肾气丸对非酒精性脂肪性肝炎大鼠Bcl-2/Bax、Fas/FasL信号通路的影响

目的:观察Bcl-2/Bax、Fas/Fas L介导的信号转导通路在高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎大鼠的作用及肾气丸对其的影响。方法:采用高脂饲料连续喂养12周建立大鼠非酒精性脂肪性肝炎模型,同时以肾气丸进行干预12周。HE染色观察大鼠肝组织病理组织学变化,免疫组织化学检测肝组织中Fas、Fas L、Bcl-2、Bax、Caspase-8蛋白的表达;Realtime-PCR法检测肝组织Caspase-8 mRNA表达。结果:模型组大鼠肝组织Bcl-2、Bax、Fas、Fas L蛋白以及Caspase-8 mRNA和蛋白表达均较正常组显著增加(P<0.01),Bcl-2/Bax比值较正常组明显的降低(P<0.05);大鼠肝组织Caspase-8蛋白表达与Fas、Fas L蛋白表达均呈明显正相关(r分别为0.907、0.804,P均<0.01);予以肾气丸干预后,Bax、Fas、Fas L蛋白的表达以及Caspase-8 mRNA和蛋白的表达均较模型组明显的降低(P<0.05),Bcl-2/Bax比值较模型组明显的增加(P<0.05),Bcl-2蛋白的表达与模型组比较差异无显著性意义(P>0.05)。结论:肾气丸可能通过影响Bcl-2/Bax、Fas/Fas L信号转导通路,下调Bax、Fas、Fas L、Caspase-8表达,减少肝细胞的脂性凋亡,从而防治大鼠非酒精性脂肪性肝炎的发生发展。

IL-17调控PI3K/AKT/FAS/FASL信号通路抑制Hep-2细胞凋亡

目的研究白介素-17(IL-17)对Hep-2细胞凋亡的影响,阐明IL-17通过PI3K/AKT信号通路在抑制Fas/Fas L信号通路从而抑制Hep-2细胞凋亡的部分机制。方法以正常Hep-2细胞为对照组,50 ng/ml 200-17(IL-17刺激剂)为实验组,流式细胞仪检测200-17对Hep-2细胞凋亡率的影响。以Hep-2细胞为对照组,不同浓度200-17(1、50、100ng/ml)为实验组,Western blot法检测200-17作用6 h后各组Hep-2细胞中PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、Fas、Fas L蛋白的表达。结果 Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测结果显示,对照组和实验组凋亡率逐渐增高,与对照组比较,加50 ng/ml 200-17作用6、12、24 h后,Hep-2凋亡率均降低,200-17作用6 h后与对照组比,实验组Hep-2细胞凋亡率降低最明显。Western blot结果显示不同浓度(0、1、50、100 ng/ml)的200-17刺激Hep-2细胞后,随着200-17浓度的升高,Hep-2细胞中p-PI3K、p-AKT蛋白的表达逐渐增加,差异有统计学意义(P <0. 01); PI3K、AKT蛋白表达差异无统计学意义。与对照组比较,1、50、100 ng/ml组200-17刺激6 h后Hep-2细胞内Fas、Fas L蛋白表达降低,差异有统计学意义(P <0. 01)。结论 IL-17可能通过PI3K/AKT/Fas/Fas L信号通路抑制Hep-2细胞凋亡。

Fas信号通路通过诱导EMT促进胃癌细胞的侵袭转移

目的探讨Fas信号通路促进胃癌细胞侵袭转移的可能相关机制。方法以低浓度FasL处理胃癌细胞株AGS,免疫印迹及ELISA检测上皮间质转化(epithelial-mesenehymal transition,EMT)的分子生物学标记改变;稳定沉默Snail及Twist转录因子,transwell小室侵袭实验检测FasL处理后胃癌细胞的侵袭能力;免疫印迹检测信号通路激活状态及相应的抑制效应。结果 FasL可以诱导AGS细胞株出现EMT表型,并可促进胃癌细胞的侵袭转移能力。同时该过程中出现ERK1/2信号通路的激活,而抑制ERK1/2信号通路,可以抑制FasL诱导EMT及提高肿瘤侵袭能力的作用。胃癌组织中相应分子生物学标记的表达变化符合EMT的发生。结论 Fas信号通路能够激活ERK1/2通路诱导EMT的发生,并且能通过该机制增强胃癌细胞AGS的活动能力。

A2M介导Fas信号传导途径提高卵巢癌对铂类化疗的敏感性研究

目的探讨A2M基因的表达与卵巢癌患者耐药及预后的关系及其对Fas信号传导通路的影响。方法利用癌症基因图集(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中铂类敏感和耐药的卵巢癌患者的基因表达谱,分析A2M基因在铂类敏感和耐药患者中的表达差异。利用已构建的带有绿色荧光标记的卵巢癌SKOV3敏感细胞(SKOV3-GFP)和顺铂耐药细胞(SKOV3-GFP/DDPⅡ)进行裸鼠皮下种植,成瘤后分次予以顺铂体内干预,以实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,q RT-PCR)技术检测不同次数顺铂干预后的肿瘤组织中A2M m RNA与Fas信号传导通路上重要节点基因的表达水平。用双变量线性回归分析A2M m RNA与所检测基因的表达量的相关性。结果相对于铂类敏感病例,A2M m RNA在铂类耐药患者中的表达下降(P<0.05),A2M m RNA的表达与耐药相关(P=0.02),与卵巢癌患者总生存期、化疗间隔生存期和无疾病进展生存期高度相关(P均<0.001),其表达量越高,患者生存期越长。A2M m RNA以及细胞凋亡相关的Fas信号传导通路上重要节点基因Fas、FADD、caspase10、caspase9和caspase3随顺铂注射次数的增加,在耐药的移植瘤组织中相对低表达(P<0.001);而其下游与DNA修复相关的基因PARP1随顺铂注射次数的增加,在耐药的移植瘤组织中相对高表达(P<0.05)。A2M m RNA的表达与Fas信号传导通路上节点基因的表达存在线性相关(P<0.05)。结论 A2M可能是卵巢癌顺铂耐药的潜在信号分子,它可能维持肿瘤细胞对铂类药物的敏感性。其在耐药细胞中的低表达可能通过某种机制抑制下游的Fas信号传导通路,使其传导失调,最终引起PARP1的表达上调,促进DNA修复,抑制细胞凋亡,诱发卵巢癌细胞对顺铂的耐药。

特发性肺纤维化发生发展过程中miR-29的作用及上下游信号通路研究进展

小分子RNA(miRNA)是一类由18~25个核苷酸构成的功能性非编码RNA,主要参与转录后基因水平的调控。miR-29是一类与纤维化密切相关的miRNA。动物实验证实,抑制特发性肺纤维化动物肺组织miR-29表达可以促进特发性肺纤维化的发生。特发性纤维化患者肺组织中miR-29各亚型表达均下降。miR-29通过对转化生长因子β(TGF-β)/Smad3、蛋白磷酸酶2A(PP2A)/组蛋白脱乙酰酶C4(HDAC4)、Wnt/β-catenin、PI3K-AKT、Fas死亡受体途径等多条信号通路的调节,进而抑制细胞外基质合成和分泌,参与特发性肺纤维化发生发展过程。

ACC的Wnt信号通路参与神经病理性疼痛以及痛情绪的机制

Wnt信号通路通过激活下游靶基因的转录,参与多种疾病的病理生理变化。NR2B表达升高等神经可塑性的改变是神经病理性疼痛发生痛敏的机制之一。ACC是参与痛感觉辨别和情绪反应的关键中枢核团。为了探究ACC的Wnt信号通路参与神经病理性疼痛以及痛情绪的机制。

基于AMPK信号通路探讨中医药治疗非酒精性脂肪性肝病合并2型糖尿病研究进展

腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)是影响全身代谢和生理功能的多种代谢途径的主要调节者,其活化已被提出用于治疗多种代谢性疾病,如肥胖症、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)、2型糖尿病(T2DM)。AMPK是一种高度保守的代谢调节因子,参与糖脂相关的代谢过程,近年来被认为是代谢性疾病的一个关键研究靶点。多项研究显示,中药单体、中药复方可以通过激活AMPK信号通路改善胰岛素抵抗(IR)和炎症反应,激活自噬,调节糖脂代谢,从而延缓NAFLD合并T2DM的发生和发展。采用文献检索和综合分析的方法,总结中医药通过激活AMPK信号通路参与NAFLD合并T2DM治疗的作用机制,为今后中医药治疗NAFLD合并T2DM提供思路。

洋甘菊总黄酮通过抑制ACC/FAS/DGAT2通路减少ApoE^(-/-)小鼠三酰甘油合成

目的:探究洋甘菊总黄酮通过调节ACC/FAS/DGAT2通路减少ApoE^(-/-)小鼠三酰甘油合成的药理作用机制。方法:用乙醇回流提取和大孔树脂分离纯化法获得洋甘菊总黄酮;高脂饲料喂养法建立ApoE^(-/-)小鼠高脂模型;以C57BL/6J小鼠为空白对照组,ApoE^(-/-)小鼠分成模型组,非诺贝特组(30 mg·kg^(-1)),洋甘菊总黄酮低、中、高剂量组(88,176,352 mg·kg^(-1));空白对照组和模型组分别用基础饲料和高脂饲料喂养,其余组小鼠高脂饲料喂养的同时灌胃给药干预8周。检测小鼠血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平;HE染色和油红O染色观察小鼠肝脏脂肪变性情况;免疫组化法检测二酰基甘油酰基转移酶2(DGAT2)蛋白表达水平;Western Blot法检测肝组织乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、脂肪酸合成酶(FAS)、DGAT2蛋白表达水平。结果:与空白对照组相比,模型组小鼠TG、TC、LDL-C、ACC、FAS、DGAT2水平均明显升高,HDL-C水平明显降低;与模型组相比,非诺贝特组和洋甘菊总黄酮各剂量组脂肪变性情况明显减轻。与模型组相比,非诺贝特组、洋甘菊总黄酮各剂量组TG、TC、LDL-C、ACC、FAS水平均明显降低,HDL-C水平明显升高;非诺贝特组和洋甘菊总黄酮中、高剂量组DGAT2水平明显降低。结论:洋甘菊总黄酮可以抑制ApoE^(-/-)小鼠三酰甘油合成,改善血脂水平,可能与其下调ACC/FAS/DGAT2通路表达有关。

Wnt/β-catenin信号通路对日光性角化病相关基因蛋白表达的影响

目的 观察日光性角化病(AK)患者中Wnt/β-catenin信号通路的相关基因蛋白的表达情况,分析其在AK发病机制的作用。方法 回顾性分析资阳市第一人民医院2010年3月至2017年5月收治的45例AK确诊患者(AK组)、45例鳞癌患者(鳞癌组)以及50例健康人(正常组)的临床资料。然后对患者的石蜡组织标本进行组织学病理检查,分析AK组患者的病理学特点;通过免疫组织化学法检测组织细胞中的β-catenin以及降解基底膜的基质金属蛋白酶(MMP-2)的表达情况;运用RT-PCR的方法,检测与凋亡相关的Fas、Fas L以及细胞周期调节蛋白P-53相关基因的表达情况。结果 组织病理结果显示,AK患者组织真皮的浅层发生有嗜碱性病变,组织表皮的下层细胞排列紊乱。免疫组化结果显示,AK组、鳞癌组以及正常组MMP-2阳性分别为41例、35例、8例,β-catenin阳性分别为27例、12例、1例,Livin阳性分别为28例、15例、3例,Caspase-3阳性分别为25例、16例、2例;MMP-2、Livin、Caspase-3和β-catenin阳性率情况:AK组>鳞癌组>正常组,差异具有统计学意义(P <0. 05)。PCR结果显示,鳞癌组患者的Fas、Fas L以及P-53表达水平分别是AK组患者的0. 24、2. 92以及3. 47倍,且两组患者目的基因的△CT差异显著,具有统计学意义(P <0. 05)。结论 Wnt/β-catenin信号通路影响细胞中基质金属蛋白酶MMP-2、细胞凋亡相关基因(Fas、Fas L)和P53的表达,在AK的发病机制中起着重要的作用。

苦酸通调方对HepG2细胞胰岛素抵抗模型中脂代谢及AMPK、ACC、SREBP-1蛋白的影响

目的观察苦酸通调方对胰岛素抵抗HepG2细胞内AMP活化蛋白激酶(AMPK)/乙酰辅酶A羟化酶(ACC)/固醇调节元件结合蛋白(SREBP)-1信号分子的影响。方法通过0.25 mmol/L棕榈酸联合30 mmol/L高糖孵育24 h诱导HepG2胰岛素抵抗细胞模型。噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞存活率确定给药浓度。荧光标记2-脱氧葡萄糖(2-NBDG)法检测细胞葡萄糖摄取能力,油红O染色观察细胞内脂质累积情况,三酰甘油试剂盒检测细胞内三酰甘油含量,Western印迹法检测细胞内AMPK、ACC、SREBP-1的蛋白表达水平。结果与模型组相比,苦酸通调方干预后,呈剂量依赖性增加胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖摄取量,减少细胞内三酰甘油含量(P<0.05),上调AMPK、ACC蛋白磷酸活化水平,减少SREBP-1蛋白表达(P<0.05)。结论苦酸通调方可能通过调控AMPK/ACC/SREBP-1信号转导过程,增强肝细胞葡萄糖摄取能力,减少细胞内三酰甘油蓄积,从而改善HepG2细胞的胰岛素抵抗状态。