ADAM8的表达对急性酒精性肝损伤小鼠的影响

目的 探究CRISPR/Cas9技术靶向抑制去整合素-金属蛋白酶8(ADAM8)在小鼠急性酒精性肝损伤中的作用及分子机制。方法 18只6~8周龄健康雌性昆明小鼠根据随机数字表法分为正常组、酒精组和质粒组,每组6只。正常组不做处理,质粒组采用水流动力学注射法尾静脉注射利用CRISPR/Cas9技术抑制ADAM8基因的三合一重组质粒ADAM8-sgRNA3(3 g/kg),酒精组尾静脉注射等量生理盐水。酒精组和质粒组采用50%(V/V)分析纯乙醇一次性灌胃(14 mL/kg)诱导急性肝损伤。禁食16 h后进行眼球取血,检测丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)活性;苏木素-伊红(HE)和过碘酸-雪夫(PAS)染色检测肝脏损伤和糖原变化情况;蛋白免疫印迹法检测肝组织中ADAM8、细胞色素CYP450 2E1(CYP2E1)、热休克蛋白70(HSP70)及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路相关因子的表达。结果 与正常组相比,酒精组ALT和AST升高,肝损伤评分增加,糖原含量减少,ADAM8、CYP2E1、磷酸化的细胞外调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)、磷酸化的p38(p-p38)MAPK以及磷酸化的c-Jun氨基未端激酶(p-c-Jun)的表达升高,而HSP70的表达降低(P<0.05)。与酒精组相比,质粒组ALT和AST降低,肝损伤评分降低(P<0.05),糖原含量增多;ADAM8、CYP2E1、p-ERK1/2、p-p38 MAPK以及p-c-Jun的表达降低,HSP70的表达增加(P<0.05)。结论 利用CRISPR/Cas9技术靶向抑制ADAM8的表达,可以通过MAPK信号通路改善小鼠急性酒精性肝损伤。

解整合素金属蛋白酶19(ADAM19)与子痫前期的相关性研究

通过对孕妇胎盘组织和外周血中解整合素金属蛋白酶19(ADAM19)的检测,探讨ADAM19与子痫前期发病的关系.将病人分为研究组(子痫前期组)和对照组(正常妊娠组),子痫前期组病人中早发型50例,晚发型44例,对照组病人50例.于临近分娩时取静脉血,分娩后取胎盘组织,应用免疫组织化学技术和免疫印迹技术对胎盘组织中ADAM19蛋白进行检测,用ELISA法检测两组血浆中ADAM19的水平.结果显示,胎盘组织中ADAM19分布在多种滋养层细胞中,包括细胞滋养层细胞、合体滋养层细胞和一些绒毛间质结缔组织细胞、毛细血管中,其阳性信号定位于细胞膜上和细胞质中;ADAM19的蛋白表达正常胎盘中为0.34±0.03,晚发型子痫前期组为0.53±0.02,早发型子痫前期组为0.82±0.03,三者间比较差异均有统计学意义(P<0.01).正常孕妇血浆中ADAM19为(4.52±0.10)μg/L,晚发型子痫前期为(4.32±0.11)μg/L,早发型子痫前期(3.78±0.10)μg/L.早发型子痫前期组与对照组比较有统计学差异(P<0.001),晚发型子痫前期组与对照组比较无统计学差异(P>0.05),早发型与晚发型子痫前期比较有统计学差异(P<0.001).结果表明,子痫前期胎盘组织中ADAM19过度表达可能与子痫前期的发生和发展有关,ADAM19有可能作为预测子痫前期发病的分子标志.

去整合素金属蛋白酶10(ADAM10)在喉癌组织中的表达和临床意义

目的研究去整合素金属蛋白酶10(a disintegrin and metalloprotease 10,ADAM10)在喉癌中的表达及其临床意义。方法采用实时荧光定量RT-PCR法(n=21)与组织芯片免疫组化法(n=62)检测ADAM10在喉癌组织与正常黏膜组织中的表达情况,并分析其差异。结果实时荧光定量RT-PCR结果显示喉癌组织中ADAM10表达显著高于正常黏膜组织中的表达(P<0.001),其倍数为2.691±1.568。组织芯片结果显示ADAM10在喉癌组织中阳性面积百分比为15.243±7.824,在正常黏膜组织中则为1.887±1.918,喉癌组织中ADAM10的表达量高于正常黏膜组织(P<0.001)。ADAM10的表达与组织学分级相关,与其他临床参数无关。结论 ADAM10在喉癌组织中有高表达,其表达与肿瘤组织学分级相关。

ADAM19在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义

目的:研究adamalysin19(ADAM 19)在子宫内膜癌中的表达以及相关的临床特征、病理特点。方法:应用免疫组织化学的方法检测51例子宫内膜癌、33例正常子宫内膜中ADAM 19蛋白的表达情况,并分析与临床特征及病理学特点的关系。结果:ADAM 19蛋白在子宫内膜癌中的表达明显高于正常子宫内膜组织,两者比较差异有统计学意义(P<0.001);病理类型为腺鳞癌、鳞状细胞癌、浆液性乳头状腺癌、透明细胞癌、未分化癌等类型者ADAM 19的表达明显高于子宫内膜样癌及腺棘癌(P=0.042);组织学低分化、无分化者的表达明显高于中高分化者(P=0.028);有肌层浸润者ADAM 19的表达有高于无肌层侵润者的趋势(P=0.065);但临床资料显示ADAM 19的表达与临床分期、淋巴结转移无明显相关性(P=0.328及P=0.529)。结论:子宫内膜癌组织中ADAM 19蛋白呈过表达,ADAM 19与子宫内膜癌的病程进展及预后相关,有可能成为一新的临床观察指标。

新疆地区哈萨克族慢性阻塞性肺疾病易感性与ADAM33基因多态性的关系

目的探究整合素-金属蛋白酶33(ADAM33)基因F+1、S2、T1、ST+5位点多态性与新疆地区哈萨克族慢性阻塞性肺疾病(COPD)易感性的关系。方法选择193例对照组及197例COPD病例组,提取外周血标本DNA,运用SNaPshot SNP分型技术检测ADAM33基因各位点多态性。结果病例组与对照组F+1位点的基因型及等位基因频率分布比较差异有统计学意义(P<0.05)。病例组中,F+1位点CC、CT、TT 3种基因型肺功能相关指标第1秒用力呼气容积(FEV1)预计值(%)、FEV1/用力肺活量(FVC)比较差异无统计学意义。病例组与对照组S2、ST+5、T1位点的基因型及等位基因频率分布比较差异无统计学意义;F+1、S2位点进行单体型分析显示Hap1(CC)在对照组和病例组分布差异有统计学意义(P<0.05),且OR<1,表明此单体型可能降低发生COPD的风险;Hap3(TC)在对照组和病例组分布差异有统计学意义(P<0.05),且OR>1,表明此单体型可能增加了COPD发病的风险;Hap2(TG)、Hap4(CG)单体型在2组间分布差异无统计学意义;病例组及对照组T1、ST+5位点3种单体型比较差异无统计学意义。结论 ADAM33基因F+1位点多态性可能与新疆哈萨克族人群COPD的发生有关。

ADAMTS在椎间盘退行性变中的作用

椎间盘退行性变（IDD）是诸多脊柱退行性疾病的病理基础,尽管其发生机制仍没有完全清楚,但是普遍认为椎间盘细胞外基质（ECM）降解代谢的显著增加是重要原因之一。在过去10年中,通过利用人体样本与动物模型对椎间盘ECM降解的研究已经取得了巨大的进步,其中认为降解ECM（如聚蛋白聚糖）的关键酶——含血小板凝血酶敏感蛋白的解聚蛋白样金属蛋白酶（ADAMTS）家族在此过程中发挥了重要的作用,

ADAM33基因S1、S2位点单核苷酸多态性与新疆维吾尔族COPD易感性的关系

目的探讨ADAM 33基因S1、S2位点单核苷酸多态性(SNP)与中国新疆维吾尔族慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者易感性的关系。方法收集217例COPD患者(病例组)和218例健康对照者(对照组)外周血标本,提取标本DNA,采用美国生物应用系统公司(ABI)SNa Pshot SNP分型技术检测ADAM 33基因S1、S2位点单核苷酸多态性。结果病例组和对照组S1位点CC、CT、TT 3种基因型分布和C、T等位基因分布频率比较差异无统计学意义;S2位点CC、CG、GG 3种基因型分布和C、G等位基因分布频率比较差异无统计学意义。病例组S1、S2位点基因型与肺功能相关临床指标的关系显示:S1、S2位点3种基因型第1秒用力呼气容积(FEV1)预计值(%)比较、FEV1/用力肺活量(FVC)比较差异无统计学意义。单体型分析结果显示3种单体型在病例组和对照组中比较差异无统计学意义。结论 ADAM 33基因S1、S2位点SNPs与新疆维吾尔族人群COPD患者易感性无明显相关性。

宫腔粘连组织中解离素-金属蛋白酶15、17的表达

目的研究宫腔创伤微环境中解离素-金属蛋白酶(a disintegrin and metalloproteinase,ADAM)家族成员ADAM-15、17的表达,探讨宫腔粘连(intrauterin adhesion,IUA)的分子生物学机制。方法选择就诊于宁夏医科大学总医院经宫腔镜诊断为IUA的68例(IUA组)及同期主因"不孕症"行宫腔镜检查为正常宫腔的18例患者(对照组)为研究对象,IUA组根据粘连轻、中、重程度分为IUA-I(n=28)、IUA-II(n=22)和IUA-III(n=18)级,Western blot和real-time PCR方法分别检测IUA组粘连组织以及对照组子宫内膜中的ADAM-15、ADAM-17的mRNA及蛋白表达水平。结果与对照组相比,ADAM-15和ADAM-17蛋白水平及RNA转录水平都显著升高(P<0.05),IUA组间比较,ADAM-15和ADAM-17蛋白水平及RNA转录水平在IUA-III级中升高最为明显,其表达水平与宫腔粘连的严重程度具有相关性。其表达水平与宫腔粘连的严重程度具有相关性。结论 ADAM-15和ADAM-17在宫腔粘连的病理形成过程中具有重要的调节作用,可能成为宫腔粘连治疗及预后判断的分子生物学指标。

敲低阿霉素心肌病大鼠心肌细胞ADAM10后大鼠心功能的改善及机制

目的建立阿霉素心肌病动物模型,观察解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)小干涉RNA(siRNA)重组慢病毒对神经钙黏素(N-cadherin)加工水解途径的调控。方法 SD大鼠腹腔注射阿霉素,建立阿霉素心肌病大鼠模型。将ADAM10 siRNA重组慢病毒进行心内注射,分为模型组、重组慢病毒治疗组、空白载体组及正常对照组。分离原代心肌细胞,观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,确定感染效率。超声检测各组大鼠心功能,HE染色观察心肌组织病变情况,Western blot法检测心肌细胞N-cadherin在ADAM10水解后产生的C末端片段1(CTF1)的蛋白水平,免疫组织化学染色检测心肌组织N-cadherin的表达和分布。结果原代培养的感染后心肌细胞可见大量GFP表达,说明慢病毒成功感染心肌细胞;与阿霉素心肌病组相比,ADAM10 siRNA重组慢病毒治疗组死亡率下降,心功能及心肌组织形态明显改善,心肌细胞N-cadherin蛋白水平增加并主要定位于细胞表面、CTF1蛋白水平降低。结论敲低ADAM10水平,增加阿霉素心肌病大鼠心肌细胞N-cadherin的表达、降低CTF1的表达,改善心功能。

人脑胶质瘤中ADAM17、EGFR和CD4^+CD25^+Treg的表达及免疫调节机制

目的探讨人脑胶质瘤中解聚素-金属蛋白酶(ADAM)17、表皮生长因子受体(EGFR)和CD4^+CD25^+Treg的表达及免疫调节机制。方法选取人脑胶质瘤标本52例,其中Ⅰ~Ⅱ级(低度恶性胶质瘤)19例,Ⅲ~Ⅳ级(高度恶性胶质瘤)33例;另取10例因颅脑损伤行手术治疗切取的正常脑组织标本为对照组。免疫组化染色观察标本组织中ADAM17、EGFR蛋白阳性表达情况;Western印迹和RT-PCR检测其中ADAM17、EGFR蛋白和mRNA表达量;流式细胞术检测CD4^+CD25^+Treg细胞比率。结果胶质瘤组织中ADAM17蛋白阳性表达率明显高于正常脑组织(P<0.01);高度恶性组织明显高于低度恶性组织(P<0.05)。脑胶质瘤组织ADAM17、EGFR蛋白和mRNA表达量明显高于正常脑组织;高度恶性脑组织表达量明显高于低度恶性脑组织(P<0.01)。脑胶质瘤组织CD4^+CD25^+Treg细胞比率明显高于正常脑组织,且随恶性程度增加而升高(P<0.01)。脑胶质瘤组织中ADAM17、EGFR蛋白和mRNA表达水平均与CD4^+CD25^+Treg细胞比率呈正相关(P<0.05)。结论 ADAM17、EGFR和CD4^+CD25^+Treg在人脑胶质瘤中高表达且与病理分级相关;ADAM17、EGFR可能通过诱发CD4^+CD25^+Treg的负性免疫调节而减弱免疫监视,促进胶质瘤的发生、发展。

SOX-9通过调控ADAMTS保护椎间盘

目的探讨转录因子SOX-9和含Ⅰ型血小板反应蛋白的解聚蛋白样金属蛋白酶(ADAMTS)对椎间盘退行性变的影响及二者之间的关系,为进一步理解椎间盘退行性变发生机制提供实验依据。方法收集不同退行性变等级的椎间盘组织,通过实时荧光定量PCR、免疫组织化学染色和蛋白质印迹分析等方法检测椎间盘组织中SOX-9、DAMTS-4、ADAMTS-5的表达。原代培养正常椎间盘中的髓核细胞,通过转染小干扰RNA(siRNA)干扰SOX-9、ADAMTS-4、ADAMTS-5的表达,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹分析检测细胞外基质成分--Ⅱ型胶原(COL2A1)、蛋白聚糖(ACAN)、软骨寡聚物基质蛋白(COMP)的表达变化,通过荧光素酶实验评估SOX-9对ADAMTS-4、ADAMTS-5启动子活性的影响。结果与正常椎间盘组织相比,发生退行性变椎间盘组织中SOX-9表达降低,而ADAMTS-4、ADAMTS-5表达升高。单纯干扰髓核细胞中SOX-9的表达,COL2A1、ACAN及COMP表达均下调,ADAMTS-4、ADAMTS-5表达上调;同时干扰SOX-9、ADAMTS-4及ADAMTS-5表达后,COL2A1、ACAN及COMP表达较单纯干扰SOX-9表达明显升高。荧光素酶实验结果显示SOX-9可显著下调ADAMTS-4、ADAMTS-5启动子活性,提示二者具有直接调控关系。结论SOX-9通过直接调控ADAMTS-4、ADAMTS-5表达进而影响髓核细胞外基质成分的表达,最终发挥保护椎间盘的作用。

精卵融合过程中关键精子膜蛋白的研究进展

受精是一个复杂的过程,其中精卵融合是受精过程的关键步骤。本文详细阐述精卵质膜融合过程中精子膜上相关蛋白成分,如:Izumo蛋白、ADAMs(a distintegrin and metalloprotease)基因家族蛋白、富含半胱氨酸分泌蛋白(Crisp)基因家族蛋白的作用。这对于深入了解精卵融合的机制,提高临床上男性不育的诊治水平,并对避孕药物的研制具有现实意义。

解整合素-金属蛋白酶12与自然流产的相关性研究

目的探讨解整合素-金属蛋白酶12(ADAM12)与自然流产的相关性。方法利用时间分辨检测技术,对1160例孕妇,其中正常妊娠组1064例,自然流产96例血清中ADAM12进行了检测。结果正常妊娠组血清中ADAM12含量随孕龄的进展稳定增加,自然流产组ADAM12含量明显低于同孕周正常妊娠组,差异有统计学意义(P【0.01)。结论孕妇ADAM12的检测在预测自然流产方面有较高的准确性,在异常妊娠检测方面有较大的临床价值。

MicroRNA-145通过ADAM28抑制人肾癌细胞A-498上皮-间充质转化功能

目的:探讨微小RNA(miR-145)对人肾癌细胞A-498上皮-间充质转化(EMT)功能的影响及其相关机制。方法:将A-498肾癌细胞株分别转染miR-145模拟物(M145)和模拟物阴性对照(MNC),分别作为M145组和MNC组,并设立空白对照(MC)组,采用RT-qPCR法检测各组细胞miR-145水平。Transwell实验检测3组细胞侵袭能力的变化。Western blot法检测3组细胞波型蛋白(vimentin)、E-cadherin和ADAM28表达水平。应用生物信息学方法预测miR-145的靶基因。采用Western blot法检测ADAM28过表达对miR-145抑制EMT的拮抗作用。双萤光素酶报告基因实验验证miR-145与ADAM28的关系。结果:与MC组相比,M145组miR-145的表达水平显著上调(P<0.05)。M145组侵袭细胞数量显著低于MC组(P<0.05)。M145组细胞vimentin蛋白表达量显著降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达量显著升高(P<0.05),ADAM28蛋白表达量显著降低(P<0.05)。ADAM28过表达M145组肾癌细胞中vimentin蛋白表达量显著升高(P<0.05),E-cadherin蛋白表达量显著降低(P<0.05)。双萤光素酶报告基因实验结果显示ADAM28为miR-145的下游靶基因。结论:miR-145可能通过降低下游靶基因ADAM28水平影响EMT相关蛋白表达,从而抑制人肾癌细胞A-498的EMT过程。

血清ADAM10与2型糖尿病、冠状动脉粥样硬化的相关性研究

目的研究血清解整合素-金属蛋白酶10(A disintegrin and metalloproteinase10,ADAM10)水平与冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary heart disease,CHD)、2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)相关性,并探讨其相关机制及影响因素。方法选取2017年9月~2018年6月昆明医科大学第一附属医院收治的T2DM患者及CHD患者作为研究对象进行研究,根据病史分为T2DM组(100例)、CHD组(100例)和T2DM-CHD组(100例),选取同期笔者医院体检中心的健康体检者作为对照组(100例)。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组研究对象的血清ADAM10水平。结果T2DM组1833.44±778.69pg/ml、CHD组2015.95±802.10pg/ml、T2DM-CHD组1983.09±734.88pg/ml血清ADAM10均显著高于对照组1485.77±530.12pg/ml,差异有统计学意义(P<0.05)。经协方差分析排除混杂因素干预后,CHD组、T2DM-CHD组患者血清ADAM10仍高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。多元逐步回归分析显示,高密度脂蛋白胆固醇(t=-5.153,P<0.05)与ADAM10呈独立负相关。结论血清ADAM10水平对CHD有一定的参考价值。

MMP-2、ADAM17在骨肉瘤组织中的表达及其临床意义

【目的】探讨基质金属蛋白酶2(MMP-2)及整合素-金属蛋白酶17(ADAM17)在骨肉瘤组织中的表达水平及其临床意义。【方法】收集本院骨科开放性手术中所切除的53例骨肉瘤组织及癌旁正常组织(距肿瘤边缘至少2 cm),检测并比较骨肉瘤组织及癌旁正常组织中的MMP-2及ADAM17的表达水平,并分析两者的相关性及其与骨肉瘤患者临床病理特征的关系。【结果】MMP-2在骨肉瘤组织中的阳性表达率为73.58%,显著高于癌旁正常组织的18.87%,ADAM17在骨肉瘤组织中的阳性表达率为79.25%,显著高于癌旁正常组织的5.66%,其差异均有统计学意义(P<0.05);MMP-2、ADAM17蛋白在骨肉瘤组织中的表达水平显著高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05);MMP-2、ADAM17的阳性表达率与肿瘤是否有远处转移、Ennecking分期有关(P<0.05),与患者年龄、性别及肿瘤直径无关(P>0.05)。Spearman相关性结果显示:MMP-2与ADAM17在骨肉瘤组织中的表达呈正相关(P<0.05)。【结论】MMP-2、ADAM17在骨肉瘤组中的阳性表达率显著高于癌旁正常组织,其表达与肿瘤是否远处转移及Ennecking分期有关,且骨肉瘤组织中MMP-2表达与ADAM17表达呈正相关,对于骨肉瘤的诊断、预后及治疗具有重要意义。

血管性血友病因子裂解酶间隔区结构域突变对酶生物学功能的影响

目的:探讨血管性血友病因子裂解酶ADAM金属肽酶含血小板反应蛋白1型13(ADAMTS13)间隔区结构域在血管性血友病因子(vWF)裂解过程中的生物学功能,阐明ADAMTS13在血栓性血小板减少性紫癜(TTP)发病机制中的作用。方法:将ADAMTS13间隔区结构域中的氨基酸残基TEDRLPR以点突变技术逐个基因突变(突变体M1~M7),将构建的ADAMTS13与其突变体质粒转染至人胚肾HEK293细胞,稳定表达后提纯重组蛋白。观察野生型和突变型ADAMTS13在变性条件、剪切应力作用和ADAMTS13抗体处理后裂解vWF的能力。结果:荧光共振能量转移(FRET)实验,与野生型ADAMTS13比较,ADAMTS13突变体M4(R635A)和突变体M7(R638A)对FRET-vWF73剪切能力降低(P<0.05)。变性条件下,野生型ADAMTS13可以将vWF多聚体裂解,与野生型ADAMTS13比较,ADAMTS13突变体M4(R635A)和突变体M7(R638A)的裂解活性明显降低(P<0.01)。在体外剪切应力作用下,与野生型ADAMTS13比较,ADAMTS13突变体M4(R635A)和突变体M7(R638A)裂解vWF多聚体的能力明显降低(P<0.01)。与野生型ADAMTS13比较,ADAMTS13突变体M4(R635A)和突变体M7(R638A)与vWF之间的结合力差异无统计学意义(P>0.05),表明ADAMTS13的C末端与vWF之间存在多个结合位点。ADAMTS13抗体处理可在一定程度上抑制野生型和突变型ADAMTS13裂解vWF的能力。结论:间隔区突变后ADAMTS13的活性降低。ADAMTS13突变体M4(R635A)和突变体M7(R638A)可能是ADAMTS13在底物识别时的重要作用位点。

miR-25-3p下调ADAM10表达阻断Notch信号通路抑制P19细胞向心肌细胞分化

目的探讨miR-25-3p靶向解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)调控Notch信号通路对P19细胞向心肌细胞分化的影响。方法采用二甲基亚砜(DMSO)诱导P19细胞向心肌细胞分化,分别收集诱导分化第0、5、10天的细胞,实时荧光定量PCR检测诱导分化过程中心肌分化标志物GATA结合蛋白4(GATA4)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)、心房利钠尿多肽(ANP)的mRNA以及miR-25-3p水平, Western blot法检测诱导分化过程中ADAM10蛋白水平。通过逆转录病毒感染P19细胞过表达miR-25-3p,采用实时荧光定量PCR检测感染后P19细胞中miR-25-3p水平, Western blot法检测感染后P19细胞ADAM10蛋白水平。生物信息学软件预测并通过荧光素酶报告实验验证miR-25-3p与ADAM10之间的靶向结合作用。感染后的P19细胞经DMSO诱导分化10d后,免疫荧光实验检测细胞中心肌肌钙蛋白I(cTnI)蛋白的表达情况,并计算心肌细胞分化率;Western blot法检测GATA4、cTnT、ANP以及Notch信号通路相关蛋白Notch1、Hes家族bHLH转录因子1(Hes1)、Hairy相关转录因子1(Hey1)和Hey2蛋白水平。结果P19细胞向心肌细胞诱导分化的第0、5、10天过程中, GATA4、cTnT、ANP的mRNA水平及ADAM10蛋白水平均逐渐增加,而miR-25-3p水平逐渐降低;逆转录病毒感染后, P19细胞中miR-25-3p水平显著增加,而ADAM10蛋白水平显著降低;生物信息学分析证实ADAM10为miR-25-3p的靶基因;诱导分化10 d后,过表达miR-25-3p可显著降低心肌细胞分化率,下调GATA4、cTnT、ANP及Notch信号通路相关分子Notch1、Hes1、Hey1和Hey2的蛋白水平。结论miR-25-3p可显著抑制P19细胞向心肌细胞分化,其机制可能与其靶向抑制ADAM10表达,进而抑制Notch信号通路的激活有关。

结直肠癌ADAMs表达谱及其ADAM-28的表达及意义

目的探讨金属蛋白酶解离素(ADAMs)家族成员ADAM-8、ADAM-9、ADAM-10、ADAM-12、ADAM-15、ADAM-17、ADAM-19、ADAM-28、ADAM-33在结直肠癌中的表达分布,并分析ADAM-28表达与结直肠癌临床病理特征的关系及其对预后的影响。方法实时荧光定量PCR(QPCR)检测6例新鲜结直肠癌组织和对应癌旁组织中ADAMs mRNA的表达,Western blotting检测ADAM-28蛋白在上述样本中的表达。免疫组化法检测ADAM-28在218例结直肠癌组织中的表达,分析ADAM-28表达与临床病理特征和预后的关系。结果 ADAM-8、ADAM-9、ADAM-17、ADAM-28和ADAM-33 mRNAs在结直肠癌组织中表达升高,ADAM-12表达下调,ADAM-10、ADAM-15和ADAM-19无明显变化。ADAM-28蛋白表达在结直肠癌组织中也升高。免疫组化检测显示,结直肠癌组织中ADAM-28的阳性表达率为68.8%(150/218),其表达与淋巴结转移(P=0.032)、TNM分期(P=0.032)和分化程度(P=0.019)有关。ADAM-28阳性表达者的中位总生存时间(OS)明显劣于ADAM阴性表达者(36.75个月vs.95.10个月),差异有统计学意义(P<0.001)。Cox多因素分析显示,ADAM-28是影响OS的独立因素(P<0.05)。结论 ADAM-28表达与结直肠癌的发生、发展密切相关,是潜在评估结直肠癌预后的预测因子。

敲低TFAM通过上调ROS/ADAM17促进可溶型MICA生成抑制NK细胞杀伤人肝癌细胞的作用

目的探索线粒体转录因子A(TFAM)表达下调促进肝癌细胞逃避自然杀伤(NK)细胞的作用及机制。方法免疫组织化学染色法检测肝癌及癌旁组织中TFAM的表达,分析肝癌组织中TFAM表达水平与肝癌患者临床参数及预后的相关性。利用慢病毒载体构建TFAM稳定干涉及过表达的肝癌细胞株,与NKL细胞共培养,ELISA检测培养上清中可溶性MHCⅠ类链相关分子A(sMICA)水平及NK细胞活化相关细胞因子的变化;流式细胞术检测肝癌细胞膜MICA的水平;乳酸脱氢酶(LDH)释放试验检测共培养的NKL细胞杀伤活性。调控共培养上清中sMICA的含量后,ELISA及LDH试验检测细胞因子及NKL细胞杀伤功能是否受到影响。调控TFAM干涉或过表达肝癌细胞内的活性氧(ROS)水平和解整合素金属蛋白酶17(ADAM17)表达,ELISA检测sMICA变化。结果与癌旁组织相比,TFAM在肝癌组织中显著低表达,且TFAM低表达肝癌患者其总生存期和无病生存期均显著低于TFAM高表达肝癌患者。敲低肝癌细胞TFAM后,细胞膜型MICA水平显著降低,而培养上清中的sMICA显著增加,细胞内ROS水平及ADAM17的表达均显著增强;肝癌细胞过表达TFAM后则相反。将TFAM稳定干涉的肝癌细胞与NKL细胞共培养后可显著降低NKL细胞活化细胞因子的分泌及杀伤功能,反之,与TFAM过表达的肝癌细胞与NKL细胞共培养后其活化相关细胞因子的表达及杀伤功能均显著增强。在肝癌细胞与NKL细胞共培养上清中加入MICA中和抗体,可显著恢复肝癌细胞TFAM干涉所导致的NKL细胞活性抑制及杀伤功能减弱;在共培养上清中加入重组MICA后,TFAM过表达所致的NK细胞活化及杀伤功能增强被显著抑制。敲低TFAM引起sMICA生成增加,但中和ROS或者敲低ADAM17后,可显著抑制sMICA生成;TFAM过表达导致sMICA生成减少,加入过氧化氢(H2O2)或者过表达ADAM17后,可显著增加sMICA生成。结论敲低TFAM上调ROS/ADAM17通路促进sMICA生成,抑制NK细胞的杀伤力。