组蛋白去乙酰化酶抑制剂ACY1215对急性肝衰竭大鼠肝细胞线粒体的保护作用

目的探讨ACY1215对急性肝衰竭大鼠肝细胞线粒体损伤的保护作用及其相关机制。方法 24只SD大鼠被随机分为对照组、模型组和ACY1215处理组。以脂多糖(LPS)联合D-氨基半乳糖(D-Gal)注射建立急性肝衰竭大鼠模型,药物干预组在建立急性肝衰竭组前2 h给予ACY1215(10 mg·kg-1)注射。造模48 h后处死动物,在光镜及电镜下观察肝组织学变化,采用梯度离心法分离肝细胞线粒体,采用荧光酶标法测定线粒体膜通透性转换孔(MPTP),采用ELISA法测定线粒体细胞色素C(Cytc)含量,常规测定血清ALT、AST和总胆红素(TBil)水平。结果与模型组比,ACY1215处理组肝组织学破坏程度减轻,电镜显示肝细胞线粒体肿胀减轻;急性肝衰竭模型组大鼠血清ALT、AST和TBIL水平分别为(5114.1±252.6)U/L、(2909.8±31.7)U/L和(97.6±1.4)μmol/L,均显著高于正常组大鼠的(56.0±4.4)U/L、(130.4±12.6)U/L和(7.4±0.7)μmol(P均<0.05),但处理组ALT、AST和TBIL水平均较模型组减低,分别为(799.4±11.2)U/L、(401.0±5.6)U/L和(28.0±1.2)μmol/L(P均<0.05);急性肝衰竭模型组大鼠MPTP相对荧光值(RFU)为(96822.0±16733.1)RFU/mgprot,较正常组大鼠的(156300.0±24043.3)RFU/mgprot显著升高(P<0.05),也显著高于处理组的(127150.0±12337.6)RFU/mgprot(P<0.05);模型组大鼠线粒体内Cytc为(0.17±0.03)ng/mgprot,较正常组大鼠线粒体内的(0.39±0.10)ng/mgprot显著减少(P<0.05),也低于处理组的(0.32±0.06)ng/mgprot(P<0.05)。结论 ACY1215对急性肝衰竭大鼠肝脏线粒体有一定的保护作用,其作用机制可能是通过抑制肝细胞线粒体MPTP的开放,从而减少了Cytc进入到细胞质内有关。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂ACY1215对急性肝衰竭小鼠肝脏炎症反应的影响

目的观察D-氨基半乳糖/脂多糖(D-Gal N/LPS)诱导的急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)模型小鼠在组蛋白去乙酰化酶抑制剂ACY1215的作用下,炎症相关指标降钙素原(procalcitonin,PCT)、高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)、微小RNA-141(microRNA-141,miR-141)的表达情况。方法将18只SPF级C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组(n=6)、ALF模型组(n=6)、ACY1215干预组(n=6),ALF模型组和ACY1215干预组采用D-Gal N/LPS联合诱导ALF小鼠模型,其中ACY1215干预组在造模前2 h腹腔注射ACY1215。24 h后检测各组血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和总胆红素(TBIL)水平,取肝组织进行HE染色观察肝组织结构变化并检测肝组织PCT、HMGB1、miR-141的表达情况。结果与ALF模型组相比,ACY1215干预组小鼠肝组织结构破坏程度明显减轻,炎性细胞浸润明显减少;血清AST、ALT、TBIL水平显著下降,肝组织HMGB1及PCT表达显著降低,miR-141表达显著升高。结论 ACY1215对ALF小鼠肝组织具有保护作用,可能与其能减轻肝组织炎症反应有关。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂ACY1215对急性肝衰竭过程中人正常结肠上皮细胞NCM460损伤的保护作用及机制研究

目的探讨ACY1215对急性肝衰竭过程中人正常结肠上皮细胞NCM460损伤的保护作用及相关机制研究。方法体外培养人正常结肠上皮细胞NCM460细胞,脂多糖(LPS)模拟急性肝衰竭过程中产生的肠毒性物质,对NCM460细胞进行造模为LPS组。在完成造模前予以ACY1215处理NCM460细胞为ACY1215组。而不予以任何药物干预的为正常组。使用CCK8方法检测三组细胞的活性。在荧光显微镜下观察三组细胞线粒体膜电位变化情况,其中红色荧光越强,绿色荧光越低,表明线粒体膜电位越高。同时检测三组细胞的Bcl-2和Bax的mRNA和蛋白表达量。结果与正常组相比,LPS组NCM460细胞活性显著降低(P<0.05)。而与LPS组相比,ACY1215组NCM460细胞活性则显著升高(P<0.05)。与正常组相比,LPS组NCM460细胞的红色荧光明显减少,而绿色荧光显著增强。与LPS组相比,ACY1215组红色荧光显著增加,而绿色荧光显著减少。与正常组相比,LPS组NCM460细胞的Bcl-2蛋白及mRNA表达量显著降低,而Bax蛋白和mRNA表达量则显著升高(P<0.05)。与LPS组相比,ACY1215组Bcl-2蛋白和mRNA表达量显著升高,而Bax蛋白和mRNA表达量则显著降低(P<0.05)。结论组蛋白去乙酰化酶抑制剂ACY1215对急性肝衰竭过程中损伤的NCM460细胞具有一定的保护作用,其机制可能是通过抑制NCM460细胞的线粒体凋亡途径来达到保护作用。

组蛋白去乙酰化酶6抑制剂ACY1215对顺铂诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡的影响

目的:观察组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)抑制剂ACY1215对顺铂诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡的影响及其机制。方法:分别应用生理盐水、顺铂和ACY1215联合顺铂处理SMMC-7721细胞24h,光镜下观察各组细胞生长情况,RT-PCR检测各组细胞HDAC6基因的表达,Western blotting分析各组细胞微管蛋白(α-tubulin)、乙酰化微管蛋白(Acetyl-α-tubulin)、凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2)及增殖相关蛋白Cyclin D1的表达。结果:ACY1215联合顺铂对SMMC-7721细胞增殖的抑制明显高于单用顺铂。RT-PCR结果显示ACY1215联合顺铂组细胞HDAC6表达水平低于顺铂组(P<0.05)。Western blotting结果显示,ACY1215联合顺铂组细胞促凋亡蛋白Bax表达量较顺铂组升高(P<0.05),而抑凋亡蛋白Bcl-2和增殖相关蛋白Cyclin D1较顺铂组降低(P<0.05);ACY1215联合顺铂组细胞Acetyl-α-Tubulin表达水平较顺铂组升高(P<0.05)。结论:ACY1215具有增强顺铂诱导肝癌细胞凋亡的作用。