胶乳增强免疫比浊法NSE诊断试剂盒性能验证及临床应用

目的对胶乳增强免疫比浊神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)试剂盒进行性能验证。方法按照CNAS-GL037:2019《临床化学定量检验程序性能验证指南》、WS/T492-2016《临床检测定量测定项目精密度与正确度性能验证》并结合试验工作,重新设计了检验方法,在贝克曼库尔特AU5800全自动生化分析对北京九强金斯尔NSE胶乳增强免疫比浊法试剂盒的正确度、精密度、线性范围、可报告范围和生物参考区间等性能进行验证和评估,并与对应罗氏电化学发光法试剂盒进行方法学比对。测试结果与厂家所给出的产品分析性能以及美国国家卫生委员会临床检测中心(National Center for Clinical Laboratories,NCCL)的相关指标进行了对比。结果5个水平的正确度偏倚分别为1.74%、-1.42%、-0.88%、-3.09%和-0.90%;2个水平的批内及批间精密度的变异系数(coefficient of variation,CV)分别为1.85%和0.88%(判断标准CV<7.5%),4.99%和3.34%(判断标准CV<10%);线性范围(3.5~148.1ng/mL)验证回归系数a值为0.9894,R2=0.9978;最大稀释倍数为8倍,临床可报告上限为1165.2ng/mL;厂家提供的生物参考区间为0~16.3ng/L,符合率R为100%,各性能均通过验证。此外,与罗氏电化学发光试剂盒进行方法学比对,其相关性分析结果为:两种方法的相关性(R2=0.989)、一致性(CCC=0.984)均较好,在临床判定效果上同Roche的电化学发光试剂盒相比,免疫增强比浊方法阳性符合率为95.74%,阴性符合率为96.23%,两者测定值接近,相关系数达0.9894。结论基于全自动生化分析平台测定的NSE胶乳增强免疫比浊试剂盒,各性能均可以较好地满足临床使用要求,且与电化学发光法检测结果一致性较好,有望进一步推进NSE国产体外诊断试剂盒的临床应用。

溴甲酚绿法与免疫比浊法联合应用避免尿微量白蛋白检测假阴性结果

目的 预防尿微量白蛋白(mALB)检测因发生钩状效应导致结果与临床实际情况不符,对发生钩状效应的标本使用溴甲酚绿法联合检测,并验证其可行性。方法 收集2023年1月—2023年5月武警重庆总队医院检验科的20份新鲜高白蛋白尿液标本,根据免疫比浊法按原倍或稀释模式确定理论浓度;考虑到溴甲酚绿法的检测低限和检测线性范围上限,将溴甲酚绿法样本增量5倍定位浓度梯度。将免疫比浊法标准样本量测定白蛋白的结果与理论浓度绘制曲线,评估钩状效应。同时采用溴甲酚绿法取样本增量5倍检测,每份样本检测3次,计算均值、变异系数(CV)以及与已知理论浓度的偏移(Bias)。评估发生钩状效应的标本使用溴甲酚绿法检测的可行性。结果 当尿mALB浓度大于1 082 mg/L时,免疫比浊法出现钩状效应,直接测定结果与临床不相符。而溴甲酚绿法在尿mALB浓度达到412 mg/L时,样本增量5倍测定结果可满足临床要求。结论 在尿mALB浓度达到412 mg/L时,可用溴甲酚绿法样本增量5倍测定替代免疫比浊法,两种方法联合应用可避免尿mALB检测结果因发生钩状效应导致与临床实际情况不相符。

免疫比浊法和生化检测法对糖尿病肾病的诊断价值研究

目的探讨研究免疫比浊法和生化检测法对糖尿病肾病的诊断效果。方法非随机选取2023年2月—2024年2月贵州省黔东南州剑河县人民医院收治的200例疑似糖尿病肾病患者为研究对象,采集所有人员的新鲜尿标本,采用免疫比浊法和生化检测法检测,以肾功能检查结果为金标准,对比两种检测方法对糖尿病肾病诊断效能。结果肾功能检查结果显示阳性180例,检出率为90.00%(180/200),免疫比浊法的检出率为82.50%(165/200),生化检测法的检出率为63.50%(127/200)。免疫比浊法的准确度为82.50%(165/200),高于生化检测法的66.50%(133/200),灵敏度为86.11%(155/180),高于生化检测法的66.67%(120/180),差异有统计学意义(χ^(2)=13.476、14.255,P均<0.05)。免疫比浊法的特异度为50.00%(10/20),低于生化检测法的65.00%(13/20),差异无统计学意义(χ^(2)=0.415,P>0.05)。结论相较于生化检测法,免疫比浊法诊断糖尿病肾病的准确度更高,能有效提升诊断效能,有助于辅助病情诊断。

单克隆抗体与多克隆抗体的混合在胱抑素C测定试剂盒(胶乳免疫比浊法)中的应用

为优化兔抗人胱抑素C多克隆抗体和人胱抑素C单克隆抗体的混合比例,将不同比例混合的抗体制备成胱抑素C(胶乳免疫比浊法)测定试剂盒,对试剂盒的灵敏度进行测定,从而筛选出最适的混合比例,与进口抗体和市面上较为认可的试剂盒进行应用比较。结果表明,兔抗人胱抑素C多克隆抗体和人胱抑素C单克隆抗体最适的混合比例为70%:30%;将国产兔抗人胱抑素C多克隆抗体、进口胱抑素C多克隆抗体与最适混合比例的抗体相同质量投量料同时包被成试剂,分别命名为试剂1、试剂2、试剂3,三种试剂校准后同时进行临床样本测定及相关性分析、线性实验及抗原过剩测定,数据显示,试剂3与试剂1及试剂3与试剂2之间均具有很强的临床相关性,线性实验和抗原过剩测定数据无明显差异,都可以满足应用要求;将试剂3与市场上口碑较好的的胱抑素C试剂盒进行临床样本测定比对,实验数据显示,两者在临床应用上无明显差异;通过胱抑素C单克隆抗体和多克隆抗体混合,减少了交叉反应的可能性,实现了较好的批间和批内一致性,具备更广泛的识别范围,提供了更全面、准确的识别和检测结果。

免疫比浊法对心脑血管疾病患者血浆D二聚体指标进行检验的临床意义

分析对心脑血管疾病患者血浆D二聚体指标进行检验期间应用免疫比浊法干预的临床意义。方法 试验开始时间设置为2021年10月,试验结束时间设置为2022年10月,试验样本设置为心血管疾病患者(n=150)以及50例健康体检者,将心血管疾病患者根据疾病类型分为3组,其中包括:冠心病组、急性心肌梗死组、急性脑梗死组,各50例,将健康体检者设置为常规组,为所有研究对象均提供免疫比浊法血浆D二聚体指标检验。分析检验结果。结果 冠心病组、急性心肌梗死组、急性脑梗死组治疗前血浆D二聚体指标水平高于治疗后(p<0.05);与健康体检者相比,冠心病组、急性心肌梗死组、急性脑梗死组三组的血浆D二聚体指标水平均更高(p<0.05)。结论 对于心脑血管疾病患者而言,应用免疫比浊法进行血浆D二聚体指标检验,其应用效果理想。

用免疫消浊比浊法测定中国对虾血清中的免疫因子

近年来，对虾养殖业受到虾病的极大危害，防治虾病的关键之一是提高虾体本身的免疫抵抗力；为此，必须首先了解对虾的免疫机制，而目前这方面的报道不多。Ｓｄｅｒｈｌ［１９８２］及Ａｓｈｉｄａ等［１９８２］分别提出，酚氧化酶原系统（ｐｒｏＰＯＳｙｓｔｅｍ）在昆虫...

M蛋白对免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测免疫球蛋白的干扰

目的探讨单克隆免疫球蛋白(M蛋白)对免疫透射比浊法和免疫散射比浊法定量检测免疫球蛋白的干扰作用。方法收集54例含不同浓度和类型M蛋白的患者血清样本(IgG型M蛋白20例、IgA型M蛋白16例、IgM型M蛋白18例)和25名体检健康者(正常对照组)的血清样本,分别采用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法定量检测IgG、IgA、IgM。通过干扰实验及回收实验评估某种类型M蛋白对同一样本中其他类型免疫球蛋白检测的干扰作用。结果免疫散射比浊法检测IgG、IgA和IgM的结果高于免疫透射比浊法(P<0.05)。免疫散射比浊法和免疫透射比浊法检测正常对照组血清IgG和IgM浓度的相对偏差分别为4.86%、-1.00%,均低于允许总误差(TEa),而检测IgA浓度的相对偏差(15.42%)高于TEa。2种方法检测IgG型、IgM型M蛋白患者血清IgG、IgM浓度的相对偏差分别为14.38%、4.06%,均高于正常对照组(P<0.05),而检测IgA型M蛋白患者血清IgA浓度的相对偏差(11.95%)低于正常对照组(P<0.05)。IgG型M蛋白血清样本中IgG≥35.13 g/L时,免疫透射比浊法检测IgA的回收结果差异(Diff%)接近或超过其TEa;而IgG浓度达到43.64 g/L时,免疫透射比浊法检测IgM的Diff%仍低于其TEa;相同浓度的IgG型M蛋白对免疫散射比浊法检测IgA和IgM则无明显干扰作用。IgA和IgM型M蛋白均会干扰免疫透射比浊法检测IgG,并使Diff%超过其TEa;而相对较高水平的IgA和IgM型M蛋白会干扰免疫散射比浊法检测IgG。无论免疫透射比浊法还是免疫散射比浊法,IgA型M蛋白对IgM的检测或IgM型M蛋白对IgA的检测均有干扰作用,并使其Diff%超过相应的TEa。结论 IgG型、IgA型和IgM型M蛋白对免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测其他2种免疫球蛋白均有干扰作用,且呈浓度依赖性。免疫散射比浊法抗M蛋白干扰的能力可能优于免疫透射比浊法。

透射和散射比浊法测定血清免疫球蛋白的评价

目的对同一临床实验室采用透射比浊和散射比浊法测定血清免疫球蛋白IgA、IgG和IgM结果偏差进行评估。方法按照美国国家实验室标准委员会(NCCLS)EP9A文件,以散射比浊为比较方法,透射比浊为实验方法进行对比及偏差评估,将测定数据进行相关分析,并对两分析系统之间的预期偏差进行评估。结果IgA、IgG两法各浓度值测定结果的预期偏差均可以接受;IgM浓度为1.0g/L时,两法测定结果的预期偏差不能接受,其余浓度值测定结果的预期偏差可以接受。结论在使用性能较好的全自动生化分析仪及配套试剂的前提下,透射比浊法测定血清IgA、IgG和IgM的结果与散射比浊法的测定结果基本一致。

流动注射免疫比浊法测定血清中免疫球蛋白A

基于可溶性抗原和抗体在液相中特异性结合 ,形成一定大小的抗原 抗体免疫复合物 ,使反应液出现浊度。采用流动注射光度分析法联用单片机 ,优化了实验条件 ;采用合并带技术节省试剂与试样 ,寻找到了抗原抗体反应的最佳浓度比与最佳反应时机 ,从而建立了流动注射免疫比浊测定人体血清免疫球蛋白A(IgA)的新方法。整个测试系统联用单片机 ,使测试过程实现程序操作。本法简便、快速 ,节省试剂和试样 ,进样频率高 ,每小时进样 4

免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测特定蛋白的抗干扰能力比较

目的比较免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测特定蛋白[免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)和C反应蛋白(CRP)]时对游离胆红素(FBil)、结合胆红素(CBil)、血红蛋白(Hb)和乳糜(CH)的抗干扰能力。方法收集血清样本,分别制备高、低2种浓度(IgG:8～12 g/L、>16 g/L;IgM:1.0～1.5 g/L、>2.0 g/L;CRP:4～10 mg/L、>100 mg/L)的特定蛋白混合血清6管,按1∶5、2∶5、3∶5、4∶5、5∶5将4种干扰物分别配成5种不同浓度(FBil:656、1 312、1 968、2 624、3 280μmol/L;CBil:688、1 376、2 064、2 752、3440μmol/L;Hb:9.9、19.8、29.8、39.7、49.6μmol/L;CH:3 000、6 000、9 000、12 000、15 000 FTU)添加于混合血清中,用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法分别检测相应的特定蛋白浓度,计算干扰率,按美国临床实验室标准化协会(CLSI)EP7-A文件评价2种方法的抗干扰能力。添加不同浓度干扰物之后的特定蛋白测定均值超过同一浓度下的空白对照管的±5%为产生了干扰作用。结果免疫散射比浊法检测高浓度IgM、低浓度CRP分别在Hb浓度为9.9、29.8和9.9、29.8、39.7μmol/L时有干扰作用;免疫散射比浊法测定高、低浓度IgM分别在CH浓度为9 000、12 000、15 000和6 000、9 000、12 000、15 000 FTU时有干扰作用;而4种干扰物对免疫透射比浊法检测IgG、IgM和CRP均无干扰作用。结论免疫透射比浊法对临床常见的4种干扰物(FBil、CBil、Hb和CH)的抗干扰能力优于免疫散射比浊法。免疫透射比浊法对于干扰物颗粒较大的脂血、溶血样本具有更高的准确性。

乳胶增强免疫比浊法测定糖化血红蛋白

目的 为了研究乳胶增强免疫比浊法测定糖化血红蛋白在临床中的应用。方法 采用乳胶增强免疫比浊法测定糖化血红蛋白,同时用高铁血红蛋白法测定血红蛋白,然后计算出糖化血红蛋白的百分比。结果 该方法的批内和批间重复性在4.0％以内,测定结果与微柱法有很好的相关性,其参考范围是4.7％～6.3％。该方法使用的试剂比较稳定,开盖后可以使用至少20d,每月只需校准一次,且高浓度的尿素、血脂、胆红素和Schiff反应对该法测定无干扰;红细胞压积比从30％到100％也不影响HbA1c的测定。结论 该方法最大的优点是能进行自动化分析,可以使用末梢血测定;样品前处理少,溶血处理后8min内就可以得到第一个HbAlc结果。由于试剂比较稳定,分析方法的总不精密度大大提高(每月只需校准一次),因此降低了由于频繁校准带来的潜在变异。认为该法用于测定HbAlc具有快速、准确、精度高等优点,可以在使用自动化生化分析仪的医院推广使用。

免疫比浊法测定尿微量白蛋白的探讨

目的 对免疫比浊法测定尿微量白蛋白(UmALB)进行方法学评价。方法 采用免疫比浊法在HITACH17170A全自动生化分析仪上测定UmALB。结果 UmALB的检出限为0-200 mg/L,批内变异系数为0.55％,平均批问变异系数为1.80％,平均回收率为102％。0.62 g/L以上的血红蛋白和1.73μmol/L以上的胆红素对测定有较大负干扰,干扰率分别为-2.60％和-3.0％。结论 该法测定尿微量白蛋白精密度好,准确性高,适于常规实验室使用。

免疫透射比浊法在AU5800全自动生化分析仪检测降钙素原的方法学评价

目的在AU5800全自动生化分析仪上用免疫透射比浊法检测降钙素原（PCT）的方法学评价。方法通过AU5800全自动生化分析仪来检测PCT的精密度、线性、参考区间等指标,并与酶免疫荧光法试剂盒进行相关性比较,从而评价其性能。结果该方法批内和批间精密度分别小于8%和15%;0~80ng/mL范围内线性良好（Y=0.994 1 X＋0.124 5,R2=0.999）;正常人群的参考范围为小于0.5ng/mL;与酶免疫荧光法的相关性良好（Y=0.357 4 X＋0.284 2,R2=0.960 7）。结论本检测方法不仅实现了PCT检测的快速、全自动化,而且化学性能优良、操作简单,降低了临床试剂成本,适合临床推广使用。

免疫透射比浊法检测CRP部分性能指标评价

目的对免疫透射比浊法测定C反应蛋白(CRP)部分性能指标进行评价。方法用免疫透射比浊法测定血清CRP,依据美国临床实验室标准化协会(CLIS)文件要求进行精密度、线性范围评价,并与免疫散射比浊法进行比较。结果 CRP在3.14、6.70mg/L时,总不精密度分别为3.45%和2.21%,均小于CLIA′88规定的允许误差范围的1/2(10%);免疫透射比浊法测定血清CRP在0.12～410mg/L范围内线性良好,相关方程为Y=1.010 9 X-0.086 1;与西门子BNII全自动特定蛋白分析仪免疫散射比浊法比较,回归方程为Y=0.968 1 X+0.600 6,r=0.993 3(P<0.01)。结论免疫透射比浊法检测CRP重复性好、线性范围宽,与免疫散射比浊法具有很好相关性,操作简单,检测速度快,完全符合急诊检测的需要。

免疫透射比浊法与免疫散射比浊法检测特定蛋白的比较研究

目的对免疫透射比浊法测定血清特定蛋白的方法学性能进行初步评价，并与免疫散射比浊法进行比较。方法应用Roche ModularP全自动生化分析仪与Dade Behring BN Pro Spec（现为SIEMENS西门子）特定蛋白测定仪对IgG，IgA，IgM，C3，C4，CRP和hs-CRP7种血清蛋白进行初步的方法学评价，包括透射比浊法与散射比浊法的精密度分析，相关性及线性回归试验。结果①免疫透射比浊法无论是批内精密度还是批间精密度都非常好，CV均〈5％。免疫透射比浊法的精密度要优于免疫散射比浊法。②免疫透射比浊法与免疫散射比浊法从低检测范围到高检测范围，均有着良好的线性回归，斜率均接近于1，截距均接近于0。两法的r自〉0．975。③全自动生化分析仪上的线性检测功能可发现特殊样本的抗原过剩问题。④免疫透射比浊法还具有成本低，收费低，速度快等优点。结论免疫透射比浊法具有优良的精密度及分析灵敏度和检测范围，与免疫散射比浊法相关良好，系统误差较小，且更加实用和便利。

类风湿因子对免疫比浊法测定D-二聚体结果的干扰分析

目的了解类风湿因子对两种D-二聚体检测试剂测定D-二聚体结果的干扰情况。方法采用DDimer PLUS试剂和INNOVANCE DDimer试剂分别测定加入不同浓度类风湿因子干扰物的实验血浆D-二聚体含量。结果类风湿因子阳性的标本对两种试剂测定结果影响均较大,在类风湿因子浓度为30.9IU/mL时,DDimer PLUS试剂检测结果影响度为11.4%,INNOVANCE DDimer试剂检测结果影响度为11.68%,两种试剂检测结果影响度均随类风湿因子浓度增加而增大。结论 D-二聚体两种试剂均受类风湿因子干扰,类风湿因子浓度越高,干扰越严重。

免疫比浊法检测糖化血红蛋白A1c的性能评价

目的评价Roche公司第3代免疫比浊法检测糖化血红蛋白A1c(HbA1c)的性能。方法分析免疫比浊法检测HbA1c的精密度、线性,评价Hb、胎儿Hb(HbF)、三酰甘油(TG)、总胆红素(T-Bil)和不稳定HbA1c对HbA1c检测的影响、抗干扰能力及其与HPLC法测HbA1c结果的相关性;比较免疫比浊法检测HbA1c与高效液相色谱(HPLC)法的一致性。结果免疫比浊法检测HbA1c的变异系数(CV)均<2.5%。在4.7%～15.4%范围内,理论值与实测均值呈线性相关,r2值达0.999。Hb、HbF、T-Bil、TG水平分别在57～177 g/L、1.7%～11.7%、27～265μmol/L、3.2～9.85 mmol/L范围时,差异百分比均<5%;当HbF>13.5%时,差异百分比>5%。不稳定GHb(样本葡萄糖糖含量0～55.56 mmol/L)对HbA1c检测无影响。免疫比浊法(X)与高效液相色谱法(Y)相关性良好,Y=1.0188X-0.2271,r2=0.971 3。结论免疫比浊法检测HbA1c性能良好,适合临床应用。

免疫比浊法测定尿液游离血红蛋白的方法学研究

目的在全自动生化分析仪上建立胶乳增强免疫比浊法测定尿液游离血红蛋白的方法学,并进行方法性能评价。方法使用抗人血红蛋白HBA0抗体(8.5mg/ml),80nm聚苯乙烯羧基胶乳微球(estapor,纳米微球)等材料制备检测试剂;在东芝TBA120全自动生化仪上设置项目参数并进行校准;方法学性能评价包括准确度、精密度、线性范围、灵敏度、特异度等性能指标;建立该地区健康人群尿液游离血红蛋白的生物参考区间并验证。结果项目参数建立后定标通过,各测定点与拟合的校准曲线未呈现明显偏离,定标液浓度值与吸光度值经相关性分析,r=0.980 7,r^2=0.961 8;回收试验中低值样本S_低加入浓度为100mg/L和500mg/L的标准液后回收率分别为95.3%和102.7%,高值样本S_高加入浓度为100mg/L和500mg/L的标准液后回收率分别为104.2%和103.5%;精密度试验中低值样本S_低和高值样本S_高的总不精密度CV分别的6.52%和4.18%;线性范围为0~1 100mg/L;分析灵敏度为2.8mg/L;干扰试验显示当样本中游离胆红素、结合胆红素、维生素C、动物血红蛋白分别小于342μmol/L,342μmol/L,0.03g/L和500mg/L时对该试验结果无明显干扰,当乳糜浓度>870FTU时对该试验结果有显著干扰;该研究建立的健康人群生物参考区间男性为0~13.3mg/L、女性为0~17.1mg/L,两组参考区间经t检验无显著性差异(P>0.05)。结论研究表明该方法学性能具备检测临床尿液标本,解决了化学法潜血试验特异性不够的问题,并实现了数值化检测,该研究也为其他类型临床标本的检测提供了思路。