光梨成熟果实为材料,提取总RNA,在ACC氧化酶基因(ACO)cDNA序列同源性较高区域设计一对特异引物,利用RT-PCR克隆了ACC氧化酶(ACO)基因片段。将ACO反义基因、与副球菌中类胡罗卜素合成有关的间隔基因YYT和ACO正义基因3个片段串联在一起,经鉴定后,插入到植物表达载体中,构建成能够表达ACC氧化酶基因的双链RNA的植物载体pYF028,为耐贮砂梨的遗传转化创造条件。 展开更多
关键词 acc氧化酶(ACO) RT-pcr 克隆 RNAI载体构建
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龙眼胚性愈伤组织ACC氧化酶基因的克隆及其在龙眼体胚发生过程中的表达分析 被引量:22
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作者 李惠华 赖钟雄 +1 位作者 林玉玲 苏明华 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第18期3798-3808,共11页
【目的】分离克隆龙眼(Dimocarpus longan Lour.)胚性愈伤组织乙烯合成关键酶ACO(1-aminocyclopropane-1-carboxylate oxidase)基因,并分析该基因在龙眼体细胞胚胎(以下简称龙眼体胚)发生过程中的表达情况。【方法】采用RT-PCR结合RACE... 【目的】分离克隆龙眼(Dimocarpus longan Lour.)胚性愈伤组织乙烯合成关键酶ACO(1-aminocyclopropane-1-carboxylate oxidase)基因,并分析该基因在龙眼体细胞胚胎(以下简称龙眼体胚)发生过程中的表达情况。【方法】采用RT-PCR结合RACE法,获得龙眼胚性愈伤组织ACO基因的cDNA全长序列和DNA序列,运用生物信息学方法对序列进行分析,并通过实时荧光定量PCR(q-PCR)法研究该基因在龙眼体胚发生过程中的表达【。结果】克隆得到龙眼胚性愈伤组织ACO基因1315bp的cDNA全长序列(GenBank登录号为FJ534854),该cDNA的开放阅读框推定的氨基酸序列(含315个氨基酸)与其它植物ACO具有86%-47%同源性,包含了5'非编码区为86bp,3'非编码区为281bp,3'poly(A)尾长13bp;该基因的DNA序列(GenBank登录号为GU123929)长为1660bp,包含3个内含子,内含子的剪切位点均符合真核生物"GT-AG"规则;该基因在龙眼体胚各阶段均有表达,整个变化趋势呈字母"M"状。【结论】确定所获得的序列是龙眼胚性愈伤组织ACO基因的cDNA序列和DNA全长序列;该基因在不完全胚性紧实结构和心形胚的表达量为两个峰值。 展开更多
关键词 龙眼胚性愈伤组织 acc氧化酶 基因克隆 序列分析 实时荧光定量pcr
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丹参ACC氧化酶基因(SmACO1)的克隆与序列分析 被引量:3
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作者 周露 化文平 +1 位作者 王喆之 李翠芹 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期584-590,共7页
依据丹参转录组数据库序列信息,采用RT-PCR和染色体步移技术从丹参中首次克隆得到ACC氧化酶基因,命名为SmACO1(GenBank注册号为JQ026111)。该基因gDNA序列长1 347 bp,由3个外显子和2个内含子组成;cDNA全长1 117 bp,包含945 bp的开放阅读... 依据丹参转录组数据库序列信息,采用RT-PCR和染色体步移技术从丹参中首次克隆得到ACC氧化酶基因,命名为SmACO1(GenBank注册号为JQ026111)。该基因gDNA序列长1 347 bp,由3个外显子和2个内含子组成;cDNA全长1 117 bp,包含945 bp的开放阅读框,编码314个氨基酸残基。生物信息学分析显示SmACO1为无信号肽与跨膜结构域,且定位于细胞质的稳定亲水蛋白,含有Fe2+依赖的加氧酶结构域。实时荧光定量PCR结果表明,SmACO1基因在丹参不同组织器官中差异表达,花中表达量最高;其表达受到病原菌和茉莉酸甲酯的诱导,表明SmACO1基因可能在植物防御反应中发挥作用。 展开更多
关键词 丹参 acc氧化酶 基因克隆 生物信息学分析 表达模式
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辣椒ACC氧化酶基因部分序列的分离与鉴定(英文)
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作者 陈银华 张广平 +3 位作者 王海 蔡铭 袁平该 陈宪成 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2006年第1期2-7,共6页
乙烯作为一种植物激素,在植物生长发育过程中发挥着重要的作用。1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)氧化酶(ACO)是乙烯生物合成途径中的一种关键酶。本研究以辣椒为研究材料,根据报道的辣椒ACC氧化酶基因序列(AJ011109)设计引物,利用PCR的方法从... 乙烯作为一种植物激素,在植物生长发育过程中发挥着重要的作用。1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)氧化酶(ACO)是乙烯生物合成途径中的一种关键酶。本研究以辣椒为研究材料,根据报道的辣椒ACC氧化酶基因序列(AJ011109)设计引物,利用PCR的方法从中国种湘研4号基因组获得长度为354bp的gDNA序列和213bp的cDNA序列。利用生物信息学软件对所获得的gDNA和cDNA序列进行了分析。 展开更多
关键词 acc氧化酶 克隆 pcr 生物信息学 植物激素 辣椒
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百脉根ACC氧化酶基因LcACO1的克隆及序列分析 被引量:6
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作者 马兰 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期447-453,共7页
植物激素乙烯参与植物生长发育多个生理过程的调控。ACC氧化酶是植物乙烯合成途径中的关键合成酶。本研究依据其它物种ACC氧化酶序列信息设计简并引物,并结合RT-PCR和快速扩增c DNA末端技术从牧草百脉根中首次克隆到ACC氧化酶基因的全长... 植物激素乙烯参与植物生长发育多个生理过程的调控。ACC氧化酶是植物乙烯合成途径中的关键合成酶。本研究依据其它物种ACC氧化酶序列信息设计简并引物,并结合RT-PCR和快速扩增c DNA末端技术从牧草百脉根中首次克隆到ACC氧化酶基因的全长c DNA序列,命名为LcACO1。LcACO1全长c DNA为1 012 bp,具有一个924 bp ORF可编码307个氨基酸残基。生物信息学分析表明,LcACO1是含有Fe2+依赖的加氧酶结构域的稳定亲水蛋白,没有信号肽和跨膜结构域,亚细胞定位于细胞质。与其它植物中的ACO蛋白进行同源性比对显示,LcACO1蛋白与鹰嘴豆中ACO蛋白的一致性高达90%。实时荧光定量PCR表明,LcACO1基因在百脉根不同组织器官中差异表达,根中表达量最高,推测其主要在根的生长发育调节方面发挥作用。 展开更多
关键词 百脉根 acc氧化酶 基因克隆 生物信息学分析 表达模式
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