新的突变导致ACTN1相关血小板减少症的家系研究

目的:对1个ACTN1相关血小板减少症家系进行临床表型和基因型研究,并探讨其分子发病机制。方法:抽取全部家系成员外周血,检测血常规、血涂片、凝血功能、血小板聚集试验。流式细胞术检测血小板CD41和CD61的表达。先证者及其父亲行骨髓细胞形态学检测。全外显子测序技术扩增血小板型出血障碍相关基因所有外显子及其侧翼序列,PCR产物纯化后直接测序进行基因分析。采用生物信息学软件评估突变位点保守性、危害性;采用分子结构模拟图分析预测突变氨基酸对α-肌动蛋白-1结构和功能的影响。结果:先证者血小板数88×10^(9)/L,血涂片可见哑铃状血小板、蛇形血小板及血小板大小不等;骨髓细胞形态学:巨核细胞形态正常,计数270个。先证者的父亲血小板数74×10^(9)/L,血涂片可见大血小板,血小板大小不等;骨髓细胞形态学:巨核细胞计数239个。先证者的祖父血小板数83×10^(9)/L,血涂片可见蛇形血小板、血小板大小不等。其余家系成员各项检测指标均正常。先证者ACTN1基因第20外显子c.2396G>A错义突变导致所编码蛋白质799位氨基酸Arg突变为His。先证者的父亲、祖父在该位点的测序结果均与先证者相同。生物信息学分析显示该位点在不同物种之间高度保守,该位点的变异可能导致蛋白功能损害;通过蛋白模型分析显示α-肌动蛋白-1 799位Arg与811位Glu形成临界盐桥,稳定钙调蛋白样基序内Ca;结合环的构象。R799H突变失去了这个关键的盐桥,使该结构域失稳态。结论:新发现的ACTN1基因第20外显子c.2396G>A错义突变是导致本研究家系血小板减少症发生的分子机制。

中国人群细胞黏附相关基因多态性与非综合征型唇腭裂的关联研究

目的:探索中国人群中细胞黏附相关基因多态性与非综合征型唇裂合并或不合并腭裂(isolated nonsyndromic cleft lip with or without cleft palate,NSCL/P)的关联关系及可能存在的基因-环境交互作用。方法:对一项国际多中心的全基因组关联研究(genome-wide association study,GWAS)的数据进行再分析,选取其中806个中国人群NSCL/P核心家庭,对该人群的8个细胞黏附相关基因包括CDH1、CTNNB1、PVRL1、PVRL2、PVRL3、ACTN1、VCL、LEF1进行了传递不平衡检验(transmisssion diseqilibrium test,TDT)及基因-环境交互作用分析。环境因素包括患儿母亲孕期吸烟、被动吸烟、饮酒及服用多种维生素。结果:经数据质量控制后,共纳入226个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)位点,TDT结果显示,CTNNB1、CDH1、ACTN1基因中有23个SNPs与NSCL/P之间存在关联(P<0.05),但经Bonferroni校正后,这些关联均无统计学意义(P>0.000 2)。基因-环境交互作用的分析结果显示,14号染色体的ACTN1基因中rs743127位点与母亲孕期被动吸烟的交互作用具有统计学意义(P=0.000 1),母亲孕期无被动吸烟时携带一个该危险位点的患儿的OR值为0.59(95%CI:0.38-0.90),患儿母亲孕期中有被动吸烟情况时携带一个危险位点的患儿的OR值为2.00(95%CI:1.23-3.26)。而ACTN1基因的rs1475034、rs370535、rs2273419位点、CTNNB1基因的rs106871位点与被动吸烟和PVRL3基因的rs7634000、rs2971366、rs2634553、rs1489032、rs7624812位点与母亲孕期补充维生素的交互作用并无统计学意义(P>0.000 2)。结论:传递不平衡检验未发现所纳入的细胞黏附相关基因多态性与NSCL/P存在关联,但基因-环境交互作用分析结果提示,ACTN1基因可能通过基因-环境交互作用而影响NSCL/P的发病风险。

基于生物信息学分析α-肌动蛋白1在胃癌中的表达情况及临床意义

目的分析ACTN1基因在胃癌组织和癌旁正常组织中的表达差异,探讨其与胃癌免疫浸润水平、预后的相关性及其可能的信号通路及互作蛋白。方法通过TCGA、GEO数据库分析ACTN1在胃癌组织及癌旁正常组织中的表达差异;通过Kaplan-Meier数据库分析ACTN1与胃癌患者预后的相关性;通过Timer与TISIDB数据库分析ACTN1与胃癌免疫浸润水平的相关性;通过cBio-Portal数据库获取ACTN1在胃癌中的共表达基因,并对ACTN1及共表达基因进行GO及KEGG富集分析;通过String数据库及Cytoscape软件构建蛋白互作网络并筛选Hub基因,分析ACTN1与Hub基因的相关性。结果ACTN1基因在胃癌组织中呈现高表达;ACTN1高表达的胃癌患者总体生存率与低表达患者相比显著降低;胃癌组织中ACTN1表达量与巨噬细胞、中央记忆CD4^(+)T细胞、效应CD4^(+)T细胞、浆细胞样树突状细胞呈正相关,与活化CD4^(+)T细胞呈负相关;GO及KEGG分析显示ACTN1及共表达基因可能通过参与细胞外基质组织、细胞外结构组织、细胞连接组装等生物学过程,并与FN1、FERMT2、ITGB5、FLNA、ITGAV、ITGB1、ILK、ITGA5、PARVA等基因表达密切相关。结论ACTN1基因与胃癌患者的不良预后及肿瘤免疫浸润水平密切相关,可作为一个潜在的用于诊断及预后评估的分子生物学标志物。