长链非编码RNA CCAT1对人乳头状甲状腺癌侵袭和迁移能力的影响

目的检测长链非编码RNA CCAT1在人乳头状甲状腺癌中的表达,并观察下调表达CCAT1对人乳头状甲状腺癌细胞侵袭和迁移能力的影响。方法检测人正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1及人乳头状甲状腺癌细胞TPC-1中CCAT1的水平,在TPC-1细胞中转染CCAT1 siRNA质粒,利用Transwell小室及划痕实验观察下调表达CCAT1对细胞侵袭和迁移能力的影响,通过Western blot检测BRAF、MUC15、RKIP蛋白的变化。结果人乳头状甲状腺癌细胞TPC-1中CCAT1的水平明显高于人正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1;在TPC-1细胞中下调表达CCAT1后能够明显抑制细胞的侵袭和迁移能力;Transwell侵袭实验和迁移实验显示下调表达CCAT1组TPC-1细胞的穿膜数与对照组比较明显减少。划痕实验中下调表达CCAT1后细胞间距较对照组明显增大,提示细胞运动能力减弱。同时下调表达CCAT1可明显降低细胞中BRAF、MUC15的表达,增高RKIP蛋白的表达。结论人乳头状甲状腺癌中长链非编码RNA CCAT1较正常甲状腺细胞明显升高;在乳头状甲状腺癌中下调表达CCAT1可抑制细胞的侵袭、迁移运动能力,并且可能通过影响BRAF、MUC15、RKIP蛋白的表达发挥上述功能。

NSCLC患者癌组织Napsin A、TTF-1、ALK、Ki-67表达与临床病理的关系及免疫组化检测意义

目的分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者癌组织新天门冬氨酸蛋白酶A(Napsin A)、甲状腺转录因子-1(TTF-1)、间变性淋巴瘤激酶(ALK)、Ki-67抗原(Ki-67)表达与临床病理的关系及免疫组化检测意义。方法回顾性收集2020年5月至2022年5月中山市人民医院收治的62例NSCLC患者临床资料,所有患者均进行手术治疗,收集患者手术切除标本进行免疫组化病理检查。统计NSCLC患者癌组织和癌旁组织中Napsin A、TTF-1、ALK、Ki-67阳性表达情况及不同病理特征,NSCLC患者癌组织Napsin A、TTF-1、ALK、Ki-67阳性表达情况,采用Spearman相关法分析NSCLC患者癌组织Napsin A、TTF-1、ALK、Ki-67表达的相关性。结果NSCLC患者癌组织中Napsin A、TTF-1、ALK、Ki-67阳性表达率(79.03%、70.97%、17.74%、82.26%)高于癌旁组织(16.13%、22.58%、0.00%、0.00%,P<0.05)。鳞癌、高/中分化、无淋巴结转移、无远处转移NSCLC患者癌组织Napsin A阳性表达率低于腺癌、低分化、淋巴结转移、远处转移患者(P<0.05);低分化、临床分期Ⅲ/Ⅳ期、淋巴结转移、远处转移NSCLC患者癌组织TTF-1阳性表达率高于高/中分化、临床分期Ⅰ/Ⅱ期、无淋巴结转移、无远处转移患者(P<0.05);鳞癌、低分化、临床分期Ⅲ/Ⅳ期NSCLC患者癌组织ALK阳性表达率高于腺癌、高/中分化、临床分期Ⅰ/Ⅱ期患者(P<0.05);低分化、临床分期Ⅲ/Ⅳ期、淋巴结转移、远处转移NSCLC患者癌组织Ki-67表达率高于高分化、临床分期Ⅰ/Ⅱ期、无淋巴结转移、无远处转移患者(P<0.05)。Spearman相关法分析结果显示,NSCLC患者癌组织Napsin A表达与ALK表达呈显著正相关关系(r=0.589,P<0.05),TTF-1表达与ALK、Ki-67表达呈显著正相关关系(r=0.564、0.602,P<0.05)。结论NSCLC的发生及其病情进展可引起Napsin A、TTF-1、ALK、Ki-67表达升高,患者癌组织中Napsin A、ALK及TTF-1、ALK、Ki-67表达具有一定相关性,其可能在NSCLC的发生和发展中相互作用。

昆布多糖对人乳头状甲状腺癌细胞TPC-1生长信号转导的影响

目的探讨昆布多糖对人乳头状甲状腺癌细胞TPC-1生长信号转导影响研究。方法选用TPC-1人乳头状甲状腺癌细胞株,分别采用相应药物进行处理。采用噻唑兰(MTT)染色法检测昆布多糖对TPC-1细胞生长的抑制作用,采用流式细胞术分析昆布多糖对TPC-1细胞凋亡及细胞周期比例的影响,采用蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测各组TPC-1细胞促甲状腺素受体(TSHR)、磷脂酶C-β3(PLC-β3)、蛋白激酶Cα(PKCα)蛋白表达水平。结果干预24h、48h、72h后,与对照组比较,昆布多糖0.4 g/L、0.8 g/L、1.6 g/L、2.0 g/L组TPC-1细胞生长抑制率较高,且昆布多糖0.4 g/L组<0.8 g/L组<1.6 g/L组及2.0 g/L组,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,昆布多糖0.4 g/L、0.8 g/L、1.6 g/L组TPC-1细胞凋亡率较高,G2/M期细胞比例较高,且昆布多糖0.4 g/L组<0.8 g/L组<1.6 g/L组,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,昆布多糖0.4 g/L、0.8 g/L、1.6 g/L组TSHR、PLC-β3、PKCα蛋白表达水平较低,且昆布多糖0.4 g/L组>0.8 g/L组>1.6 g/L组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论昆布多糖能剂量依赖性抑制人乳头状甲状腺癌细胞TPC-1生长,使细胞阻滞于G2期,促进细胞凋亡,其作用可能与抑制TSHR-PLC-β3-PKCα生长信号通路转导有关。

荷瘤裸鼠肌肉内基因电转染对移植瘤的作用

目的 以人甲状腺未分化癌细胞系TA K建立的人甲状腺未分化癌裸鼠皮下移植模型为对象 ,研究裸鼠肌肉内电转染对移植瘤的作用。方法 将皮下移植肿瘤的裸鼠分为 5组 :空白对照组、pcDNA 3质粒肌肉电转染组、TIMP 3质粒肌肉注射组、TIMP 3质粒肌肉电转染组及TIMP 3质粒肿瘤电转染组。肌肉电转染采用的参数是电场强度为 2 0 0V/cm ,脉冲时值为 2 0ms ,8次 ,1Hz;肿瘤内电转染采用的参数是电场强度为 6 0 0V/cm ,脉冲时值为 2 0ms,1次 ,1Hz。结果 TIMP 3质粒肌肉内电转染组和TIMP 3质粒肿瘤内电转染组肿瘤生长受到抑制 ,与另外 3组相比肿瘤生长速度明显减缓 (P<0 .0 5 ) ,且两组肿瘤组织中TIMP 3蛋白量过度表达。结论 抑癌基因可通过肌肉内DNA电转染起到抗肿瘤效果。

体轴抑制因子1敲除及过表达对ACT-1人未分化甲状腺癌细胞中B细胞淋巴瘤-2表达影响的初步研究

目的探讨体轴抑制因子1(AXIN1)的敲除及过表达对ACT-1人未分化甲状腺癌细胞中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)影响及可能机制。方法采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测ACT-1人未分化甲状腺癌细胞与Nthy-ori-3-1人正常甲状腺细胞中AXIN1 mRNA水平表达差异。采用体外分子克隆技术及过表达技术构建AXIN1基因过表达ACT-1细胞系,RT-qPCR及蛋白质免疫印迹法(WB)分别检测其AXIN1 mRNA及蛋白表达水平。在前期构建成功的AXIN1敲除的ACT-1单克隆细胞基础上,结合本实验构建的过表达细胞系,采用RT-qPCR及WB分别检测两组细胞中Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平。结果与对照组相比,ACT-1中AXIN1表达降低,过表达组AXIN1 mRNA和蛋白表达水平增加,过表达组Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平降低,而敲除组Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平均增高(P<0.05)。结论敲除及过表达AXIN1基因可能通过改变Bcl-2的表达来影响ATC肿瘤发生过程。

程序性死亡受体1/程序性死亡配体1在甲状腺未分化癌的研究进展

甲状腺未分化癌是一种罕见、极具侵袭性的疾病,预后往往不良,总体生存时间仅以月计。有近半数患者诊断时已经处于局部晚期、或伴有远处转移,缺乏有效的治疗方式。目前,程序性死亡受体1(PD-1)/程序性死亡配体1(PD-L1)作为极具发展潜力的免疫治疗方式,已在多种肿瘤中显示出良好疗效。本文旨在对PD-1/PD-L1生物学作用、药物进展及在甲状腺未分化癌中的研究现状进行综述,有助于为甲状腺未分化癌的治疗提供一些新的思路。

人甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1的HMGA2基因敲除模型构建

目的利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建稳定敲除高迁移率族蛋白A2(high mobility group protein AT-Hook-2,HMGA2)基因的人甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1细胞模型。方法重组pLV[2gRNA]-EGFP:T2A:Puro-U6>{hHMGA2[gRNA#A1]*}-U6>{hHMGA2[gRNA#A2]*}慢病毒质粒载体的构建:设计靶向HMGA2基因的Dual-gRNA序列,将合成的Dual-gRNA片段克隆到pLV[2gRNA]-EGFP:T2A:Puro-U6载体中,提取单克隆进行测序验证。成功构建的重组质粒载体进行慢病毒包装,并感染TPC-1细胞,利用嘌呤霉素进行筛选获得HMGA2敲除的单克隆,进行PCR及测序验证,实时荧光定量qPCR检测细胞中HMGA2 mRNA的敲除效率。结果经测序验证,成功构建了靶向HMGA2基因的pLV[2gRNA]-EGFP:T2A:Puro-U6>{hHMGA2[gRNA#A1]*}-U6>{hHMGA2[gRNA#A2]*}质粒。挑取单克隆进行PCR鉴定及基因测序,成功获得了HMGA2完全敲除的TPC-1细胞。经实时荧光定量qPCR检测HMGA2敲除的TPC-1细胞,未表达HMGA2 mRNA。结论利用CRISPR/Cas9基因编辑技术能成功构建稳定敲除HMGA2基因的人甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1细胞模型。

姜黄素对甲状腺未分化癌阿霉素耐药细胞株HTh74Rdox的增殖抑制作用及其机制

目的探讨姜黄素对甲状腺未分化癌阿霉素耐药细胞株HTh74Rdox的增殖抑制作用及可能的作用机制。方法以不同浓度阿霉素处理甲状腺未分化癌细胞株HTh74及阿霉素耐药株HTh74Rdox细胞48h后,MTT法检测细胞活力,计算两种细胞的半数抑制浓度(IC50)和HTh74Rdox细胞的阿霉素耐药指数。不同浓度姜黄素处理HTh74及HTh74Rdox细胞,24h后倒置显微镜下观察细胞形态的变化,并采用MTT法检测细胞活力。Western blot检测不同浓度姜黄素处理HTh74Rdox细胞6h后p-mTOR、p-S6K和p-Akt蛋白表达的变化。结果阿霉素对HTh74细胞的IC50为(148.77±17.47)ng/ml;而对HTh74Rdox细胞的IC50则为(2011.00±109.42)ng/ml。HTh74Rdox细胞对阿霉素的耐药指数为13.59±0.98。在姜黄素作用下,HTh74及HTh74Rdox细胞形态均发生改变,细胞活力也均被抑制(P<0.01),但HTh74Rdox细胞对姜黄素更为敏感。不同浓度姜黄素处理HTh74Rdox细胞6h后,p-mTOR、p-S6K和p-Akt蛋白表达均受到抑制(P<0.01),且呈现明显的剂量依赖性。结论与HTh74细胞相比,对阿霉素耐药的HTh74Rdox细胞对姜黄素更为敏感,这可能与姜黄素能够显著抑制HTh74Rdox细胞中p-mTOR、p-S6K和p-Akt蛋白表达有关。