石斛兰转ACS反义基因抗性原球茎及转化植株的筛选与鉴定

该试验就石斛兰转化ACS(1-氨基环丙烷-1-羧酸合成酶)反义基因的不同筛选方法和筛选处理对抗性原球茎筛选的影响,以及石斛兰转基因植株的再生与鉴定进行研究。结果表明:(1)石斛兰原球茎经带有gus报告基因和ACS反义基因的农杆菌LBA4404侵染共培养5d后除菌,采用逐渐提高选择压浓度的延迟筛选,并在低选择压浓度下切割而高选择压浓度下不切割的处理方式为抗性原球茎的最佳筛选途径,抗性原球茎获得率可达14.97%。(2)抗性原球茎繁殖时应逐渐降低选择压浓度,且在低选择压浓度下进行切割处理,繁殖倍数达到1.15倍,且原球茎生长势好。(3)抗性原球茎在1/2MS+0.5mg/L 6-BA培养基中的分化率达到73.85%;107株无根小苗培养于1/2MS+1.0mg/L NAA+50.0mg/L Km(卡那霉素)+100.0mg/L Cef(头孢霉素)培养基中进行生根培养,共获得了13株具有卡那霉素抗性的转化植株,转化效率达到12.15%。(4)转化植株经报告基因产物GUS组织化学检测和gus的PCR检测,证实带ACS反义基因的T-DNA已整合进石斛兰基因组中,且转基因植株在形态上与未转基因植株无明显差别,3株转基因植株移栽2个月后均已成活。

根癌农杆菌介导ACS反义基因转化香蕉的研究

以香蕉（Musa spp．）品种‘天宝蕉’（Musa spp．,AAA类群）为试材，对以根癌农杆菌介导法的香蕉遗传转化体系进行较全面的研究，并以该系统进行了ACS反义基因转化香蕉的研究。结果表明：不经预培养的香蕉茎尖横切薄片，侵染前用附加0．1mg／L甘露醇的高渗固体培养基前处理4h，农杆菌重悬液浓度为0D。在1．0左右，重悬液中含100g／L蔗糖，接菌时间为10～15min，于26℃黑暗条件下共培养4d，共培养培养基pH值为5．8是较为适合的转化条件：采用附加100mg／L卡那霉素、2mg／LAgNO，筛选培养基对共培养后的香蕉横切薄片进行筛选，共获得5个转ACS反义基因的抗性芽系；经GUS组织化学法及PCR检测，gus基因已整合进香蕉基因组．