点击化学制备AChE/MAO-B双抑制剂及活性评价

通过点击化学(Click)设计、合成了22个香豆素衍生物。多数化合物在微摩尔范围内表现出良好的AChE和MAO-B双抑制活性,具有良好的生物相容性。尤其是一种名为A2B5的化合物,对AChE和MAO-B的IC_(50)分别为(0.23±0.02)、(0.31±0.03)μmol/L,是最佳的AChE/MAO-B双抑制剂。实验结果表明香豆素基团是一类有效的AChE和MAO-B双抑制活性基团,羟基取代苯环的存在能够增强抑制活性。分子对接研究发现A2B5是双位点抑制剂,苯基部分结合到AChE的CAS位点,香豆素结合到PAS位点,三氮唑环占据两个活性位点的中间峡谷。A2B5的香豆素部分结合到MAO-B的入口空腔,苯基部分结合到底物空腔,并嵌入到Tyr435、Tyr398和FAD形成的“芳香笼”。总之,香豆素C7位置取代衍生物可以被开发为AChE/MAO-B双抑制剂,为进一步开发抗阿尔茨海默病的双靶点药物提供一个新的起点。

香豆素衍生物AChE抑制剂的3D-QSAR研究

采用Topomer CoMFA方法研究了44种香豆素衍生物AChE抑制剂的三维定量构效关系D-QSAR模型。建立的Topmer CoMFA模型的交互验证相关系数q^(2)为0.606,拟合相关系r^(2)=0.996,标准估计误差SEE=0.046,Fisher检验值F=891.096,由此可见该模型是有效的。通过Topomer CoMFA模型三维等势图揭示了结构对活性的影响。并采用分子对接研究了配体和受体蛋白之间的结合。该模型为进一步探索黄酮类衍生物作为AChE抑制的构效关系,以及该类分子的结构设计奠定理论基础。

毕赤酵母表达重组红林蚁AChE高密度发酵工艺研究

【目的】优化毕赤酵母高密度生产重组红林蚁乙酰胆碱酯酶(AChE)的发酵条件,为AChE在农药残留检测中应用提供酶源。【方法】采用毕赤酵母表达系统,选用高表达AChE的重组子X33/pPICZαAAChE,对毕赤酵母高密度生产重组红林蚁AChE的发酵条件进行优化,确定最佳发酵pH值、温度、溶解氧、补料流加速率等因素。【结果】毕赤酵母表达重组红林蚁AChE高密度发酵工艺的最佳参数:pH5.0、溶解氧30%、温度29℃、转速500 r/min、罐压0.06 MPa,甲醇诱导72~96 h时发酵液上清AChE活性增长最快。从发酵结果看,发酵结束菌体湿重可达280 mg/mL,发酵罐内甲醇诱导96 h酶活性最高,达6 000 U/mL,是摇瓶诱导表达的8倍。【结论】毕赤酵母表达系统最佳发酵工艺能实现红林蚁AChE的高密度发酵生产,降低AChE提取成本。

增液八珍汤对慢传输型便秘大鼠模型结肠肌5-HT、AchE、SP及VIP的影响

目的:观察增液八珍汤对慢传输型便秘大鼠结肠肌间神经丛中5-HT、AchE、VIP、SP的影响。方法:将72只SPF级大鼠随机分为空白对照组、模型组、麻仁软胶囊组、增液八珍汤低剂量组、增液八珍汤中剂量组和增液八珍汤高剂量组各12只。麻仁软胶囊组给予麻仁软胶囊内容物6.2 mL/(kg·d)灌胃,增液八珍汤低、中、高剂量组分别给予17、34、68 g/(kg·d)增液八珍汤灌胃,共给药14 d,空白对照组和模型组给等量的生理盐水。大鼠结肠组织给予HE染色及免疫组化染色,并对染色组化结果进行半定量积分分析。结果:与模型组比较,增液八珍汤各剂量组及麻仁软胶囊组结肠肌间神经丛神经元阳性表达和5-HT、AchE、VIP、SP定量分析显著增加(P<0.05);与麻仁软胶囊组比较,增液八珍汤各剂量组及麻仁软胶囊组结肠肌间神经丛神经元阳性表达和5-HT、AchE、VIP、SP定量分析显著增加(P<0.05),增液八珍汤中、高剂量组对结肠肌间神经丛5-HT、AchE、VIP、SP神经元增加的量均优于麻仁软胶囊组(P<0.05)。结论:增液八珍汤可通过增加便秘大鼠结肠中5-HT、AchE、VIP、SP表达神经细胞含量,刺激结肠收缩,增加结肠动力,加快结肠传导速度。

有氧训练对雌性去卵巢小鼠海马区ChAT、AChE、nAChR mRNA基因表达的影响

目的:研究有氧训练对雌性去卵巢小鼠海马区ChAT、AChE、nAChRmRNA表达的影响。方法:24只8周龄雌性C57BL/6/Bkl小鼠分为3组,假手术安静组(Sham,n=8)、去卵巢安静组(OVX,n=8)、去卵巢运动组(OVX+EX,n=8)。对OVX+EX组进行8周有氧训练(40 min/次,5天/周),采用实时荧光定量PCR方法分析ChAT、AChE、nAChRmRNA的表达量。结果:与Sham组比较,OVX组和OVX+EX组ChAT、AChE、nAChRmRNA表达均下降(P<0.01);与OVX组比较OVX+EX组ChAT、nAChR mRNA表达上升(P<0.01),AChE mRNA表达下降(P<0.05)。结论:小鼠去卵巢后ChAT、AChE、nAChR mRNA表达均有所下降,有氧训练通过上调去卵巢小鼠海马组织中的ChAT、nAChR和下调AChE,增强其海马胆碱能系统功能。

针药结合对VD大鼠脑内Ach及AchE活性的影响

目的:观察电针与中药复方脑康胶囊结合对VD大鼠脑内Ach含量及AchE活性的影响.方法:雄性大鼠60只,随机抽取10只,作为正常对照组;余下50只经4-血管阻断法造成VD动物模型后,随机抽取40只分成模型组、针药结合组、电针组、中药组.经4周分别治疗后处死取脑,检测其脑内Ach含量及AchE活性并进行比较.结果:针药结合组与模型组比较,Ach含量明显升高(P＜0.01),AchE活性明显降低(P＜0.01);与电针组和中药组相比,Ach含量升高(P＜0.05),AchE活性降低(P＜0.05).结论:针药结合能明显改善VD大鼠胆碱能系统的功能,调节脑内Ach生理代谢,从而达到治疗VD的目的,其作用较单纯电针和中药治疗明显.

人脑乙酰胆碱酯酶(hAChE)基因在毕赤酵母中的分泌表达与鉴定

研究了hAChE基因在毕赤酵母中的表达。设计并合成引物Pb1和P2,以18周龄引产胎儿大脑组织mRNA为模板,经AMV逆转录和高保真PCR,扩增出序列正确的hAChE成熟肽完整基因约1.8kb,经鉴定获得正确构建的分泌型酵母表达栽体pHIL-S1(hAChE),BglⅡ线性化后回收的酵母表达单位经电穿孔法转化入毕赤酵母GS115中,经MD/MM营养表型筛选、提取酵母基因组进行PCR鉴定和含3-酰基吲哚培养基进行表达产物的显色反应,初步筛选出分泌表达有hAChE活性的P.patstoris菌22株。依据hAChE酶活性与3-酰基吲哚显色深浅成正比,在平皿和微量反应板上快捷地筛选出高效表达菌pHIL-S1(AChE)(Ⅰ)-7株,SDS-PAGE分析和Western印迹试验表明,产物分子量约为65kDa,经甲醇诱导摇瓶培养,发酵上清原液rhAChE相对酶活性高达4.0mU/ml,表达量占分泌蛋白总量的23.6%。

毒死蜱和三唑磷对斑马鱼头部AChE活性影响及在鱼体内的富集

采用半静态法，测定了在96h—Lc50的1／10、1／20、1／40及1／80作用剂量下慢性暴露，毒死蜱和三唑磷对斑马鱼头部乙酰胆碱酯酶（AChE）活性的抑制及两种农药在鱼体的富集作用，并研究解除30d后酶活性的恢复。结果表明，随暴露剂量增大、暴露时间延长，农药对AChE活性抑制越强。在96h—LC50的1／10作用剂量下连续暴露30d，毒死蜱和三唑磷处理组斑马鱼头部AChE活性分别为对照的42．25％和31．80％。毒死蜱不同剂量处理组酶活性在解除药剂后30d均可恢复到对照的90％以上，而三唑磷高剂量处理组（96h—LC50的1/10和1／20）分别只有对照的74．91％和71．46％。毒死蜱极容易在鱼体富集，慢性暴露30d富集系数达260．91～1320．03L·kg^-1，而三唑磷仅为8．23-26．84L·kg^-1。

ACh对人垂体腺瘤细胞内蛋白激酶C、胞内游离钙及cAMP/cGMP的影响

我们曾发现ACh可明显地抑制垂体腺瘤细胞的增殖代谢 ,为深入探讨ACh抑制垂体腺瘤细胞增殖作用的机制 ,观察了ACh作用后垂体腺瘤细胞内蛋白激酶C (PKC)、[Ca2 +]i及cAMP/cGMP的变化。结果发现 :( 1)与空白处理组相比 ,使用PKC的激动剂PMA处理培养的人垂体腺瘤细胞时可使胞浆、胞膜和细胞总PKC活性浓度均升高 ,但ACh ( 10 μmol/L)作用 15min后 ,胞浆、胞膜和细胞总PKC活性均下降 ,且此作用可被阿托品阻断 ;( 2 )ACh ( 10 μmol/L)作用于单个人垂体腺瘤细胞后 ,立即使垂体腺瘤细胞 [Ca2 +]i 相对水平降低 ,但此作用可被阿托品阻断 ;( 3 )ACh作用于人垂体腺瘤细胞 15min后 ,胞内cAMP水平均明显升高 ,而cGMP没有改变。该结果为探讨ACh抑制垂体腺瘤细胞增殖的分子机制提供了重要线索 ,同时提示 。

镉对罗非鱼脑AChE及组织中代谢酶的影响

将尼罗罗非鱼分别在含0.5mg/LCd和5.0mg/LCd的水环境中染毒28d,对其脑乙酰胆碱脂酶(AChE)及鳃、肝脏和心脏中的乳酸脱氢酶(LDH)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)分别进行测定.结果表明,高浓度或长期的低浓度镉污染可抑制脑AChE的活性.高镉组中LDH在三个组织中都极显著下降,下降的程度依次为:肝脏>心脏>鳃,而在低镉组中LDH在后期显著升高;肝、心及鳃中ALT和AST在两组中匀显著下降,其中ALT下降程度依次为肝>心>鳃;AST依次为心>肝>鳃.可见,高浓度镉可引起鱼的神经机能紊乱和能量代谢障碍;使鱼的组织细胞受到不同程度的损害,其中对肝脏细胞的损害最为严重,其次是心脏和鳃.

载体预处理对蜂窝状V_2O_5/ACH低温脱硫脱硝活性的影响

经不同预处理条件制得的蜂窝状活性炭(ACH),等体积浸渍偏钒酸铵和草酸的混合溶液,经干燥、煅烧和预氧化后制得新型V2O5 ACH催化剂。实验结果表明,850℃下水蒸气活化可提高2%V2O5 ACH催化剂在200℃下的脱硫活性,但基本不改变脱硝活性;NH3再生后催化剂的脱硝活性显著提高,对SO2的吸附也有所增加。活化温度从850℃升至950℃,相应催化剂的脱硫脱硝活性略微降低;活化时水蒸气体积含量从28%增至80%,催化剂的脱硫脱硝活性也有不同程度的下降。在28%的水蒸气含量和850℃活化温度的最佳预处理条件下,经第二次再生后的2%V2O5 ACH催化剂的SO2转化率降为80%时的吸附硫容为4.9%,同时脱硝率达93%。

海鱼AChE监测海水有机磷农药的可行性研究

有机磷农药 (OPs)对乙酰胆碱酯酶 (AChEEC 3.1 .1 .7)具有专一性抑制作用 ,因此AChE常作为淡水和土壤OPs污染的特异性标识物 (biomarker)。本文在海水背景下 ,通过测定两种有机磷农药 (马拉硫磷和甲基对硫磷 )对海洋鱼类—鲈鱼 [Lateolabraxjaponicus(cuvier) ]脑组织AChE的抑制效应 ,分析了海鱼AChE监测海水OPs的可行性。结果显示 ,抑制时间为 2 0min时 ,抑制程度达到相对稳定 ;在低浓度OPs抑制下 ,纯酶液比粗酶液表现出更好的敏感性 ,对马拉硫磷和甲基对硫磷的灵敏度分别达到 0 .2 8μg·L 1和 0 .2 μg·L 1;在一定浓度范围内 ,AChE活力对OPs具有显著的线性响应。研究表明 ,利用鲈鱼AChE指示和监测海水OPs的微污染是完全可行的。

石杉碱甲-AChE复合物中石杉碱甲的结构特征——量子化学研究

在运用量子化学从头计算方法(HF/4-31G)结合点电荷模型方法对AChE-HuPA复合物活性位点的410个原子和1929个点电荷进行理论计算的基础上,比较了石杉碱甲分子在形成复合物前后的结构变化特征.发现复合物中石杉碱甲分子构象并非能量最低构象,它的能量比HF/4-31G全优化得到的构象的能量高91.8kJ/mol.和单分子状态相比,形成复合物后季铵基和内酰胺基的N—H,C(?)O键的键长变长、键强减弱,其总原子净电荷也发生了明显的变化.且这些基团的空间取向都有不同程度的改变,C(8)—N(21)键的旋转达20°.这些信息将有益于设计新的AChE抑制剂.

HgCl_2对斑马鱼SOD,AChE酶活性和基因相对转录量的影响

以HgCl2为实验毒物,研究其对斑马鱼的毒性效应,经染毒后,分别在第1天和第7天取斑马鱼的肌肉测定超氧化物歧化酶(SOD)、乙酰胆碱酯酶(AChE)活性,半定量RT-PCR检测肌肉中乙酰胆碱酯酶、细胞色素P450(CYP1A)和超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)基因的相对转录量。结果显示HgCl2对斑马鱼的毒性很强,低浓度染毒1d后,基因转录量显著变化,而酶活性7d后才有显著变化。HgCl2对斑马鱼96h-LC50为244.06μg·L-1;AChE活性和基因相对转录量在第1天呈下降趋势;第7天,酶活性依然下降,但基因相对转录量在低、中浓度组呈上升趋势;高浓度组呈下降趋势,和对照组相比差异显著。SOD活性第7天表现促进作用,与染毒浓度成正相关,并有显著性差异;Cu/Zn-SOD基因转录量第1天总体呈下降趋势,第7天低浓度HgCl2对Cu/Zn-SOD基因转录量有诱导作用,高浓度有抑制作用。CYP1A基因相对转录量第1天整体呈下降趋势;第7天呈现出低浓度升高,中、高浓度降低的变化规律。以上结果说明基因转录水平的变化比其蛋白翻译水平的变化出现更早,更灵敏,因此可作为环境污染物的早期预警;同时说明污染物对生物大分子的影响比较复杂,受多种因素调控。

两种温度条件下杀虫单对赤子爱胜蚓蛋白含量SOD和AChE活性的影响

为评价土壤的农药污染程度,选用杀虫剂杀虫单对赤子爱胜蚓(Eiseniafoetida)进行染毒试验,采用滤纸法研究两种温度下农药污染对赤子爱胜蚓的毒理和其体内蛋白含量、超氧化物歧化酶(SOD)和乙酰胆碱酯酶(AChE)酶活力的影响。结果发现,杀虫单单一作用时,在10℃和20℃两种温度下,蚯蚓死亡率分别为20%和30%;随杀虫单浓度的增大,蚯蚓体内蛋白含量出现不同程度的升高;SOD活性随农药浓度的升高整体表现为下降趋势,其降低率分别为32.2%和21.2%,但规律不很明显;时间和浓度对SOD的影响达到极显著(P<0.01);农药对蚯蚓体内AChE活力的抑制作用不明显,这与该农药是较弱的胆碱酯酶抑制剂有关,且随暴露时间的延长,AChE活力表现出一定的恢复现象。试验结果表明,温度对蚯蚓死亡率及蛋白含量、SOD、AChE酶的活性有一定影响,可通过对比两种温度下的蚯蚓体内酶活性的大小来进行生物监测和环境影响评价。

不同死后时间骨骼肌运动终板乙酰胆碱酯酶(AChE)降解变化的研究——酶组织化学定量分析(英文)

为进一步了解骨骼肌的死后变化特点和规律及其与死后时间 (PMI)的关系 ,本文选用成年实验大鼠 ,系列观察了死后 0 - 96小时 (0 - 96 hpm)骨骼肌运动终板和肌纤维在不同温度条件下 ACh E(乙酰胆碱酯酶 ) ,SDH(琥珀酸脱氢酶 ) ,L DH(乳酸脱氢酶 ) ,Ca2 + - ATPase(钙激活三磷腺苷酶 )的酶组织化学变化 ,并使用图象处理系统对上述酶反应结果进行了定量分析和比较。结果发现 ,上述改变与 PMI有明显的相关关系 ,其中运动终板 Ach E因位于突触间隙的特殊位置以及自身的耐活性质 ,故反应明确 ,稳定性高 ,降解缓慢显示更清晰和持久的降解曲线 ,可作为藉肌肉组织降解变化用于推断死亡时间的标志酶。

NH_3再生对蜂窝状V_2O_5/ACH催化剂同时脱硫脱硝性能的影响

考察了NH3再生温度及再生次数对蜂窝状活性炭ACH担载V2O5催化剂（V2O5/ACH）同时脱硫脱硝再生性能的影响,并重点分析了NH3再生提高催化剂脱硫活性的微观机理。结果表明：在NH3（φ=0.05）/Ar气氛中于330-350℃再生70 min能使V2O5/ACH催化剂再生,且脱硝活性显著提高,脱硫活性也有所增加,其中最佳再生温度为330℃;V2O5/ACH催化剂于200℃同时脱硫脱硝反应后生成的硫酸铵盐在330-350℃可完全分解,但VOSO4却难以被还原脱除。

银杏内酯对胚基底前脑NOS、AChE阳性神经元发育的影响

目的 探讨银杏内酯对胚基底前脑NOS和AChE阳性神经元发育的影响。方法 实验分成银杏组、NGF组、BDNF组和单纯对照组 ,取孕 17dSD大鼠胚基底前脑原基制成细胞悬液接种于 96孔培养板和 2块 2 4孔培养板中 ,分别加入含银杏内酯、NGF、BDNF及不含上述成份的DMEM培养液 ,于体外培养 18d后 ,96孔培养板行MTT比色分析测定光吸收值 (OD值 ) ,以检测培养的神经元活力。2块 2 4孔培养板分别行NADPH d和AChE组化染色 ,显微镜下计数各组每孔中的NOS和AChE阳性神经元数 ,并用CMM 30 1图像分析系统对两种神经元的细胞面积和细胞周长进行处理 ,数据用方差分析和SNK检验进行统计学处理。结果 银杏组MTT比色分析的OD值和NOS、AChE阳性神经元数、细胞面积、细胞周长等指标均明显地好于单纯对照组 ,达到或仅稍差于NGF组或BDNF组的指标。

针药合用刺激嗅觉系统对血管性痴呆大鼠学习记忆功能及大脑边缘叶ChAT、AchE活性的影响

目的探讨针药合用刺激嗅觉系统对血管性痴呆大鼠学习记忆功能及大脑边缘叶ChAT、AchE活性的影响作用。方法制作VD大鼠模型和VD并损毁嗅球大鼠模型,分别通过嗅三针电刺激、丁香酚刺激、针药合用方法,测试大鼠水迷宫学习记忆能力及大脑边缘叶胆碱乙酰化酶(ChAT)、乙酰胆碱酯酶(AchE)活性。结果定位航行试验显示,平均逃避潜伏期和平均游泳路程比较,正常对照组明显短于VD模型组(P<0.01);嗅三针组、丁香酚刺激组和针药合用组均明显短于VD模型组(P<0.01);针药合用组短于嗅三针组、丁香酚刺激组(P<0.05);嗅三针组与丁香酚刺激组相比较,其差异无显著性意义(P>0.05);VD模型组与VD嗅球损毁模型组相比较,其差异无显著性意义(P>0.05)。大脑边缘叶ChAT、AchE活性比较,VD模型组明显低于正常对照组(P<0.01);嗅三针组、丁香酚刺激组和针药合用组明显高于VD模型组(P<0.01);针药合用组高于嗅三针组和丁香酚刺激组(P<0.05);嗅三针组与丁香酚刺激组之差异无显著性意义(P>0.05)。VD模型组与VD嗅球损毁模型组之差异无显著性意义(P>0.05)。结论嗅三针和丁香酚均能够显著增强VD大鼠学习记忆功能、提高大脑边缘叶ChAT和AchE活性、针药合用效果更佳,其治疗效应的发挥依赖于嗅觉传导通路的完整性。