正常与受照射的新生儿脐带血中ACl33^(+)细胞的分离与纯化的相关问题探讨

目的探讨正常与受照射的新生儿脐带血中ACl33+细胞的分离与纯化的相关问题。方法采用免疫磁珠活性分选系统(MidiMACS)分离、纯化脐带血,通过流式细胞仪测定ACl33+细胞的纯度。结果在正常与受照射的脐带血单个核细胞(MNC)中,ACl33+细胞所占的比例分别为(0.93±0.20)%和(0.33±0.20)%,两者相比较,差异非常显著(P<0.01);正常与受照组一次过柱获取的ACl33+细胞的纯度分别为(70.3±4.9)%和(68.3±4.6)%,二次过柱获取的ACl33+细胞的纯度分别为(86.3±5.5)%和(84.5±6.8)%,正常与受照组相比较,无论是一次过柱还是二次过柱,差异均无显著性意义(P>0.05)。结论免疫磁珠活性分选技术是一套有效的分离、纯化系统,可以获得足够数量的造血干/祖细胞;正常与受照射的脐带血MNC中ACl33+细胞所占的比例差异非常显著。

不同细胞因子组合对脐带血中ACl33^(+)细胞迁移和归巢能力的影响

目的探讨不同细胞因子组合对脐带血中ACl33+细胞表面趋化因子受体(CXCR4)、粘附分子VLA4(CD49d)、LFA1(CD11a)和Lselectin(CD62L)表达的影响。方法采用直接免疫荧光标记法,使用流式细胞仪测定新鲜分离的、不同培养条件下体外培养7d、14d的脐带血中ACl33+细胞表面CXCR4和CD49d、CD11a和CD62L的表达情况。结果新鲜脐带血ACl33+细胞中CXCR4的表达率为(50.2±12.5)%;CD49d的表达率为(53.2±15.6)%,CD11a的表达率为(98.1±2.4)%,CD62L的表达率为(52.4±16.6)%。在无血清、无细胞因子存在的条件下,体外培养第7d及14d,CXCR4、VLA4、CD11a和CD62L的表达显著下降(P<0.05)。在有细胞因子存在的条件下,短期液体扩增培养后,脐带血ACl33+细胞中CXCR4、VLA4、CD11a和CD62L的表达率较新鲜ACl33+细胞均有不同程度的增高(P<0.05);IL3+FL+SCF组较IL11+FL3+SCF组表达率高,其中以培养第14dCXCR4、CD62L的表达增高最明显。结论在体外短期扩增培养过程中,早期效应细胞因子能显著上调脐带血ACl33+细胞CXCR4、CD49d、CD11a和CD62L等的表达;用SCF、FL和IL3组合扩增脐带血,不仅能获得足够数量的造血干/祖细胞,还能增加造血干/祖细胞的迁移和归巢能力。

基质细胞源性因子-1对脐血AC133^＋细胞迁移功能的影响

目的探讨了趋化因子即基质细胞源性因子-1（SDF-1）在脐血AC133^＋细胞迁移中的作用。方法用跨膜迁移（Transwell）实验来确定SDF-1最佳趋化浓度，并评价SDF-1最佳趋化浓度条件下细胞迁移率。结果随着SDF-1浓度增加，新鲜脐血AC133^＋细胞迁移率升高，但SDF-1浓度达到150ng／ml时迁移率趋于平稳；当CXCR4阻断型抗体作用后，迁移率与未加SDF-1组无差异。结论通过Transwell Plate可以有效地模拟细胞穿越内皮现象。随着趋化因子SDF-1浓度的增高，迁移率递增，但当SDF-1浓度高到一定程度时，细胞趋化率达稳定，继续增高SDF-1浓度，细胞迁移率变化不显著，应用CXCR4阻断抗体后AC133^＋细胞迁移率与未加SDF-1差异无统计学意义。