电针人中穴对脑梗死大鼠ACE-AngⅡ/ACE2-Ang(1-7)轴相关因子表达的干预效应研究

[目的]观察脑梗死大鼠血管紧张素转化酶(ACE)-血管紧张素(Ang)Ⅱ/ACE2-Ang(1-7)轴通路的变化规律以及电针干预效应,从血管舒缩的角度探讨针刺治疗脑梗死的作用机制。[方法]将126只大鼠随机分为空白组、模型组、电针组。模型组和电针组按术后1、3、6、9、12、18、24 h,3、7、12 d各分为10个时相组,造模后电针组每日针刺人中穴。各组大鼠进行神经功能缺损,脑梗死面积以及免疫组化的检测。[结果]1)针刺后各组大脑中动脉闭塞(MCAO)模型大鼠神经功能缺损评分(NSS)随缺血时间延长逐渐下降,各时相评分均显著高于空白组(P<0.01);电针组各时相评分低于模型组,两组在3、7、12 d差异有统计学意义(P<0.01)。2)绿化三苯四氮唑(TTC)染色结果模型组与空白组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),各时相电针组明显小于同时相模型组(P<0.05,P<0.01)。3)免疫组化结果:模型组ACE表达在术后上调至18 h回落,1 h~7 d显著高于空白组(P<0.01);电针组除6 h外表达均低于模型组,9、18、24 h有统计学差异(P<0.05,P<0.01)。模型组AngII表达在术后上调至24 h回落,在3~9 h和18 h~7 d高于空白组(P<0.05,P<0.01);电针组1 h~3 d均低于模型组,3、6、18 h~3 d差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。模型组血管紧张素受体AT1表达在术后9 h上调至24 h回落,其中3 h、9 h~24 h有统计学差异(P<0.05,P<0.01);电针组自9 h后均低于模型组,12、18、24 h差异有统计学意义(P<0.05)。电针组ACE2表达在术后3 h上调至18 h后下调,1 h到12 d高于空白组,1、9到3 d有统计学差异(P<0.05);电针组24 h~3 d时相与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。模型组Ang(1-7)表达自9 h上调至12 h后下调,除1、6 h时相外,均显著高于空白组(P<0.05,P<0.01)。电针组从3 h开始上调至24 h后下调,24 h到7 d高于模型组差异有统计学意义(P<0.01)。模型组血管内皮细胞表达的Ang(1-7)的特异性受体(MAS)表达自12 h上调至3 d后下调,3、6、12 h~12 d时相均高于空白组,12 h~7 d差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);电针组自9 h后表达高于模型组,其中3、24 h,3、7 d差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]电针干预能显著改善MCAO大鼠的神经功能症状,减少脑缺血体积,改善脑血流量,下调ACE、AngII、ATl的表达情况,上调Ang(1-7)、ACE2、MAS的表达情况,改善脑梗死的预后。

复方芪麻胶囊对SHR大鼠RAS系统ACE-AngⅡ-AT1轴与ACE2-Ang(1-7)-Mas轴动态平衡的调控作用研究

目的探索复方芪麻胶囊对自发性高血压大鼠(SHR)肾素-血管紧张素系统(RAS)的动态平衡调节作用.方法将大鼠按血压值分为正常组(WKY组),模型组(SHR组),卡托普利组(Captopril组),复方芪麻胶囊高(QM-H)、中(QM-M)、低(QM-L)剂量组,每组10只,连续灌胃给药4周.给药前、给药2周和给药4周测定各组大鼠血压.末次给药后,各大鼠麻醉后取血,分离血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测大鼠血清中血管紧张素转换酶(ACE)、血管紧张素(Ang)Ⅱ、血管紧张素1型受体(AT1)、ACE2、Ang(1-7)、Mas含量.结果在给药前,与WKY组相比,各组SHR高血压模型大鼠收缩压、舒张压均显著升高(P<0.01).SHR组、Capto-pril组、QM-H、QM-M、QM-L组之间两两比较,收缩压、舒张压差异均无统计学意义(P>0.05);在给药2周后与4周后,与WKY组比较,SHR组大鼠收缩压、舒张压均明显升高(P<0.01);与SHR组大鼠比较,Captopril组、QM-H、QM-M、QM-L组大鼠收缩压、舒张压均明显降低(P<0.01).与WKY组比较,SHR组大鼠血清ACE、AngⅡ、AT1含量均显著上升(P<0.01);与SHR组大鼠比较,Captopril组、QM-H、QM-M、QM-L组ACE、AngⅡ、AT1含量均显著降低(P<0.05或P<0.01).与WKY组比较,SHR组大鼠血清ACE2、Ang(1-7)、Mas含量均显著性降低(P<0.01);与SHR组大鼠比较,Captopril组、QM-H、QM-M、QM-L组ACE2、Ang(1-7)、Mas含量均显著升高(P<0.05或P<0.01).结论复方芪麻胶囊可明显降低SHR大鼠的收缩压和舒张压,其作用可能与抑制ACE-AngⅡ-AT1轴,增强ACE2-Ang(1-7)-Mas轴有关.

基于ACE-AngⅡ-AT1R、ACE2-Ang(1-7)-MAS信号通路研究唐古特红景天活性部位抗大鼠高原缺氧性肺动脉高压的作用机制

目的本研究基于ACE-AngⅡ-AT1R、ACE2-Ang(1-7)-MAS信号通路研究唐古特红景天活性部位(ACRT)抗大鼠高原缺氧性肺动脉高压的作用机制。方法将大鼠分为对照组、模型组、给药组,模型组和给药组大鼠在低压氧舱(模拟海拔4500米)内通过诱导构建高原缺氧性肺动脉高压模型。给药组分别灌胃给予250、125、62.5 mg/Kg的ACRT。给药4周后,测定大鼠肺动脉压,观察肺组织切片,测定与肺组织中ACE-AngⅡ-AT1R、ACE2-Ang(1-7)-MAS信号通路相关的蛋白表达情况。结果不同剂量给药组ACRT能显著抑制大鼠的肺动脉压升高,抑制大鼠的肺血管重塑、炎性病变,抑制大鼠的肺小动脉内皮Ⅰ、Ⅱ型上皮细胞线粒体肿胀,并调控大鼠肺组织中与ACE-AngⅡ-AT1R、ACE2-Ang(1-7)-MAS信号通路相关的蛋白活化,其中高剂量给药组效果最佳。结论ACRT具有显著的抗大鼠高原缺氧性肺动脉高压作用,其具体作用机制可能与调控ACE-AngⅡ-AT1R、ACE2-Ang(1-7)-MAS信号通路有关。

中低强度运动训练对早期高血压大鼠中枢系统ACE2-Ang(1-7)-Mas与ACE-AngⅡ-AT 1轴ACE2、ACE、AT 1的影响

目的考察中低强度运动训练对早期高血压大鼠(SHR)中枢系统血管紧张素转化酶2-人血管紧张素(1-7)-G蛋白偶联受体[ACE2-Ang(1-7)-Mas]与血管紧张素转化酶-人血管紧张素Ⅱ-血管紧张素1型受体(ACE-AngⅡ-AT1)轴的影响,探讨中低强度运动训练对SHR血压调节能力的作用机制。方法采用大鼠跑台的训练方式对大鼠进行中低强度运动训练,采用静脉快速注射苯肾上腺素引起反射性心动过缓或过速,采用“尾套法”记录心率变化(ΔHR)、血压变化(ΔMAP),利用大鼠脑立体定位仪结合大鼠脑图谱进行大鼠中枢系统延髓腹外侧部(RVLM)、孤束核(NTS)和室旁核(PVN)组织的定位剥离,采用Real-time PCR检测ACE2-Ang(1-7)-Mas与ACE-AngⅡ-AT1轴血管紧张素转化酶2(ACE2)、G蛋白偶联受体(Mas)、血管紧张素转化酶(ACE)、血管紧张素1型受体(AT1)的mRNA表达。结果与同源正常血压大鼠安静(WKY+Sed)组相比,自发性高血压大鼠安静(SHR+Sed)组LVEDP、LVM升高,-dp/dt max降低,差异均有统计学意义(P<0.05),自发性高血压大鼠运动(SHR+ExT)组与自发性高血压大鼠安静(SHR+Sed)组相比,LVEDP、LVM降低,差异有统计学意义(P<0.05)、+dp/dt max、-dp/dt max升高;与WKY+Sed组相比,SHR+Sed组压力反射敏感性(BRS)下降,差异均有统计学意义(P<0.05),SHR+ExT组的BRS较SHR+Sed组增强,差异有统计学意义(P<0.05);在RVLM、NTS及PVN中,与WKY+Sed组相比,SHR+Sed组ACE2均下降,差异均有统计学意义(P<0.05),RVLM及PVN中的ACE、AT1上升,NTS中的AT1上升(P<0.05);在RVL、MNTS及PVN中,WKY+ExT组的ACE2、ACE、AT1与WKY+Sed组差异无统计学意义,SHR+ExT组的ACE2较SHR+Sed组增强,差异有统计学意义(P<0.05),AT1下降,差异有统计学意义(P<0.05),与WKY+Sed组、WKY+ExT组差异无统计学意义;在PVN中,与WKY+Sed组、WKY+ExT组相比,SHR+ExT组的ACE增强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论中低强度运动训练通可能通过改善BRS、调节ACE2-Ang(1-7)-Mas与ACE-AngⅡ-AT1轴ACE2、ACE、AT1的表达改善自发性大鼠血压。

复肾功方对慢性肾衰竭大鼠ACE-AngⅡ-AT1R及ACE2-Ang(1-7)-MASR轴“调控-拮抗”作用的影响

目的:研究复肾功方对腺嘌呤诱导的慢性肾衰竭(CRF)大鼠血管紧张素转化酶-血管紧张素Ⅱ-血管紧张素Ⅱ1型受体(ACE-AngⅡ-AT1R)轴与血管紧张素转化酶2-血管紧张素(1-7)-Mas受体[ACE2-Ang(1-7)-MASR]轴的"调控-拮抗"作用,探讨其延缓CRF进展的作用机制。方法:将65只雄性SD大鼠随机分为正常组10只、造模组55只,正常组常规饲养,造模组进行为期28 d的0.25 g·kg^(-1)d-1腺嘌呤混悬液灌胃。模型建立后,将存活造模大鼠随机分为模型组,贝那普利组(0.01 g·kg^(-1)·d^(-1)),复肾功方低、中、高剂量(4,8,16 g·kg^(-1)·d^(-1))组,正常组和模型组以等体积生理盐水灌胃,持续28 d。实验结束后,测量各组大鼠尾静脉舒张压(SBP),收缩压(DBP),并收集24 h尿液以测定24 h尿蛋白(24 h U-pro);测定血清中肌酐(SCr),尿素氮(BUN)含量;苏木素-伊红(HE)染色观察肾组织形态;马松(Masson)染色观察肾间质纤维化程度;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清和肾组织匀浆中AngⅡ,Ang(1-7)及血清中胱抑素C(CysC)的含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肾组织中ACE,ACE2,AT1R,MASR蛋白表达水平;免疫组化标记肾组织中ACE,ACE2蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清SCr,BUN,CysC明显上升(P<0.05),血清与肾组织中的AngⅡ含量明显增加,Ang(1-7)含量明显减少(P<0.05),肾组织中ACE,AT1R蛋白表达量明显升高(P<0.05),ACE2,MASR蛋白表达量明显降低(P<0.05);与模型组、贝那普利组比较,经复肾功方干预治疗后,大鼠血清SCr,BUN,CysC含量明显下降(P<0.05),血清与肾组织中的AngⅡ含量显著减少,Ang(1-7)含量明显增加(P<0.05),肾组织中ACE,AT1R蛋白表达量显著降低,ACE2,MASR蛋白表达量明显升高(P<0.05),其中复肾功方高剂量效果最佳,复肾功方高、中、低剂量的效果呈剂量相关性。结论:复肾功方可改善腺嘌呤所致CRF大鼠肾功能和肾脏的病理学改变,其机制可能与通过抑制ACE-AngⅡ-AT1R轴,同时促进ACE2-Ang(1-7)-MASR轴来延缓CRF的进展有关。

血管紧张素转化酶2(ACE2)在糖尿病大鼠肾损伤中的作用及机制分析

目的:通过比较肾脏组织中血管紧张素转化酶Ⅰ(angiotensin converting enzymeⅠ,ACE)-血管紧张素Ⅱ(ang iotensinⅡ,AngⅡ)-血管紧张素Ⅱ受体1亚型(AngⅡtype 1 receptor,AT1)/血管紧张素转化酶2(angiotensinconverting enzymeⅡ,ACE2)-血管紧张素1-7(angiotensin 1-7,Ang 1-7)-Mas及肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensinsystem,RAS)相关调节因子在肾损伤过程中的表达差异,探讨ACE2在糖尿病大鼠肾脏损伤发生发展中的作用及可能的分子机制。方法:研究选用STZ腹腔注射致大鼠糖尿病,分别于15d(对照1组和模型1组)和30d(对照2组和模型2组)断头处死,取肾脏组织。PCR检测肾脏组织中ACE、AT1、ACE2和Mas mRNA的表达水平;放免法测定肾脏局部组织中肾素活性和Ang I、AngⅡ含量。结果显示:与对照组相比,模型1组大鼠肾脏组织中ACE2和其Mas受体mRNA表达升高,ACE mRNA表达无显著差异,AT1 mRNA表达下降,ACE/ACE2 mRNA比值下降;模型2组大鼠肾脏组织中ACE2 mRNA表达低于对照2组,Mas受体mRNA表达无显著变化,ACE mRNA的表达高于对照2组,AT1受体有同样升高趋势,ACE/ACE2 mRNA表达比值较对照2组升高,有显著性差异。放射免疫分析结果显示:模型1组肾脏局部组织中肾素活性和Ang I含量低于对照1组,有显著性差异(P<0.05),而AngⅡ含量高于对照1组,无显著性差异(P>0.05);模型2组肾素活性和Ang I极显著高于对照2组(P<0.01),同时AngⅡ也显著高于对照2组(P<0.05)。结论:ACE与ACE2表达失调是糖尿病大鼠肾损伤发生发展的原因之一。损伤初期以ACE2-Ang(1-7)-Mas轴的激活占优势;严重损伤时,ACE-AngⅡ-AT1轴的激活占优势。ACE2在早期肾脏病变的发病中通过降解AngⅡ发挥积极的保护作用。

新型肾素-血管紧张素系统治疗高血压的研究进展

最新发现的肾素-血管紧张素系统(RAS)新成员ACE2-Ang(1-7)-Mas在治疗高血压及靶器官损伤方面起着重要作用,其与经典的RAS有着密切联系,但在功能上却对抗经典RAS(ACE-Ang II-AT1)对机体的不利影响。另外,AT2受体在心脑血管疾病靶器官的保护方面也有着巨大潜能。