4周运动减肥对肥胖青少年血浆致动脉粥样硬化指数和脂酰辅酶A胆固醇酰基转移酶2的影响

目的:观察运动减肥对肥胖青少年血浆致动脉粥样硬化指数和脂酰辅酶A胆固醇酰基转移酶等动脉粥样硬化致病相关因子的影响。方法:以参加2011年上海巅峰运动减肥夏令营的30名肥胖青少年为对象,进行4周中小强度有氧运动为主结合适当饮食控制的减肥运动训练。分别于入营第一天和出营前一天进行身体形态及血液指标测试。结果:经过夏令营4周有氧运动训练,肥胖青少年体重、体脂率、BMI与运动前相比显著下降,空腹血清胰岛素、血脂水平与运动前相比均明显改善,血浆致动脉粥样硬化指数、脂酰辅酶A胆固醇酰基转移酶2水平显著降低。结论:4周有氧运动明显降低了肥胖青少年的肥胖程度和胰岛素水平,改善血脂代谢,在一定程度上降低了动脉粥样硬化发病的风险。

基于ACOX1-CPT2基因表达变化探讨肉苁蓉苯乙醇苷对高脂饮食诱导ApoE-/-小鼠肝组织脂质代谢的改善作用

目的:探讨肉苁蓉苯乙醇苷(phenylethanoid glycosides from Cistanche deserticola, PGCD)对高脂饮食诱导ApoE-/-小鼠肝组织脂质代谢的影响。方法:70只雄性ApoE-/-小鼠随机分为模型组(MOD)、阿伐他汀[20 mg/(kg·d)]+依折麦布[20 mg/(kg·d)]组(A+E)及肉苁蓉苯乙醇苷组[(250、500、1000 mg/(kg·d))](L-PGCD、M-PGCD、H-PGCD),均以高脂饮食(脂肪42%、胆固醇0.15%)饲养,另取14只雄性C57BL/6J小鼠喂食普通饲料作为正常对照组。12周末,检测各组小鼠血浆三酰甘油(TG)含量和谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性。取新鲜肝组织匀浆,ELISA方法检测脂肪酸合成酶(FAS)、长链脂酰辅酶A脱氢酶(LCAD)等脂质代谢相关酶的含量;检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)和过氧化脂质(LPO)含量;RT-PCR检测肝组织酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)和肉碱棕榈酰基转移酶2(CPT2)的基因表达。结果:与模型组相比,3个剂量PGCD均明显降低血清和肝脏TG水平,抑制血清ALT、AST的活性,剂量依赖性地减少FAS含量,显著提升LCAD含量和GSH-Px和SOD活性,并降低MDA和LPO含量。RT-PCR实验显示,PGCD显著升高肝组织ACOX1和CPT2 mRNA表达。结论:肉苁蓉苯乙醇苷能够通过调控肝组织ACOX1和CPT2基因表达改善肝组织脂质代谢,降低肝组织的脂质沉积。

2型糖尿病患者外周血单个核细胞过氧化物酶体脂肪酸β氧化活性变化的研究

目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者脂代谢紊乱状态下过氧化物酶体脂肪酸β氧化活性的变化。方法分析112例T2DM患者外周血单个核细胞过氧化物酶体脂肪酸β氧化活性、脂肪乙酰辅酶A氧化酶活性及其mRNA表达变化。测定FPG、TC、TG、HDL-C、LDL-C。结果T2DM患者过氧化物酶体脂肪酸β氧化代偿性加强,与正常对照组相比,脂肪乙酰辅酶A氧化酶活性、过氧化物酶体脂肪酸β氧化活性增加;并且T2DM组过氧化物酶体脂肪酸β氧化的活性与其血清TG、HDL-C、LDL-C之间有直线相关关系。结论脂肪酸β氧化和脂肪乙酰辅酶A氧化酶的活性增加,导致H2O2浓度的升高,这可能是糖尿病心血管并发症发病的原因之一。

高脂饮食大鼠肾脏HMGCS2表达及调控研究

目的探讨高脂饮食大鼠肾脏3-羟基-3甲基戊二酰辅酶A合成酶2(HMGCS2)表达及可能调控机制。方法断乳Wistar雄性大鼠27只分为3组:正常对照组(CON)、高脂组(HFG)、绿茶多酚(green tea polyphenols,GTPs)组(G)。CON组大鼠喂养普通饲料,HFG组及GTPs组给予高脂饲料,GTPs组同时自由摄食绿茶多酚浓度为1.6g/L水溶液。26周后测定空腹血糖(FPG)、血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)。免疫印迹法测定肾脏HMGCS2和Sirt3蛋白表达水平。结果与CON组比较,HFG组大鼠体重和脂肪系数升高,血清FPG、TC、TG、LDL-C/HDLC均升高,差异有统计学意义(P<0.05);与HFG组比较,GTPs降低大鼠体重和脂肪系数,差异有统计学意义(P<0.05),GTPs组血清FPG、TC、TG、LDL-C/HDLC均不同程度降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与CON组比较,肾脏组织HMGCS2的表达降低,差异有统计学意义(P<0.05);与HFG组比较,GTPs组增加肾脏HMGCS2的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。高脂饮食、正常饮食和GTPs干预后,大鼠肾脏组织Sirt3蛋白表达差异无统计学意义。结论高脂饮食可降低肾脏组织HMGCS2表达,绿茶多酚可逆转此效应;高脂饮食及绿茶多酚对肾脏组织HMGCS2表达的调控不经Sirt3途径。

Exendin-4对胰岛素抵抗人肝癌HepG_2细胞脂代谢相关因子基因表达的影响

目的:探讨Exendin-4(Ex-4)对胰岛素抵抗(IR)人肝癌HepG2细胞脂代谢相关因子表达的影响,阐明Ex-4改善IR的作用。方法:选取处于对数生长期的人肝癌HepG2细胞,采用高浓度胰岛素诱导HepG2细胞制备IR模型(HepG2-IR细胞),再将其分为对照组(不含胰岛素的HepG2细胞)、IR组(IR模型,即HepG2-IR细胞)和Ex-4组(IR模型中加入10nmol·L-1 Ex-4)。采用葡萄糖氧化酶法(GOD-POD)检测细胞中葡萄糖消耗量,采用油红O染色观察细胞形态及胞内脂滴形成情况,应用甘油三酯(TG)试剂盒检测细胞中TG水平,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测细胞中乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、脂肪酸合成酶(FAS)、固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)和载脂蛋白B100(apoB100)等脂代谢相关因子mRNA表达水平。结果:HepG2细胞建立IR模型后,与对照组比较,IR组HepG2-IR细胞葡萄糖消耗量明显降低(P<0.01);与IR组比较,Ex-4组HepG2-IR细胞葡萄糖消耗量明显增加(P<0.05)。油红O染色法,与对照组比较,IR组细胞含脂率明显升高(P<0.05);与IR组比较,Ex-4组细胞中含脂率明显降低(P<0.05)。与对照组比较,IR组细胞中TG水平明显升高(P<0.01);与IR组比较,Ex-4组细胞中TG水平明显降低(P<0.05)。qRT-PCR检测,与对照组比较,IR组细胞中ACC、FAS和SREBP-1cmRNA表达水平明显升高(P<0.01),apoB100mRNA表达水平明显降低(P<0.05);与IR组比较,Ex-4组细胞中ACC、FAS和SREBP-1cmRNA表达水平降低(P<0.05),apoB100mRNA表达水平升高(P<0.01)。结论:Ex-4可通过调节人肝癌HepG2细胞脂类代谢相关因子的表达进而改善IR。

IL-6上调SCD1表达对HepG2细胞脂质合成功能的影响

目的探讨IL-6对HepG2细胞硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD1)基因的影响及其SCD1基因表达的改变对细胞脂质合成的影响。方法应用rIL-6刺激HepG2细胞,检测细胞内脂质合成以及细胞SCD1基因水平变化。分别构建人SCD1真核表达质粒和小干扰(small interfering) RNA,转染HepG2细胞,观察改变SCD1水平后HepG2细胞脂代谢相关基因表达的变化以及细胞内脂质合成的变化。结果 rIL-6刺激HepG2细胞甘油三酯水平显著高于对照组(P<0.05);与空质粒组比,转染真核表达质粒细胞SCD1蛋白表达增加,细胞脂质合成相关基因SREBP1c和FASN相对水平增加1.35倍和1.27倍,脂质氧化代谢相关基因PPARα和ASCL3水平降低12.3%和13.5%;细胞甘油三酯水平显著升高(P<0.01),而转染small interfering RNA,再用rIL-6刺激HepG2细胞SCD1蛋白表达显著降低,细胞甘油三酯水平也显著降低(P<0.05),脂质合成相关基因SREBP1c和FASN水平显著下降了32.3%和51.9%,脂质分解相关基因PPARα相对水平也下降了80%(P<0.05),而ASCL3水平无显著变化(P=0.832)。结论 rIL-6通过上调HepG2细胞SCD1基因表达,引起细胞内脂质合成增加,导致甘油三酯含量增多。

PLIN2通过调控SREBP2促进RAW264.7巨噬细胞脂质蓄积

目的:探讨脂滴包被蛋白2(PLIN2)是否通过调控固醇调节元件结合蛋白2(SREBP2)影响小鼠RAW264.7巨噬细胞中脂质蓄积。方法:采用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)处理RAW264.7巨噬细胞不同时间(0、6、12、24和48 h),Western blot检测PLIN2和SREBP2蛋白表达水平;过表达或敲减PLIN2,RT-qPCR和Western blot检测SREBP2、3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)和葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达水平,油红O染色检测细胞脂质蓄积情况;采用免疫荧光和氧化酶法分别检测PLIN2对SREBP2核转位和细胞内游离胆固醇(FC)的影响;采用内质网应激(ERS)抑制剂4-苯基丁酸(4-PBA)处理细胞,Western blot和RT-qPCR检测GRP78、SREBP2和HMGCR表达水平。结果:ox-LDL处理24 h后,PLIN2和SREBP2表达水平显著增加(P<0.05)。过表达PLIN2能上调SREBP2和HMGCR表达,增加细胞内FC水平(P<0.05),促进细胞内脂质蓄积;敲减PLIN2则相反。此外,过表达PLIN2能增加GRP78表达水平(P<0.05),说明过表达能促进细胞ERS;同时,过表达PLIN2能激活SREBP2并促进其核转位;ERS抑制剂4-PBA可显著抑制SREBP2及HMGCR蛋白表达水平的上升(P<0.05)。结论:PLIN2通过上调SREBP2表达,从而促进RAW264.7巨噬细胞脂质蓄积。

PLIN2通过Rab18上调ACSL3表达促进巨噬细胞脂质蓄积

[目的]探讨脂滴包被蛋白2(PLIN2)增加巨噬细胞内脂质蓄积的机制。[方法]将实验分为氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)组、不同PLIN2表达组、不同活性Rab18组,测定高表达和沉默表达PLIN2巨噬细胞中的Rab18和脂酰辅酶A长链合成酶3(ACSL3)蛋白水平,不同活性Rab18的高表达PLIN2巨噬细胞中的PLIN2、Rab18、ACSL3蛋白表达水平。采用Western blot检测蛋白表达水平,采用免疫荧光观察细胞内相关蛋白定位情况,采用油红O染色观察细胞内脂质蓄积情况。[结果]高表达PLIN2的细胞中Rab18、ACSL3表达水平明显增加(P<0.05),且PLIN2与Rab18、ACSL3在细胞内存在共定位的现象。转染Rab18显性突变体Q67L质粒(Rab18活性增强)后的PLIN2高表达巨噬细胞中ACSL3表达水平明显升高(P<0.05),细胞内脂滴的数量也明显增多(P<0.05)。[结论] PLIN2可通过Rab18上调ACSL3表达促进巨噬细胞脂质蓄积。

血清LPS、LOXL2与阵发性心房颤动患者射频导管消融术后复发的相关性

目的探讨血清脂多糖(LPS)、赖氨酰氧化酶样蛋白2(LOXL2)与阵发性心房颤动(PAF)患者射频导管消融(RFCA)术后复发的相关性。方法选取2020年5月—2022年5月在内蒙古自治区人民医院急诊心血管内科行RFCA术的PAF患者197例(PAF组),同期医院体检健康者78例(健康对照组)。PAF组患者RFCA术后随访1年,根据是否复发分为复发亚组63例和未复发亚组134例。采用酶联免疫吸附法检测血清LPS、LOXL2水平;多因素Logistic回归分析PAF患者RFCA术后复发的因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清LPS、LOXL2水平对RFCA术后复发的预测价值。结果与健康对照组比较,PAF组血清LPS、LOXL2水平升高(Z=5.575、6.903,P均<0.001)。197例PAF患者RFCA术后1年复发率为31.98%(63/197)。与未复发亚组比较,复发亚组血清LPS、LOXL2水平升高(Z=6.431、6.543,P均<0.001)。病程较长、左心房内径(LAD)增加、LPS升高、LOXL2升高为PAF患者RFCA术后复发的独立危险因素[OR(95%CI)=2.335(1.450~3.761)、1.289(1.049~1.586)、1.025(1.014~1.035)、1.004(1.002~1.006)];血清LPS、LOXL2及二者联合预测的AUC为0.784、0.789、0.859,二者联合的AUC大于血清LPS、LOXL2水平单独预测的AUC(Z/P=2.549/0.011、3.000/0.003)。结论PAF患者血清LPS、LOXL2水平升高,是PAF患者RFCA术后复发的独立危险因素,血清LPS、LOXL2水平联合检测对PAF患者RFCA术后复发有较高的预测价值。

ERK1/2/PPARα/SCAD信号途径对生理性和病理性心肌肥大的调控

目的:研究ERK1/2/PPARα/SCAD(短链脂酰辅酶A脱氢酶)信号途径对生理性和病理性心肌肥大调控的不同机制,探索病理性心肌肥大治疗的新靶点。方法:分别以胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor 1,IGF-1)和苯肾上腺素(phenylephrine,PE)刺激心肌细胞,复制生理性和病理性心肌肥大模型,检测心肌细胞表面积,p-ERK1/2和PPARα蛋白表达变化,SCAD mRNA、蛋白表达和酶活性变化,心肌细胞游离脂肪酸含量变化。结果:与对照组比较,PE和IGF-1刺激后心肌细胞表面积均显著增大。与对照组相比,IGF-1刺激的心肌细胞SCAD mRNA和蛋白表达均上调,酶活性显著增高,游离脂肪酸含量明显减少,且PPARαmRNA和蛋白表达均上调,p-ERK1/2的蛋白表达显著下调;PE刺激的心肌细胞SCAD mRNA和蛋白表达均下调,酶活性显著降低,游离脂肪酸含量明显增加,且PPARαmRNA和蛋白表达均下调,p-ERK1/2蛋白表达显著上调。结论:p-ERK1/2/PPARα/SCAD在生理性和病理性心肌肥大中呈现出不一致的变化趋势,表明ERK1/2/PPARα/SCAD信号途径对2种不同肌肥大的调控作用不同。SCAD可能作为2种不同心肌肥大的分子标志物及病理性心肌肥大的潜在治疗靶点。

PCSK9及IDOL在姜黄素促进HepG2细胞摄取LDL-C中的作用

目的从分子水平探讨姜黄素的降脂机制,为姜黄素作为降脂药物的临床开发提供科学依据。方法本研究运用油红O染色、酶法测定细胞内胆固醇含量,荧光染色检测细胞胆固醇摄取,RT-Q-PCR及Western blot检测姜黄素对HepG2细胞内胆固醇代谢相关因子在RNA和蛋白水平的表达。结果姜黄素组的HepG2细胞内红色脂滴明显增多,且TC及FC含量增高。Di I标记LDL,姜黄素组HepG2细胞橙红色荧光高于对照组。姜黄素能升高SREBP2和LDLR的mRNA和蛋白水平的表达;降低PCSK9蛋白成熟体及IDOL蛋白表达。结论姜黄素可能通过下调PCSK9及IDOL的表达,进而减少LDLR降解,促进HepG2细胞摄取LDL-C。

辛伐他汀抑制肺动脉高压大鼠肺动脉内COX-2的表达

目的:探讨3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMG-COA)抑制剂辛伐他汀对肺动脉高压(PAH)大鼠环氧合酶(COX-2)的影响。方法:雄性SD大鼠30只,随机分为正常对照组、PAH模型组和辛伐他汀干预组,每组10只。用PM-8000型多参数监护仪及Elastin Van Gieson染色法,分别测定各组大鼠的平均肺动脉压力及肺小动脉新生内膜增殖度和平均血管阻塞计分(VOS)的改变。用免疫组化染色法和荧光定量PCR法,测定肺组织中的COX-2在蛋白和基因的水平上表达的差异。结果:PAH模型组大鼠的平均肺动脉压力、肺小动脉新生内膜增殖度和VOS的改变,均较正常对照组显著增加(P<0.05),其COX-2在蛋白和基因的水平上的表达都明显高于正常对照组(P<0.05)。辛伐他汀干预后,大鼠的平均肺动脉压力、肺小动脉新生内膜增殖度和VOS,均较PAH模型组显著减少(P<0.05),COX-2在蛋白和基因的水平上的表达都明显低于PAH模型组(P<0.05)。结论:辛伐他汀可抑制肺动脉内COX-2的表达来抑制PAH形成。

甲醛对HepG2细胞游离胆固醇代谢的影响

目的:研究甲醛(FA)对人肝癌细胞株HepG2细胞游离胆固醇(FC)含量的影响及其作用机制。方法:分别采用0.004、0.02、0.1 mmol/L FA处理人肝癌细胞株HepG2细胞24和48 h,以完全培养基为阴性对照,过氧化物酶法测定HepG2细胞内FC含量;采用Western blot法检测HepG2细胞固醇调节元件结合蛋白-2(SREBP-2)、羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCR)、胆固醇酰基转移酶(ACAT)和低密度脂蛋白受体(LDLR)的蛋白表达水平。结果:与阴性对照组相比,各浓度的FA染毒24 h或0.02和0.1 mmol/L FA染毒48 h后,HepG2细胞内FC含量均明显增加(P均<0.05);FA染毒24和48 h后细胞内HMGCR蛋白表达水平均明显增加(P<0.05);FA染毒24 h后,ACAT和LDLR表达水平均明显降低(P均<0.05);FA染毒48 h,LDLR蛋白表达水平明显降低(P<0.05),ACAT蛋白表达水平在0.02和0.1 mmol/L FA组明显降低(P<0.05)。结论:甲醛染毒可使HepG2细胞内FC含量增加,可能与胆固醇的从头合成增加和胆固醇酯化水平降低有关。

乙酰辅酶A羧化酶2表达下调对高糖培养的人肾小管上皮细胞脂质沉积和间充质转化的影响

目的探讨乙酰辅酶A羧化酶2(ACC2)表达下调对高糖培养的人肾小管上皮细胞(HKC)脂质沉积及小管上皮细胞间充质转化(EMT)的影响及可能机制。方法构建ACC2基因特异性的短发夹双链RNA(shRNA)慢病毒感染HKC,将其分为5组:正常糖组(5.5 mmol/L葡萄糖,NG组)、高糖组(30 mmol/L葡萄糖,HG组)、高渗对照组(5 mmol/L葡萄糖+25 mmol/L甘露醇,HO组)、ACC2干扰组(感染含ACC2干扰序列慢病毒,ACC2-shRNA组)、干扰对照组(感染携带绿色萤光蛋白的阴性对照慢病毒,NC-shRNA组),分别处理96 h,Western blotting检测ACC2干扰效率及E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,油红O染色检测细胞内脂质沉积,光镜下观察细胞形态变化。结果与HO组相比,HG组HKC细胞内脂质沉积增加,细胞拉长,E-cadherin表达减少,α-SMA表达增多(P<0.05);干扰ACC2基因后,高糖诱导的细胞内脂质沉积减少,细胞形态改善,E-cadherin和α-SMA表达趋于正常。结论下调ACC2表达可抑制高糖诱导的HKC脂质沉积和小管上皮细胞EMT。

脂肪变性肝细胞胆固醇代谢及合成相关基因的表达

目的探讨脂肪变性肝细胞胆固醇代谢及合成相关基因mRNA表达的变化。方法以软脂酸诱导正常成人肝细胞株L-02脂肪变性,建立肝细胞脂肪变性模型,分别于实验第3、6天收集细胞,同期设不含软脂酸培养的细胞作对照。试剂盒检测细胞内甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)含量,RT-PCR法检测固醇调节元件结合蛋白2(SREBP-2)及其靶基因羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCR)、低密度脂蛋白受体(LDLR)mRNA表达。结果软脂酸诱导第3天即可产生肝细胞脂肪变性,第6天脂肪变性加重。随造模时间延长,模型组细胞内TG、TC含量逐渐增多,SREBP-2、HMGCR、LDLR mRNA表达逐渐增强;第3天和第6天细胞内TG含量均显著高于对照组(P<0.05),第6天细胞内TC含量显著高于对照组(P<0.05);第3天和第6天HMGCR、LDLR mRNA表达显著高于对照组(P<0.05);第6天SREBP-2 mRNA表达显著高于对照组(P<0.05)。结论脂肪变性肝细胞内存在胆固醇积聚,其机制可能是胆固醇合成相关基因表达上调。

羊ACOX2基因功能的研究进展

ACOX2基因(Acyl-CoA oxidase 2)是脂酰辅酶A氧化酶2的编码基因,属于酰基辅酶A氧化酶(Acyl-CoA oxidase,ACOX)家族。该基因家族有ACOX1、ACOX2、ACOX3 3种亚型,均参与脂肪酸代谢过程。ACOX2基因在脂肪酸代谢途径中有高表达,是脂肪酸代谢过程中重要的调控基因。该基因在过氧化物酶体中含量最多,生物过程表现为在过氧化物酶体中将长支链脂肪酸氧化成短链脂肪酸,且通过氧化胆汁酸的辅酶A酯中间体,催化胆固醇转化为胆汁酸,从而影响脂肪酸含量。ACOX2基因在心脏、肝脏和肾脏中表达量最丰富。目前,科学家已研究出小鼠和人类的外显子编码区,在羊的外显子研究中只有预测结果。

茵陈五苓散含药血清对LO2细胞株LDL-R及HMG-CoA还原酶表达的影响

目的探讨茵陈五苓散含药血清调节血脂的可能机制并筛选其最佳给药浓度及作用时间。方法将40只雄性SD大鼠随机分为菌陈五苓散低、中、高剂量组,辛伐他汀组及空白组,每组8只。菌陈五苓散低、中、高剂量组分别给予4、8、16 g/(kg·d)菌陈五苓散;辛伐他汀组给予1 mg/(kg·d)辛伐他汀片;空白组给予20 mg/(kg·d)生理盐水,各组大鼠每天灌胃2次,连续3天,制备含药血清。取对数生长期的LO2细胞株经过24 h孵化贴壁后随机分为茵陈五苓散低、中、高剂量组,辛伐他汀组及空白组,每组各18孔,每孔分别加入受试血清10μl。同浓度的18孔再分为3组,每组6孔,分别培养24、48、72 h,实时荧光定量法检测各组细胞的低密度脂蛋白受体(LDL-R)mRNA及3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A(HMG-Co A)还原酶mRNA表达情况。结果与空白组比较,茵陈五苓散各剂量组及辛伐他汀组各时间点LDL-R mRNA表达均明显升高,HMG-Co A还原酶mRNA表达均明显下降(P<0.05或P<0.01),其中茵陈五苓散在中浓度、干预48 h的条件下LDL-R mRNA表达达高峰、HMG-Co A还原酶mRNA表达最低。结论茵陈五苓散含药血清调节血脂的机制可能与其能明显上调LDL-R表达、下调HMG-Co A还原酶表达有关,在药物浓度为中浓度、干预时间为48 h时效果最佳。

利拉鲁肽对糖尿病合并脂肪肝大鼠的脂代谢相关基因表达的影响

目的探讨长效人胰升糖素样肽-1(GLP-1)类似物-利拉鲁肽对2型糖尿病(T2DM)合并非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠的脂代谢相关基因mRNA表达的影响。方法健康雄性8周龄SD大鼠36只,按随机数字表法分为三组(每组12只):正常对照组(NC组)、模型组(MC组)及GLP组。NC组喂以常规饲料;MC组喂以高脂高糖饲料,并一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ,30 mg/kg);GLP组喂以高脂高糖饲料,并一次性腹腔注射STZ(30 mg/kg)及腹部皮下注射利拉鲁肽(0.4 mg/kg,1次/d),三组时限均为4周;MC组和GLP组均在一次性注射STZ 4周后检测血糖,判断是否成功建立T2DM模型。取肝组织病理切片,HE染色后光镜下观察肝细胞脂肪变性情况。采用实时荧光定量PCR方法检测肝脏组织脂代谢相关靶基因-脂肪酸合酶(FAS)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC-a)、载脂蛋白β100(apoβ100)的mRNA表达,并检测糖脂代谢相关生化指标。结果 MC组及GLP组各成功建立T2DM模型大鼠11只及12只。NC组未见肝细胞脂肪变性,MC组、GLP组均见明显肝细胞脂肪变性,但GLP组程度明显低于MC组。GLP组大鼠血浆空腹血糖(FBG)和空腹胰岛素(FINS)水平,血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和游离脂肪酸(FFAs)水平均较MC组明显降低,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平则较MC组明显升高(P均<0.05);与NC组比较,MC组与GLP组大鼠肝组织FAS、ACC-a mRNA相对表达量均显著升高(P均<0.01),而GLP组上述指标明显低于MC组(P均<0.01);MC组与GLP组大鼠肝组织apoβ100相对表达量均低于NC组(P均<0.01),但GLP组高于MC组(P<0.01)。结论利拉鲁肽可能通过下调脂代谢相关基因的表达,从而改善脂质代谢紊乱,减缓NAFLD发病的进程。

基于AMPK/ACC信号通路探讨夏枯草提取物调节ZDF大鼠脂代谢的机制

目的:观察夏枯草提取物(Prunellae Spica extracts,PS)对Zucker糖尿病肥胖(ZDF)模型大鼠肝腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/乙酰辅酶A羧化酶(ACC)信号通路的影响以探讨其改善大鼠脂代谢的机制。方法:32只雄性ZDF(fa/fa)2型糖尿病模型大鼠随机分为模型组、二甲双胍组(180 mg·kg^(-1)·d^(-1))和PS低、高剂量组(12.25,24.5 mg·kg^(-1)·d^(-1)),每组8只。8只Zuker Lean(ZL)大鼠设为正常组。于给药0,4,8周测体质量及空腹血糖。给药8周后,腹主动脉取血,离心抽取血清-20℃冻存,取肝组织-80℃冻存,及4%多聚甲醛固定,石蜡包埋。放射免疫法测血清甘油三酯(TG),胆固醇(CHO),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及游离脂肪酸(FFA)。油红O染色观察肝细胞脂滴含量。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肝脏AMPKα_2及ACC mRNA表达。免疫组化法测肝细胞磷酸化(p)-AMPKα蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清TG,CHO,LDL-C及FFA升高,肝细胞脂滴增加,肝AMPKα_2 mRNA表达减少而ACC1和ACC2 mRNA表达增加,p-AMPKα蛋白表达减少(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,PS低、高剂量组可明显降低ZDF大鼠血清TG,CHO,LDL-C及FFA,减少肝细胞脂滴,上调肝AMPKα_2 mRNA且下调ACC1和ACC2 mRNA表达,上调p-AMPKα蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论:PS能有效改善2型糖尿病ZDF大鼠肝脏脂代谢紊乱,其机制可能与调节肝AMPK/ACC信号通路有关。

胆固醇在高脂高胆固醇诱导非酒精性脂肪性肝炎发生发展过程中的动态作用

目的探讨胆固醇在高脂高胆固醇诱导的非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)发生发展过程中的动态作用。方法将SD大鼠随机分为CON组(正常饮食)、HFC0组(20%脂肪)、HFC1组(20%脂肪+1%胆固醇)、HFC2组(20%脂肪+2%胆固醇)及HFC5组(20%脂肪+5%胆固醇)。饲喂第4、6、8及12周末,采血并取肝脏组织;采用油酸(oleic acid,OA)及OA+低密度脂蛋白-胆固醇(low-density lipoprotein-cholesterol,LDL-C)诱导人肝脏正常细胞(HL-7702)5 d后,构建NASH模型,同时以RPMI1640培养基(含10%FBS)为对照组。分别检测大鼠血浆及HL-7702细胞培养液中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转氨酶(AST)的含量,大鼠肝脏组织及HL-7702细胞中总胆固醇(total cholesterol,TC)及甘油三酯(triglyceride,TG)的含量;HE及Masson染色观察肝脏组织病理改变;油红O及菲律宾菌素染色观察HL-7702细胞内脂滴及胆固醇含量;Western blot法检测活性n-固醇调节元件结合蛋白-2(n-sterol regulatory element binding protein 2,n-SREBP-2)、低密度脂蛋白受体(low-density lipoproteins receptors,LDLR)及3-羟基3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA reductase,HMGCR)的蛋白表达水平。结果动物水平:12周末,与CON组比较,HFC2组、HFC5组血浆中ALT、AST及肝脏组织中TC、TG含量均显著升高(P均<0.05),肝细胞脂肪变性、气球样变性及纤维化病变明显,HFC2组、HFC5组大鼠NASH诱导成功;经Western blot分析,4、6及8周末,HFC2组、HFC5组较CON组LDLR蛋白表达水平均显著升高(P均<0.05),12周末,HFC5组较CON组LDLR蛋白表达水平显著降低(P<0.05);4、6及8周末,各组n-SREBP-2蛋白表达水平与CON组比较差异均无统计学意义(P均>0.05),12周末,HFC2组、HFC5组较CON组n-SREBP-2蛋白表达水平均显著升高(P均<0.05);4、6及12周末各组HMGCR蛋白表达水平与CON组比较差异均无统计学意义(P均>0.05),8周末,HFC5组较CON组HMGCR蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。细胞水平:OA+LDL-C组较对照组及OA组细胞内胆固醇含量、n-SREBP-2及HMGCR蛋白表达水平均显著升高(P均<0.05);OA组及OA+LDL-C组较对照组LDLR蛋白表达水平均显著降低(P均<0.05)。结论胆固醇摄入量和摄入时间的长短与NASH肝损伤呈正相关;胆固醇可诱导肝细胞高表达LDLR,促使胆固醇进入肝脏增加,抑制HMGCR调控的内源性胆固醇合成;随着肝内胆固醇堆积增多,肝细胞LDLR表达减少,使肝内胆固醇相对不足,反馈性调节n-SREBP-2及HMGCR表达升高,打破肝脏胆固醇代谢稳态,促进了NASH的发生发展。