姜黄素介导的骨髓间充质干细胞外泌体对ACC-M细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨姜黄素介导的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)外泌体对ACC-M细胞增殖和转移的影响及其作用机制。方法:将7.5μmmol/L的姜黄素与人BMSCs共培养72 h后,分离外泌体并进行鉴定,将外泌体与ACC-M细胞进行共培养,并将ACC-M细胞分为control组(正常培养)、BMSC-Exo组(未经姜黄素处理的BMSCs外泌体与ACC-M细胞共培养)、Cur-BMSC-Exo组(经姜黄素处理的BMSCs外泌体与ACC-M细胞共培养)及Cur组(经7.5μmmol/L的姜黄素处理细胞);培养48 h后使用蛋白质印迹法(Western blotting)实验检测外泌体肿瘤易感基因101(tumor susceptibility gene 101,TSG-101)、CD63、CD9和重组人钙连蛋白(calnexin,CANX)及ACC-M细胞上皮钙黏素(E-cadherin)、神经钙黏素(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)的蛋白表达情况;使用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK8)实验检测ACC-M细胞存活率;使用transwell实验检测ACC-M细胞迁移和侵袭情况;使用实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测ACC-M细胞TGF-β1和ERK mRNA相对表达量。结果:与control组和BMSC-Exo组比较,Cur-BMSC-Exo组和Cur组的细胞活力、细胞迁移和侵袭数量及N-cadherin、vimentin、TGF-β1和ERK表达水平均显著降低(P<0.05),而E-cadherin蛋白水平显著增加(P<0.05);与Cur-BMSC-Exo组比较,Cur组细胞活力、细胞迁移和侵袭数量及N-cadherin、vimentin、TGF-β1和ERK表达水平均显著增加(P<0.05),而E-cadherin蛋白水平显著降低(P<0.05)。结论:BMSCs分泌的外泌体可作为姜黄素的载体,抑制ACC-M细胞的增殖和转移并调控TGF-β1/ERK信号通路。

nm23-H1基因对口腔癌Acc-M细胞株的转移能力及化疗敏感性影响的体外研究

目的 通过 nm2 3- H1的转化及导入 Acc- M细胞株 ,建立稳定、高效、低毒的转染方法 ,观察 nm2 3- H1对 Acc- M细胞株侵袭转移能力及化疗敏感性的影响。方法 采用基因转化技术 ,制备高纯度的 nm2 3- H1真核表达质粒。用阳离子脂质体介导的转染技术 ,将 nm2 3- H1基因转染到口腔腺样囊性癌 Acc- M细胞株。用免疫组化技术检测转染前后的 nm2 3- H1的表达。并用 transwell小室和冲刷实验 ,观察转染前后细胞的侵袭、粘附、趋化运动能力的变化。采用 MTT法观察 nm 2 3- H1对 Acc- M化疗敏感性影响。结果 1使用重组的 p CMV - Neo- Bam的真核表达载体 ,将 nm 2 3- H 1转染口腔癌细胞 ,并获得稳定表达。 2 Acc- M细胞株 nm2 3- H 1基因的转染前后表达水平有明显差异。 3转染后的 Acc- M细胞侵袭、粘附、趋化运动能力均显著降低。 4转染前后使用 C- DDP的 L D50 分别为2 .6 4± 0 .4 7,1.85± 0 .4 1(P<0 .0 1)。结论 nm2 3- H1对 Acc- M细胞的侵袭转移能力具有显著抑制作用 。

阿斯匹林抗ACC-M裸鼠肺转移的实验研究

目的 应用ACC-M裸鼠肺转移模型研究阿斯匹林对腺样囊性癌细胞转移的抑制作用。方法 裸鼠尾静脉注射肿瘤细胞前后各7天连续服用分别含1mg％、10mg％和50mg％阿斯匹林饮用水或消毒饮用水14天,接种肿瘤后6周处死动物,比较各实验组与对照组的裸鼠肺重量和肺转移灶面积比。结果 服用含1mg％和 50mg％阿斯匹林饮用水的实验组与对照组相比较,两项指标的差别均有显著性（P<0.05）。结论 阿斯匹林对腺样囊性癌细胞ACC-M裸鼠肺转移有抑制作用。

Tip30基因修饰的ACC-M细胞裸鼠体内致瘤性观察

目的:观察肿瘤抑制基因Tip30修饰后的人涎腺腺样囊性癌高转移细胞(ACC鄄M)所致裸鼠移植瘤体内生长的变化。方法:BALB/Cnu/nu鼠30只(4周龄,体重18￣20g),随机分3组,各10只;Tip30基因修饰的ACC鄄M细胞(AdTIP30/ACC鄄M)、野生型ACC鄄M细胞(wt/ACC鄄M)及对照基因LacZ修饰的ACC鄄M细胞(AdLacZ/ACC鄄M)分别注射小鼠颌下区皮下,观察肿瘤生长情况及小鼠存活时间。结果:(1)经TIP30基因修饰组肿瘤出现的时间比野生型对照组及基因对照组晚3d,且肿瘤生长缓慢(P<0.01);(2)存活时间显示,基因修饰组(53.0±3.3)d,有2只长期存活;野生型对照组(26±2.2)d;对照基因组(29±2.4)d。结论:抑癌基因Tip30能够显著抑制人涎腺腺样囊性癌细胞在裸鼠体内的生长,延长荷瘤小鼠存活期。

减毒沙门菌体内介导基因转移对ACC-M抑制的实验研究

目的:观察构建含有Tip30与人IFN-γ基因的真核表达及共表达质粒的重组减毒伤寒沙门菌对腺样囊性癌肺转移抑制作用。方法:4周龄BALB/Cnunu雄鼠25只,随机分成5组,每组5只,其中对照组5只(PBS)、单纯减毒沙门菌组5只(SL7207)、携带人IFN-γ基因减毒沙门菌治疗组5只(SL7207/pCI-IFN)、携带Tip30基因减毒沙门菌治疗组5只(SL7207/pCI-Tip30)、携带Tip30与人IFN-γ基因的真核共表达质粒的重组减毒沙门菌治疗组5只(SL7207/pCI-Tip30/IFN),均于尾静脉接种高转移腺样囊性癌(ACC-M)细胞。10d后对照组裸鼠口服PBS,其余各治疗组口服相应的减毒沙门菌,隔周1次,共3次。检测:裸鼠肺转移肿瘤细胞内IFN-γ、Tip30的表达、肿瘤生长体积、瘤体重量、带瘤存活期。结果:在治疗组裸鼠肺转移肿瘤细胞胞浆内有对应表达IFN-γ、Tip30;各治疗组均较对照组肿瘤生长慢,肿瘤体积小,重量轻,抑瘤率高,带瘤存活期长;携带基因治疗组较SL7207治疗组肿瘤生长慢,肿瘤体积小,重量轻,抑瘤率高,带瘤存活期长;联合基因治疗组较单基因治疗组肿瘤生长慢,肿瘤体积小,重量轻,抑瘤率高,带瘤存活期长。结论:减毒伤寒沙门菌不仅能作为载体介导基因对腺样囊性癌肺转移有抑制作用,而且自身对腺样囊性癌肺转移也有抑制作用。联合基因较单基因抑制效果好,有协同作用。

埃克替尼对ACC-M细胞凋亡及Bcl-2,Bax蛋白表达的影响

按照0(对照组)、10、20、40μmol·L-1浓度配制盐酸埃克替尼溶液,分别作用于人涎腺腺样囊性癌细胞株(ACC-M)24、48、72h,用流式细胞仪测药物作用后ACC-M细胞凋亡率;同时利用免疫细胞化学方法和间接免疫荧光联合流式细胞技术,检测它在体外对ACC-M细胞Bcl-2、Bax蛋白表达的影响.结果显示,细胞凋亡率随盐酸埃克替尼浓度与作用时间的增加而增加,经统计学分析,细胞凋亡率与盐酸埃克替尼浓度、作用时间成正相关,药物作用于ACC-M细胞后Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达增加.实验表明,盐酸埃克替尼可能通过降低Bcl-2蛋白的表达,增加Bax蛋白的表达,诱导ACC-M细胞凋亡.

埃克替尼对ACC-M细胞凋亡的影响

目的:研究埃克替尼对涎腺腺样囊性癌细胞系ACC-M细胞凋亡的影响及可能机制。方法:ACC-M细胞分为6组,即对照组,低、中、高剂量(10、20、40μmol/L)埃克替尼组,MnTMPyP组以及MnTMPyP+埃克替尼组。采用MTT法检测各组细胞的活性,Caspase-3活力检测试剂盒检测Caspase-3蛋白的活力,DCFH-DA荧光探针检测ROS水平,Western blot检测线粒体和胞质MnSOD蛋白的表达。结果:与对照组相比,埃克替尼低、中、高剂量组细胞活性降低,Caspase-3蛋白活力增强,ROS水平升高,线粒体中MnSOD蛋白表达减少,胞质中MnSOD蛋白表达增加(P均<0.05);MnTMPyP能拮抗上述变化(P均<0.05)。结论:埃克替尼可能通过ROS介导的MnSOD线粒体转位诱导ACC-M细胞凋亡。

腹膜腔注射肝素对ACC-M细胞在裸鼠肺、肝组织分布的影响

目的 通过观察腹膜腔注射肝素对ACC_M细胞在裸鼠肺、肝组织的分布特点 ,研究其对腺样囊性癌肺高转移细胞肺粘附的抑制作用。方法 实验裸鼠腹腔注射肝素后 ,经尾静脉注入氚标胸腺嘧啶核苷 (3 HTdR)标记ACC_M细胞 ,分别检测注射后 2h、6h、18h肺、肝组织单位重量的每分钟同位素脉冲数 (CPM)。结果 裸鼠单位重量肺组织3 H_ACC_M在不同时间由高到低依次是空白对照组 2h、6h、18h ,肝素组 6h、2h、18h。相同时段肝素组明显低于对照组 ,两组间有显著性差异 (P <0 0 0 1)。单位重量肝组织3 H_ACC_M在不同时间由高到低依次是空白对照组为 2h、6h、18h ,肝素组为 2h、6h、18h ,相同时段两组间无显著性差异 (P >0 0 5 )。结论 肝素腹腔注射后可减少肺组织内ACC_M细胞数量 ,但对相同时段肝组织内ACC_M细胞数量无显著影响 ,肝素可能在抑制腺样囊性癌肺转移中发挥作用。

盐酸埃克替尼对ACC-M细胞MMP-2、E-cadherin蛋白表达的影响

盐酸埃克替尼是一种表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂,利用免疫细胞化学方法和间接免疫荧光联合流式细胞技术,检测它在体外对人涎腺腺样囊性癌细胞株(ACC-M)MMP-2、E-cadherin蛋白表达的影响.结果表明:盐酸埃克替尼可降低MMP-2蛋白表达,增加E-cadherin蛋白表达,可抑制人涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞的浸润、转移.

苹果多酚诱导ACC-M细胞凋亡及caspase-3表达的实验研究

目的:探讨苹果多酚体外诱导人腺样囊性癌ACC-M细胞凋亡的作用机制。方法:MTT法、流式细胞术观察不同浓度苹果多酚对ACC-M细胞凋亡的影响;RT-PCR和Western印迹检测苹果多酚作用下ACC-M细胞caspase-3 mRNA和蛋白表达的变化。应用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:随着苹果多酚浓度的增加,ACC-M细胞凋亡增多(Ρ<0.05),ACC-M细胞中caspase-3 mRNA和蛋白表达量增加(Ρ<0.05),差异有统计学意义。结论:苹果多酚可体外诱导ACC-M细胞凋亡,激活caspase-3基因mRNA及蛋白的表达可能是其作用机制之一。

nm23-h1基因转染对腺样囊性癌ACC-M细胞系淋巴结转移的影响

目的 :研究阳离子脂质体介导nm2 3-h1质粒转染腺样囊性癌ACC -M细胞株对其颌面部移植瘤区域淋巴结转移的影响。材料与方法 :体外用阳离子脂质体 (Lipofectamine)介导将nm2 3-h1质粒转染nm2 3-低表达的腺样囊性癌ACC -M高转移细胞株 ,经G4 18筛选得到高表达nm2 3-h1的细胞并以 5× 10 5/只植入 10只裸鼠颌下区 ,以未转染的细胞作对照。观察肿瘤生长及淋巴结转移情况。 4周后处死动物 ,获取标本 ,作组织病理学检查。结果 :未转染组有一只裸鼠颌下淋巴结转移 (1/ 10 ) ,4只 (4/ 10 )裸鼠淋巴结反应性增生 ,转染组未见淋巴结转移及明显增生。结论 :nm2 3-h1可能在腺样囊性癌的区域淋巴结转移中起重要的作用。

端粒酶反义寡核苷酸对体外培养ACC-M细胞的影响

目的 研究端粒酶反义寡核苷酸 (AS ODN)对体外培养人涎腺高肺转移性腺样囊性癌 (ACC M)细胞的影响。方法 采用细胞形态学观察及PCR TRAP端粒酶活性检测法来观察其形态学和端粒酶活性的变化。结果 反义寡核苷酸在转染ACC M细胞后 72小时内 ,其形态学改变不明显 ,其端粒酶活性明显受到抑制 (P <0 .0 1)。结论 AS ODN可显著抑制ACC M的端粒酶活性 ,提示AS ODN可抑制ACC M细胞的生长 ,抑制效果可能与AS ODN的剂量、转染效率等因素有关。

去甲氧基姜黄素对涎腺腺样囊性癌细胞株ACC-M增殖和凋亡的影响

目的进一步探讨去甲氧基姜黄素(DMC)对涎腺腺样囊性癌的治疗作用。方法取对数生长期涎腺腺样囊性癌细胞株ACC-M随机分为对照组和观察组,观察组分别加入终浓度为5、25、50、100、200μmol/L的去甲氧基姜黄素20μl,对照组加入相同体积二甲基亚砜(DMSO)。分别于培养24、48、72 h后在倒置显微镜下观察细胞形态,应用MTT比色法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果对照组细胞生长迅速,观察组随去甲氧基姜黄素作用时间和浓度增加细胞收缩、变小、破碎,部分脱落漂浮于培养液;观察组去甲氧基姜黄素浓度>50μmoL/L时细胞生长抑制率及凋亡率均显著高于对照组,且与去甲氧基姜黄素浓度和作用时间均呈正相关(P<0.05)。结论去甲氧基姜黄素可通过抑制细胞增殖并诱导其凋亡发挥抗肿瘤作用,且该作用具有浓度和时间依赖性。

茶多酚对ACC-M细胞株Fas、Fasl表达的影响

目的体外观察茶多酚对肺高转移性腺样囊性癌细胞株(ACC-M)生长、Fas及其配体Fasl表达的影响。方法(1)采用MTT比色实验法观察茶多酚对ACC-M细胞增殖的影响;(2)用免疫组化(SP法)检测不同浓度茶多酚对ACC-M细胞中Fas及其配体Fasl表达的影响。结果(1)茶多酚对ACC-M细胞增殖抑制作用明显,差异有统计学意义(P<0.05);(2)细胞免疫组化结果显示,加入不同浓度茶多酚后,Fas蛋白在ACC-M细胞中表达增高,差异有统计学意义(P<0.05),Fasl表达降低,差异有统计学意义(P<0.05),且随浓度增加更为明显。结论茶多酚可影响ACC-M细胞中Fas、Fasl表达,茶多酚具有抑制ACC-M细胞生长的作用可能与此有关。

TIP30蛋白在ACC-M细胞中的表达鉴定及作用

目的 :筛选含有TIP3 0的涎腺腺样囊性癌高转移细胞 ,检测TIP3 0蛋白在涎腺腺样囊性癌高转移细胞中的表达 ,检测携带外源性TIP3 0细胞的细胞周期分布变化。方法 :应用脂质体转染方法将TIP3 0导入ACC M细胞中 ,G418筛选阳性克隆 ,用免疫印记杂交法 (Westernblot)检测转染细胞中TIP3 0蛋白的表达 ;流式细胞仪测定细胞周期分布。结果 :筛选 14d后 ,含有TIP3 0的ACC M克隆形成 ,TIP3 0蛋白在ACC M中表达稳定 ;携带外源性TIP3 0的细胞G0 G1期比例增高 ,G2 M、S期细胞比例降低。结论 :ACC M细胞能稳定表达外源基因TIP3 0 ,携带外源性TIP3 0的细胞G0 G1期细胞比例增高 ,G2 M、S期细胞比例降低 ,从而影响ACC M细胞的生长 ,是TIP3 0抑制涎腺腺样囊性癌细胞生长的可能机制之一。

HBXIP对腺样囊性癌细胞株ACC-M生物学功能及PI3K/Akt信号通路的影响

目的:研究乙肝病毒X蛋白结合蛋白(hepatitis B X-interacting protein,HBXIP)对唾液腺腺样囊性癌肺高转移细胞株(ACC-M)增殖、迁移和侵袭的影响,及其对PI3K/Akt信号通路的影响。方法:将HBXIP质粒转染到ACC-M中,将细胞分为实验组(转染pEGFP-N1-HBXIP质粒)、对照组1(未转染组)和对照组2(vector组,pEGFP-N1)。采用RT-PCR检测HBXIP在ACC-M中的表达;采用MTT实验、Transwell小室实验和划痕实验检测HBXIP过表达对ACC-M的增殖、迁移和侵袭的影响;Western印迹法检测HBXIP过表达对Akt、p-Akt、PI3K、p-PI3K及S100A4蛋白表达量的影响。采用SPSS18.0软件包对数据进行统计学分析。结果:MTT实验结果显示,实验组中存活的细胞数显著高于对照组(P<0.05);划痕实验结果显示,实验组细胞迁移率显著高于对照组(P<0.01);Transwell小室实验结果显示,实验组细胞侵袭个数显著高于对照组(P<0.01);Western印迹法结果显示,相对于对照组,实验组随着HBXIP过表达,p-Akt、p-PI3K及S100A4表达量相对增高。结论:HBXIP基因过表达ACC-M增殖、迁移和侵袭具有影响,可能通过促进Akt、PI3K磷酸化及S100A4蛋白表达量增加,促进ACC-M的增殖、迁移和侵袭。

茶多酚对ACC-M细胞Fas/FasL、PCNA表达的影响

目的体外观察不同浓度茶多酚对腺样囊性癌肺高转移细胞株(ACC-M)生长、Fas/FasL和增殖细胞核抗原(PC-NA)表达的影响。方法 (1)不同浓度茶多酚(0.05、0.1、0.15、0.2 g/L)组处理对数期生长ACC-M细胞;(2)用MTT法观察不同浓度茶多酚对ACC-M细胞生长的影响;(3)用免疫细胞化学法检测不同浓度茶多酚对ACC-M细胞中Fas/FasL和PCNA表达的影响。结果 (1)茶多酚对ACC-M细胞生长抑制作用明显(P<0.05);(2)细胞免疫组化结果显示:与未加茶多酚相比,加入茶多酚后,在ACC-M细胞中Fas蛋白表达增高(P<0.05)、FasL和PCNA蛋白表达降低(P<0.05),且随着浓度的增加更为明显。结论茶多酚可抑制ACC-M细胞生长,这种抑制作用可能与茶多酚促进ACC-M细胞中Fas表达和抑制FasL、PCNA表达有关。

全反式维甲酸对涎腺腺样囊性癌细胞株Acc-M体外抗增殖作用的研究

目的维甲酸类化合物能预防头颈部癌前病变转变为癌，并能有效地降低头颈部第二原发癌的发生率。近来研究证实，维甲酸对头颈部鳞癌有诱导分化治疗作用，但维甲酸对头颈部腺癌诱导分化作用研究少见报道。方法本研究采用克隆形成法、ＭＴＴ检测法以及细胞周期测定技术，把全反式维甲酸（ａｌｔｒａｎｓｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄＡ－ＴＲＡ）对人涎腺腺样囊性癌细胞株（ＡｃｃＭ）的体外抗增殖作用和细胞增殖周期进行了观察。结果显示，ＡＴＲＡ对ＡｃｃＭ细胞有一定抗增殖作用，且该作用与浓度、时间呈依赖关系；ＡｃｃＭ细胞经ＡＴＲＡ作用７２小时后其Ｓ期比例明显下降，同时Ｇ０＋Ｇ１期比例上升。结论研究表明，５～２０μｍｏｌ／Ｌ浓度的ＡＴＲＡ对ＡｃｃＭ细胞产生抗增殖作用。

平阳霉素、羟基喜树碱联合应用对Acc-M细胞活性的影响

目的 观察体外应用羟基喜树碱(HCPT)、平阳霉素(PYM)两种药物单用和联合应用对人腺样囊性癌Acc-M细胞的生长抑制作用。方法 采用MTT法研究用药前后细胞增殖活性的影响。结果 两种药单用及合用对细胞均有很好的抑制作用,且以HCPT和PYM合用最强。HCPT和PYM单用和合用可使细胞的群体倍增时间显著延长,以联合用药为佳。结论 HCPT、PYM单独及联合用药均对Acc-M细胞在体外有很好的抑制作用且以联合应用效果更佳。

As_2O_3对ACC-M细胞增殖及VEGF和bFGF表达的影响

目的:研究三氧化二砷(As2O3)对人类腺样囊性癌ACC-M细胞体外增殖及表达VEGF和bFGF的影响。探讨As2O3对ACC-M细胞表达VEGF和bFGF的影响。方法:倒置相差显微镜下观察ACC-M细胞生长情况,采用MTT法检测不同浓度As2O3作用不同时间对ACC-M的抑制效应;以RT-PCR、Western blot方法检测As2O3作用后ACC-M细胞的两种血管生成相关因子VEGF和bFGF表达的变化。结果:As2O3抑制ACC-M细胞呈时间-剂量依赖关系。RT-PCR检测显示,As2O3作用后ACC-M细胞VEGF和bFGF基因表达无明显变化。Western blot检测显示,As2O3明显抑制ACC-M细胞VEGF和bFGF蛋白表达,呈时间-剂量依赖关系。结论:As2O3在体外明显抑制ACC-M细胞;As2O3明显抑制ACC-M细胞VEGF和bFGF基因的蛋白产物,其作用机制可能为抗腺样囊性癌的血管形成。