GLP-1对AD转基因鼠氧化应激的保护作用

目的:胰高血糖素样肽1(GLP-1)对AD转基因鼠氧化应激的保护作用及其可能机制。方法:将C57BL分为假手术组、AD组、GLP-1干预组,假手术组为正常小鼠,其他两组为AD转基因小鼠,GLP-1干预组分别侧脑室注入不同浓度(5、10、20、50、100nmol)的GLP-1,连续5d,假手术组注入同等剂量PBS。3组免疫组化检测小鼠海马Aβ蛋白表达;QDs-SA量子点检测脑组织GFAP蛋白;运用分光光度仪检测海马组织海马超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量。结果:与假手术组比较,AD模型组Aβ含量明显升高,海马GFAP阳性细胞明显深染,体积增大,数量增多,AD组SOD活性降低,MDA含量均明显高(P<0.05);干预组不同浓度的GLP-1注入能减少Aβ含量,增高SOD活性,降低MDA含量。结论:AD转基因鼠模型中Aβ含量明显升高,产生氧化应激损伤,GLP-1能通过降低氧化应激损伤减少细胞内Aβ聚集。

陈皮提取物对APP/PS-1双转基因阿尔茨海默病小鼠学习记忆功能的影响

目的探讨陈皮提取物对APP/PS-1双转基因阿尔茨海默病(AD)小鼠学习记忆功能的影响.方法选用APP/PS-1双转基因AD小鼠16只,随机分为模型对照组和供试品组,8只/组,另取8只C57小鼠为正常对照组,正常对照组和模型对照组分别灌胃等量的生理盐水,供试品组灌胃陈皮提取物的生理盐水溶解液,灌胃体积为10mL/kg,1次/d,连续18d.第11天到第16天,进行Morris水迷宫的定位航行实验及空间探索实验.第17天到第18天,进行5min避暗实验.结果在Morris水迷宫实验中,与正常对照组比较,模型对照组定位航行第2天、第3天、第5天的潜伏期增加(P<0.05);与模型对照组比较,供试品组第5天的潜伏期降低(P<0.05).空间探索阶段,各组的目标象限路程百分比、时间百分比及站台穿越次数差异无统计学意义(P>0.05).在避暗实验中各组的错误潜伏期、错误次数及错误率差异均无统计学意义(P>0.05).结论陈皮提取物对APP/PS-1双转基因AD小鼠的空间学习、记忆能力有一定的改善作用.

Tg2576转基因AD小鼠大脑白质内毛细血管的体视学研究

目的定量研究Tg2576转基因AD小鼠大脑白质内毛细血管的改变。方法随机选取10月龄雄性Tg2576小鼠和同窝生相同月龄雄性野生型小鼠(Wild-type)各11只。应用Morris水迷宫检测其空间学习和记忆能力。行为学测试后在每组小鼠内各随机选取7只,应用冰冻切片技术、免疫组织化学技术及体视学方法定量研究大脑白质体积以及白质内毛细血管的总长度、总体积和总表面积。结果 10月龄Tg2576转基因AD小鼠的定位航行测试显示其逃避潜伏期显著长于同月龄野生型小鼠(P<0.05),而空间探索试验结果无显著差异。10月龄Tg2576转基因AD小鼠大脑白质内毛细血管的总长度、总体积和总表面积(6.90±0.82m,0.0648±0.0167mm3,61.77±13.80mm2)均较同月龄野生型小鼠(12.44±2.64m,0.0891±0.0145mm3,106.81±20.17mm2)显著降低(P<0.01,P<005,P<0.01),而两组小鼠的大脑白质体积无显著性差异。结论出现行为学改变的10月龄Tg2576转基因AD小鼠大脑白质内存在显著性毛细血管改变,这可能是造成白质损伤和早期学习记忆能力减退的重要原因,而白质内毛细血管可能作为早期预防和治疗AD的靶点。

左旋丁基苯酞改善AD转基因小鼠学习记忆缺失

阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD），是一种与年龄相关的不可逆的神经退行性疾病，是老年人中引起痴呆最常见的一种疾病。临床上以记忆力减退、认知功能障碍为特征，病情呈进行性加重。左旋丁基苯酞（1-3-n-butylphathlide，L—NBP）是药物研究所从芹菜籽中分离得到的单体化合物，在脑缺血、血管性痴呆和Aβ侧脑室灌流的动物模型上已经证实有良好的神经保护作用。在本研究中，我们采用三转基因小鼠模型（3xTg．AD）来考察L．NBP对小鼠学习记忆缺失的改善作用。10．7月龄的3xTg．AD小鼠分别口服L-NBP15mg／kg和对照溶剂植物油。18周后，进行Morris水迷宫实验，之后小鼠被处死，留取脑组织进行生化和病理实验。

左旋丁基苯酞改善APP／PS1-AD转基因小鼠学习记忆缺失及tau蛋白磷酸化

阿尔茨海默病（Alzheimer’Sdisease，AD），是一种与年龄相关的不可逆的神经退行性疾病，是老年人中引起痴呆最常见的一种疾病。临床上以记忆力减退、认知功能障碍为特征，病情呈进行性加重。左旋丁基苯酞（1-3-n-butylphathlide，L-NBP）是药物研究所从芹菜籽中分离得到的单体化合物，在脑缺血、血管性痴呆和Aβ侧脑室灌流的动物模型上已经证实有良好的神经保护作用。在本研究中。

早期APP/PS1转基因AD模型小鼠海马胆碱能神经元改变的体视学研究

目的应用体视学方法定量研究APP/PS1双转基因AD模型小鼠海马内胆碱能神经元的早期改变情况。方法 Morris水迷宫检测10月龄雌性APP/PS1双转基因AD小鼠(APP/PS1组)和同月龄同窝生雌性野生型小鼠(Wild-type组)的空间学习记忆能力。运用现代体视学方法结合免疫组织化学方法精确定量小鼠海马各亚区的体积和胆碱能神经元的数量。结果 APP/PS1组小鼠定位航行实验中逃避潜伏期长于Wild-type组(P<0.01)。空间探索实验中,APP/PS1组小鼠穿越平台的次数及平台所在象限时间百分比均少于Wild-type组(P=0.007、0.041)。APP/PS1组小鼠海马齿状回(dentate gyrus,DG)的体积较Wild-type组缩小(P=0.001),而APP/PS1组小鼠海马CA1、CA2/3区的体积较Wild-type组差异无统计学意义(P=0.089、0.059)。APP/PS1组小鼠海马DG内胆碱能神经元的数量较Wild-type组显著减少(P=0.017),APP/PS1组小鼠海马CA1区、CA2/3区内胆碱能神经元较Wild-type组差异均无统计学意义(P=0.076、0.074)。结论早期APP/PS1双转基因AD小鼠海马DG内胆碱能神经元丢失,可能是AD早期出现空间学习记忆能力障碍的重要结构基础之一。

琐琐葡萄黄酮对APP/PS-1双转基因AD小鼠的作用研究

目的 探讨琐琐葡萄黄酮(flavones from Vitis vinifera L.,VTF)对APP/PS-1双转基因AD小鼠神经保护作用研究。方法 选用6月龄雄性APP/PS-1双转基因AD小鼠75只,随机分为模型组、阳性对照组(多奈哌齐组,0.7mg/kg)和琐琐葡萄总黄酮(VTF)低、中、高剂量组(70、210、420mg/kg),另取15只同龄雄性C57BL/6小鼠为空白对照组,模型组和空白对照组给予等量0.5%CMC-Na灌胃,8周后采用Morris水迷宫观察小鼠空间认知能力,应用HE染色和免疫组化学染色(IHC)观察小鼠海马CA1区神经元细胞形态以及APP和Aβ_(1~42)蛋白表达情况。结果 与空白对照组比较,模型组小鼠逃逸潜伏期显著延长(P<0.01),有效区域进入次数显著减少(P<0.01);与模型组比较,VTF各剂量组逃逸潜伏期显著缩短(P<0.05),VTF低和中剂量有效区域进入次数显著增多(P<0.05)。镜下观察结果显示,与空白对照组比较,模型组存在大量呈凋亡趋势的神经元细胞,排列不规则,胞质萎缩出现间隙,CA1区APP和Aβ_(1~42)蛋白表达量增加;阳性对照组及VTF各剂量组海马神经元大多数较正常,排列较规整紧密,核仁清晰,核固缩浓染减轻,APP和Aβ_(1~42)蛋白表达量减少。结论 VTF可改善APP/PS-1双转基因AD小鼠学习记忆能力,对小鼠大脑神经元细胞有良好的保护作用,可减少APP和Aβ_(1~42)在小鼠脑内的过表达,对APP/PS-1双转基因AD小鼠具有较好的防治作用。

通天草提取物对阿尔茨海默氏病转基因小鼠认知功能的改善作用

目的:探讨通天草提取物对阿尔茨海默氏病(Alzheimer’s disease,AD)转基因小鼠的治疗作用。方法:每天2次使用灌胃器,将通天草提取物(0.3m L/10g·W)由小鼠口腔直接注入到小鼠胃中。通过Morris水迷宫和开场实验检测小鼠的学习记忆和探索能力。通过HE染色检测小鼠海马齿状回面积和细胞密度改变。结果:给予通天草提取物治疗28天后,在Morris水迷宫实验中,治疗组小鼠的逃避潜伏期明显缩短(P<0.01),经过平台次数明显多于对照组(P<0.01),停留在目标象限的时间明显延长(P<0.01);在开场实验中,治疗组小鼠穿经格子数和前肢抬起次数均显著多于对照组(P<0.01)。HE染色结果显示,经通天草提取物治疗28天后,与对照组小鼠相比,治疗组小鼠海马齿状回面积明显增大(P<0.05),细胞密度显著增高(P<0.05)。结论:通天草提取物治疗可有效改善AD转基因小鼠学习记忆能力和空间探索能力。

中药Ⅰ号方对APP/PS1双转基因模型小鼠APP代谢的影响

目的研究中药I号方对APP/PS1双转基因模型小鼠APP代谢的影响。方法将5月龄APP/PS1双转基因模型小鼠随机分为模型组(vehicle)、中药Ⅰ号方低剂量组(0.6 g/kg)、中剂量组(1.2 g/kg)和高剂量组(2.4 g/kg),并以同窝阴性小鼠作为正常对照组(wild-type,WT),每组16只,雌雄各半。给药小鼠每天灌胃一次,模型组和正常对照组分别给予等体积的双蒸水灌胃。给药四个月后,用免疫组化和Western blot检测淀粉样前体蛋白(APP)及其代谢产物和分解酶的变化。结果 Western blot结果显示,与模型组相比,治疗组低剂量、中剂量和高剂量给药组能显著降低APP分解酶(ADAM10和BACE1)(P<0.01)及APP的分解产物的量,如:β-CTF(C99)、α-CTF(C83)、s APPα、s APPβ(P<0.01)。结论中药I号方通过影响APP的分解过程减少淀粉样蛋白(β-amyloid peptide,Aβ)的生成,减少脑内老年斑的沉积。

条件恐惧实验用于评价阿尔茨海默病转基因小鼠认知功能性别差异的实验研究

目的探讨条件恐惧(fear conditioning, FC)实验用于评价阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)转基因小鼠认知功能的性别差异的应用效果。方法选择AD转基因模型小鼠与野生型小鼠(C57BL/6)交配后的子代小鼠20只,按性别分笼养殖至6月龄,采用FC实验研究6月龄AD转基因小鼠认知障碍的性别差异,并与Morris水迷宫、Barnes迷宫的实验结果进行比较。结果 AD小鼠在Morris水迷宫和Barnes迷宫的训练和测试中性别差异无统计学意义(P>0.05)。FC实验显示:第3天的环境测试中,雌性AD小鼠的静止时间(42.8 s,6.4~120.0 s)明显长于雄性AD小鼠(3.1 s,0~17.4 s),声音测试中,雌性AD小鼠的静止时间(117.7 s,80.4~158.9 s)明显长于雄性AD小鼠(91.0 s,57.4~118.4 s),差异均有统计学意义(P <0.05);第7天的环境测试中,雌性AD小鼠的静止时间(30.3 s,1.5~57.2 s)明显长于雄性AD小鼠(5.4 s,0~31.6 s),差异有统计学意义(P <0.05),仅在第7天的声音测试中,雌性与雄性AD小鼠的静止时间比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。结论认知障碍的性别差异确实存在于老年AD转基因小鼠中,并且FC实验最适用于测试AD小鼠的认知障碍。

中链脂肪酸联合α-亚麻酸对APP/PS1转基因小鼠学习记忆行为及大脑Aβ42、Tau蛋白表达的影响

目的探讨中链脂肪酸(medium-chain fatty acid,MCFA)和α-亚麻酸(α-linolenic acid,ALA)对APP/PS1转基因小鼠学习记忆功能及大脑Aβ42、Tau蛋白表达的影响。方法将25只4周龄APP/PS1转基因小鼠随机分为ALA+MCFA组(8只)、MCFA组(9只)和长链脂肪酸(long chain fatty acid,LCFA)组(8只,对照组),同窝野生型小鼠为WT组(10只,正常对照组)。各组小鼠用不同脂肪酸配制饲料连续喂养至36周龄,用Morris水迷宫进行定位航行实验和空间探索实验,并记录平均逃避潜伏期、平台穿越次数和平台象限滞留时间百分比。免疫组化法检测海马Aβ沉积,Western blot方法检测APP、Aβ42蛋白及Tau蛋白表达。结果与LCFA组小鼠相比,ALA+MCFA组和MCFA组小鼠水迷宫定位航行试验平均逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),空间探索试验平台穿越次数则明显较高(P<0.05),海马组织Aβ斑块数目相对较少,且皮质和海马Aβ42蛋白及Tau蛋白表达均较低(P<0.05)。结论与LCFA相比,ALA和MCFA能通过减少Aβ42蛋白生成及Tau蛋白磷酸化水平,改善APP/PS1转基因小鼠学习记忆功能,具有潜在的延缓阿尔茨海默病发生和进展的作用。

琐琐葡萄黄酮对APP/PS-1双转基因阿尔茨海默病小鼠神经炎症的保护作用

目的研究琐琐葡萄黄酮(VTF)对APP/PS-1双转基因阿尔茨海默病(AD)小鼠神经炎症保护作用的机制。方法选取6月龄APP/PS-1双转基因雄性小鼠75只,随机分为模型组(0.5%CMC-Na)、阳性组(多奈哌齐0.7 mg/kg体重)、VTF低剂量组(VTF 70 mg/kg体重)、VTF中剂量组(VTF 210 mg/kg体重)、VTF高剂量组(VTF 420 mg/kg体重),每组15只;另选取6月龄同背景SPF级C57BL/6小鼠15只为对照组(0.5%CMC-Na)。灌胃8周后,免疫组织化学检测IBA1蛋白表达;Western blotting检测APP、IBA1蛋白表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脑组织的白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。结果对照组、阳性组及VTF各剂量组IBA1蛋白阳性表达率较模型组低(P<0.05);对照组、阳性组及VTF各剂量组APP、IBA1蛋白相对表达量较模型组低(P<0.05);对照组、阳性组及VTF各剂量组IL-1β、IL-6、TNF-α含量较模型组减少(P<0.05)。结论VTF可以减少APP/PS-1双转基因AD小鼠神经炎症的发生,并通过下调APP、IBA1蛋白的表达发挥神经保护作用。

别孕烯醇酮对APPswe/PSEN1小鼠黑质多巴胺能神经元的影响

目的评估别孕烯醇酮(APα)对阿尔茨海默病(AD)小鼠黑质(SN)酪氨酸羟化酶(TH)神经元数目的影响。方法 31只4月龄雄性小鼠采用免疫荧光染色观察和计算各种免疫阳性细胞的数目。结果双转基因AD小鼠(2×Tg AD)APα水平和TH神经元数目均明显减少,且出现在β-淀粉样斑块形成之前。给予APα处理可预防2×Tg AD小鼠SN总神经元、TH神经元和TH/5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)神经元数目的下降,但对纹状体TH神经纤维吸光度下降无影响。此外,APα能增加2×Tg AD小鼠新生成熟神经元的数目,但对新生胶质细胞数目无影响。结论 2×Tg AD小鼠体内低水平APα与多巴胺能神经元下降相关,外源性APα能够通过增加新生TH神经元的形成来恢复2×Tg AD小鼠TH神经元的下降。

APP/PS1双转基因AD传代小鼠的基因型鉴定及其行为学分析

目的对APP/PS1双转基因AD传代小鼠进行基因型鉴定,观察其学习记忆功能。方法PCR鉴定APP/PS1双转基因AD传代小鼠的基因表型,采用水迷宫实验检测记忆功能。结果9只APP/PS1双转基因AD传代小鼠基因组DNA中5只小鼠基因组DNA扩增出约350bp大小条带,认为成功转入APP和PS1基因。APP/PS1双转基因AD小鼠的水迷宫潜伏期比对照组小鼠明显延长。结论利用PCR扩增APP基因可对APP/PS1双转基因AD传代小鼠进行基因型鉴定,APP/PS1双转基因AD小鼠能够较好地模拟AD患者的临床表现,为AD的研究提供有效的实验动物模型。

SOD_1基因突变子对AD转基因小鼠β-淀粉样蛋白表达影响的实验研究

目的 :探讨Cu/ZnSOD1基因表达对Aβ产生的影响。 方法 :建立APP C10 0和G93ASOD1基因共表达的转双基因小鼠 ,应用免疫细胞化学方法测定不同鼠龄转基因鼠海马神经元Aβ表达 ,Westernblot定量测定转基因鼠脑SOD1、APP、APP C10 0和Aβ表达水平。结果 :低龄转双基因鼠与转单基因鼠之间Aβ水平无差异 ,与年龄匹配的转单基因鼠比较 ,高龄转双基因鼠脑Aβ水平升高 ,经统计处理差异无显著性意义 (P >0 0 5 )。但高龄转双基因鼠Aβ水平比低龄转双基因鼠明显升高 (P <0 0 5 )。 结论 :转双基因鼠脑APP C10 0和G93ASOD1基因共表达虽然未导致老年斑形成 ,但引起Aβ含量增加 。

别异烯醇酮对阿尔茨海默病小鼠黑质多巴胺神经元的影响

目的通过分析黑质致密部(SNpc)多巴胺神经元和新生的多巴胺神经元的数目,评估别异烯醇酮(APα)对阿尔茨海默病(AD)小鼠多巴胺神经元的增生是否有影响。方法选用3月龄雄性淀粉样前体蛋白/早老蛋白(APP/PS1)双转基因AD小鼠(2xTg-AD)作为实验组,背景非转基因小鼠(Non-Tg)作为对照组。2xTg-AD小鼠与Non-Tg小鼠分别行APα和PBS处理,24d后,每组6只小鼠做行为学检测;每组另6只小鼠取出脑组织后固定,通过免疫组织化学、体视测量学和吸光度测定,观察和分析各组小鼠SNpc标记酪氨酸羟化酶(TH)的多巴胺神经元的数目及其表达情况;并通过免疫荧光染色技术计算各组小鼠双标记的TH/5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)阳性神经元的数目。结果与Non-Tg溶剂对照组小鼠相比,2xTg-AD溶剂对照组小鼠开野实验移动格子的数目明显减少(P<0.01);SNpc区域TH的免疫活性强度明显降低(P<0.05);多巴胺神经元的数目明显减少(P<0.05);BrdU/TH双标记神经元的数目均明显降低(P<0.05)。与2xTg-AD溶剂对照组小鼠相比,经APα处理的2xTg-AD小鼠移动格子的数目明显增加(P<0.05);SNpc TH阳性神经元的数目明显增加(P<0.05);BrdU/TH双标记的阳性神经元的数目亦明显增多(P<0.01)。但是,TH免疫活性强度无显著性变化(P>0.05)。结论 APα通过增加AD小鼠SNpc新生的多巴胺的数目达到改善其多巴胺神经元减少和行为学下降的作用,表明APα是一种潜在性的神经增生的促进剂。

不同β-淀粉样蛋白抗体含量的IVIG对阿尔茨海默病模型小鼠认知功能干预效果初探

目的 探讨市售不同β-淀粉样蛋白(Aβ)抗体含量的静注免疫球蛋白(IVIG)对阿尔茨海默病(AD)模型小鼠认知功能的干预效果。方法 选取市售的国内8个不同血液制品公司的IVIG(IVIG1~8),酶联免疫吸附(ELISA)法检测其Aβ_(40/42)抗体含量后,按高、中、低分为3种Aβ_(42/40)抗体水平的IVIG做动物干预实验:将40只3月龄三转基因AD(3xTg-AD)小鼠随机均分为4组,雌雄各半,实验组(实验组1~3)分别腹腔注射高、中、低3种Aβ_(42/40)抗体水平IVIG(1 g·kg^(-1)剂量、2次/周,持续12周),对照组等量生理盐水腹腔注射。注射24次后立即利用小鼠行为学分析系统对4组小鼠做认知行为学检测及分析。结果 8种国内不同厂家生产的IVIG Aβ抗体含量(μg/mL)差异较大,Aβ_(40)单体抗体为0.7±0.05~3.1±0.05、Aβ_(40)寡聚体抗体为11.7±0.7~32.0±2.2、Aβ_(42)单体抗体为1.8±0.1~27.9±0.3、Aβ_(42)寡聚体抗体为2.3±0.1~49.4±2。从高、中、低Aβ_(42/40)抗体水平的IVIG中各选择1种(IVIG-1、IVIG-8、IVIG-6)分别注射给3个实验组小鼠;不同IVIG干预后实验组1~3组与对照组小鼠认知行为检测分析:旷场试验中进入中心区域时间(s)分别为0.5±0.9、23.4±6.1(P<0.01)、4.6±2.8、2.6±2.3,粪便数量(粒)分别为1.6±0.7、1.2±0.4、2.4±0.5、3.8±0.8(P<0.01);新物体识别试验:探索新物体分值分别为71.3±29.5、71.8±20.5、75.9±26.9、25.6±23.7(P<0.05);巴恩斯迷宫试验:实验组2与对照组小鼠探索目标洞时间(min)在d6为(50.3±19.3 vs 21±14.6(P<0.05)、d13为58.2±20.9 vs 19.2±15.9(P<0.05),其他各实验组与对照组相比无明显变化。结论 目前市售的产自国内的IVIG制品的Aβ_(40)/_(42)抗体水平存在明显差异;3月龄3xTg-AD小鼠经过其连续干预3个月后,认知功能均有所改善,改善效果与IVIG中Aβ抗体有关,但与抗体浓度不呈正相关。

琐琐葡萄黄酮对APP/PS-1小鼠海马神经细胞凋亡的影响

目的 探讨琐琐葡萄总黄酮(flavones from vitis vinifera L.,VTF)对APP/PS-1双转基因阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease, AD)小鼠海马神经细胞凋亡的影响。方法 选用6月龄雄性APP/PS-1双转基因AD小鼠75只,随机分为模型组,阳性对照组(多奈哌齐组,0.7mg/kg),VTF低、中、高剂量组(70、210、420mg/kg),另取15只同龄雄性C57BL/6小鼠作为空白对照组,模型组和空白对照组给予等量0.5%CMC-Na灌胃。酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测小鼠血清中Aβ1~42含量;免疫组织化学(immunohistodiemistiy, IHC)观察小鼠海马CA1区caspase-3蛋白表达情况;原位末端标记(TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling assay, TUNEL)法检测小鼠海马神经细胞凋亡情况。结果 ELISA检测结果显示,与模型组比较,阳性对照组和VTF各剂量组小鼠血清中Aβ1~42含量显著升高(P<0.05)。IHC实验结果显示,模型组小鼠海马CA1区caspase-3蛋白表达与空白对照组比较,阳性细胞着色深(P<0.05),VTF各剂量组小鼠较模型组海马caspase-3蛋白阳性表达均有所减少(P<0.05)。TUNEL法检测结果显示,与模型组比较,阳性对照组及VTF各剂量组小鼠海马神经元细胞大多较正常,其凋亡率与模型组比较显著下降(P<0.05)。结论 VTF可以通过下调caspase-3蛋白的表达从而减少APP/PS-1双转基因AD小鼠海马神经元的凋亡,对APP/PS-1双转基因AD小鼠具有较好的防治作用。

齐墩果酸对APP/PS-1双转基因AD小鼠的神经保护作用研究

目的:研究齐墩果酸(Oleanolic Acid,OA)对APP/PS-1双转基因阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)小鼠模型神经保护作用及机制。方法:选取6月龄APP/PS-1雄性小鼠21只,随机分为模型组(0.5%CMC-Na)、阳性组(多奈哌齐组,0.7 mg·kg^(-1))、齐墩果酸组(10 mg·kg^(-1))每组7只,6月龄同背景SPF级C57BL/6小鼠7只为对照组。灌胃8周之后通过Morris水迷宫实验观察小鼠学习记忆能力的改变,HE染色观察神经元细胞形态,ELISA检测血清中Aβ_(1-42)含量;免疫组化检测Aβ_(1-42)、APP、Iba1蛋白表达情况;Western blot检测APP、Iba1蛋白表达水平。结果:(1)对照组,模型组,阳性组及齐墩果酸组进入有效区域次数分别为7.00±2.09,1.00±0.89,3.67±1.97,4.33±2.50,与模型组相比,对照组,阳性组,齐墩果酸组均有统计学意义(P<0.05);(2)血清Aβ_(1-42)含量按上述顺序依次为4.98±0.25,2.50±0.66,4.63±0.73,4.36±0.97,与模型组相比,对照组,阳性组,齐墩果酸组均有统计学意义(P<0.05);(3)免疫组化结果显示与模型组相比,对照组,阳性组,齐墩果酸组Aβ_(1-42)、APP、Iba1蛋白阳性细胞数减少;(4)WB结果:对照组,模型组,阳性组,齐墩果酸组APP蛋白相对表达量分别为0.52±0.17,1.38±0.35,0.89±0.25,0.93±0.27;这四组的IBA1蛋白相对表达量分别为0.98±0.34,1.79±0.74,1.06±0.61,0.88±0.49,与模型组相比,野生对照组,阳性组,齐墩果酸组APP、IBA1蛋白相对含量有统计学意义(P<0.05)。结论:齐墩果酸组可以改善APP/PS-1模型小鼠记忆力及认知功能,降低海马神经元的损伤,并通过下调Aβ_(1-42)、APP、Iba1蛋白的表达水平来发挥保护神经作用。

基于mTOR/p70S6K信号通路探讨艾灸对阿尔茨海默病小鼠自噬的影响

目的:探讨艾灸对淀粉样前体蛋白/早老素1(APP/PS1)双转基因阿尔茨海默病(AD)小鼠自噬和β-淀粉样蛋白1-42(Aβ)蛋白表达的影响。方法:将56只6月龄APP/PS1双转基因AD小鼠适应性饲养2个月后,随机分为模型组、艾灸组、雷帕霉素组、抑制剂组,每组14只;14只同月龄C57BL/6J小鼠作为正常组。艾灸组小鼠予隔附子饼实按灸“百会”“风府”“大椎”20 min,雷帕霉素组小鼠予腹腔注射雷帕霉素(2 mg/kg),抑制剂组小鼠在艾灸组基础上注射1.5mg/kg3-甲基腺嘌呤(3-MA),均每日1次,连续2周。HE染色法观察各组小鼠海马组织形态,透射电镜观察各组小鼠海马组织细胞超微结构,免疫组化法检测各组小鼠额叶皮质和海马组织Aβ蛋白表达,Western blot法检测各组小鼠海马组织雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化mTOR(p-mTOR)、P70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)和磷酸化p70S6K(p-p70S6K)蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠神经元细胞数量减少,细胞坏死且变形,自噬泡和溶酶体减少。与模型组比较,艾灸组和雷帕霉素组小鼠神经元细胞数量增多,细胞坏死减少,自噬泡和溶酶体增多。与正常组比较,模型组小鼠Aβ、mTOR、p-mTOR、p70S6K、p-p70S6K蛋白表达增多(P<0.05);与模型组比较,艾灸组、雷帕霉素组和抑制剂组小鼠Aβ、mTOR、p-mTOR、p70S6K、p-p70S6K蛋白表达减少(P<0.05);与抑制剂组比较,艾灸组、雷帕霉素组小鼠Aβ、mTOR、p-mTOR、p70S6K、p-p70S6K蛋白表达减少(P<0.05);与雷帕霉素组比较,艾灸组小鼠mTOR、p-mTOR、p70S6K、p-p70S6K蛋白表达减少(P<0.05)。结论:艾灸可增强APP/PS1双转基因AD小鼠海马组织细胞自噬,减少脑组织Aβ异常聚集,其机制可能与抑制m TOR/p70S6K信号通路有关。