铁死亡通路中ACSL4、LPCAT3蛋白表达在特发性炎性肌病中的研究

在近些年的细胞程序性死亡研究中,发现细胞死亡与铁死亡存在密切的相关性,即铁死亡是细胞内脂质氧化产物的过量积累,造成细胞发生不可逆的损伤,最终导致细胞死亡。研究发现,组织细胞中的多种生物化学过程均与铁死亡存在一定的关联。疾病方面涉及风湿免疫疾病、肿瘤、缺血再灌注损伤等。目前,铁死亡通路下的ACSL4、LPCAT3蛋白表达与特发性炎性肌病发生的相关性还鲜有研究报道,深入研究该通路有助于更加准确掌握疾病的发生与治疗。

调中化湿汤调控ACSL4/LPCAT3/POR通路对GERD大鼠食管细胞铁死亡的效应机制

目的探讨调中化湿汤调控ACSL4/LPCAT3/POR通路对胃食管反流病(Gastroesophageal Reflux Disease,GERD)模型大鼠食管细胞铁死亡的效应机制。方法将34只SPF级SD大鼠采用随机数字表法,随机分为假手术组、模型组、西药组、中药组,每组8只。除假手术组,其余组均构建GERD模型大鼠。西药组予以枸橼酸莫沙必利分散片联合兰索拉唑肠溶片灌胃,中药组予以调中化湿汤中剂量为最佳有效剂量灌胃,疗程持续2周。光镜下观察食管组织的病理结构改变及进行食管黏膜损伤指数评分,免疫组化法(Immunohistochemistry,IHC)及免疫印迹法(Western Blot,WB)观察食管下段组织ACSL4、LPCAT3、POR蛋白表达。结果GERD模型大鼠精神不振,活动减弱,口角偶见食物残渣,光镜下观察食管鳞状上皮基底细胞中度增生,基底细胞层增厚,固有层乳头延长,大量炎性细胞浸润,食管黏膜损伤指数评分增加(P<0.01)。经西药及调中化湿汤干预后大鼠毛发光亮,无精神不振,体重稍增加,食管黏膜结构基本恢复正常,鳞状上皮修复完整,黏膜固有层未见明显的炎症细胞浸润,食管黏膜损伤指数评分降低(P<0.01)。WB结果显示,与假手术组比较,模型组ACSL4、LPCAT3蛋白表达降低(P<0.01),POR蛋白表达下降(P<0.05);与模型组相比较,西药组及中药组ACSL4、LPCAT3蛋白表达显著升高(P<0.01),西药组POR蛋白表达升高(P<0.05),中药组POR蛋白表达上升明显(P<0.01);中、西药组组间比较,西药组ACSL4蛋白表达高于中药组(P<0.01),西药组LPCAT3蛋白表达高于中药组(P<0.05),西药组POR蛋白表达低于中药组(P<0.05)。IHC结果示,与假手术组比较,模型组ACSL4、LPCAT3蛋白表达降低(P<0.05),POR蛋白表达下降(P>0.05);与模型组相比,西药组ACSL4、LPCAT3与中药组POR蛋白表达均升高(P<0.01),西药组POR与中药组ACSL4、LPCAT3蛋白表达上升(P>0.05);中、西药组比较,西药组ACSL4蛋白表达高于中药组(P<0.01),西药组LPCAT3蛋白表达高于中药组(P<0.05),西药组POR蛋白表达低于中药组(P<0.01)。结论GERD发病与ACSL4/LPCAT3/POR通路介导的食管细胞铁死亡减少密切相关;枸橼酸莫沙必利分散片联合兰索拉唑肠溶片和调中化湿汤均可有效修复GERD模型大鼠食管黏膜损伤,改善炎性浸润,其机制可能与激活ACSL4/LPCAT3/POR通路,促进食管细胞铁死亡相关。

幽门螺杆菌感染对胃上皮细胞铁死亡相关脂代谢蛋白表达及脂质过氧化水平的影响

目的探究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染对胃上皮细胞和C57BL/6小鼠胃组织中铁死亡相关脂代谢蛋白ACSL4、LPCAT3表达及对脂质过氧化物降解产物丙二醛(MDA)和4-羟基壬烯醛(4-HNE)水平的影响。方法用HpGZ7和Hp26695菌株感染正常胃上皮GES-1细胞和胃癌AGS细胞,感染复数为50∶1,6 h、24 h、48 h后分别收集细胞总蛋白和细胞裂解液,Western blot检测ACSL4和LPCAT3的蛋白表达,试剂盒检测细胞裂解液MDA、4-HNE水平。用Hp灌胃感染C57BL/6小鼠1、3、6月,取胃黏膜组织并制备切片,免疫组织化学染色检测ACSL4、LPCAT3蛋白的表达。结果与未感染组比较,Hp感染GES-1(F值分别为18.82、13.07,4.28、13.03)和AGS(F值分别为14.51、25.88,17.90、16.62)细胞ACSL4、LPCAT3蛋白表达水平均增加,并随着感染时间的延长表达呈上升趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。与未感染对照组比较,Hp感染C57BL/6小鼠胃组织中ACSL4、LPCAT3的表达水平均显著升高,其中LPCAT3表达水平增加更显著(F值分别为27.11,103.62,P<0.05)。MDA含量均高于未感染组(Hp感染AGS细胞6 h、24 h、48 h后分别为0.27±0.06、1.13±0.14、0.83±0.12,0.56±0.13、0.86±0.11、0.72±0.16。Hp感染GES-1细胞6h、24 h、48 h后分别为0.22±0.08、0.29±0.09、0.80±0.08,0.17±0.06、0.40±0.08、0.63±0.09),差异有统计学意义(F值分别为27.29、10.56,30.85、18.42,P<0.05)。4-HNE含量均高于未感染组(Hp感染AGS细胞6 h、24 h、48 h后分别为0.12±0.03、0.20±0.06、0.25±0.04,0.06±0.02、0.21±0.03、0.30±0.04。Hp感染GES-1细胞6 h、24 h、48 h后分别为0.23±0.06、0.36±0.06、0.63±0.09,0.19±0.04、0.19±0.05、0.41±0.07),差异有统计学意义(F值分别为7.48、32.31,16.83、12.55,P<0.05)。结论Hp感染可引起胃上皮细胞和C57BL/6小鼠胃组织中铁死亡相关脂代谢蛋白ACSL4、LPCAT3表达增加,细胞内脂质过氧化物降解产物MDA与4-HNE积累,提示Hp可能通过影响其感染细胞内的脂代谢水平,诱导胃上皮细胞发生铁死亡。