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ADAM28基因原核表达载体的构建和在大肠杆菌中的融合表达
被引量:
4
1
作者
赵征
文玲英
+2 位作者
金岩
轩东英
轩昆
《牙体牙髓牙周病学杂志》
CAS
2005年第5期246-250,共5页
目的:利用消减杂交技术克隆出牙齿发育相关基因ADAM28。方法:本研究为构建ADAM28基因的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导其表达并纯化出ADAM28蛋白;采用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)扩增出ADAM28基因的蛋白编码序列,克隆到中间载体pMD18...
目的:利用消减杂交技术克隆出牙齿发育相关基因ADAM28。方法:本研究为构建ADAM28基因的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导其表达并纯化出ADAM28蛋白;采用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)扩增出ADAM28基因的蛋白编码序列,克隆到中间载体pMD18-TVector中产生pMD18-T-ADAM28,再经双酶切得到ADAM28片段定向克隆到pGEX-4T-1载体中,构建融合表达载体pGEX-4T-ADAM28;在大肠杆菌中利用IPTG进行诱导表达,得到GST-ADAM28融合蛋白,并经SDS-PAGE电泳初步纯化。结果:①成功构建融合表达载体pGEX-4T-ADAM28,并经酶切鉴定、PCR鉴定和测序验证显示插入的ADAM28序列正确,阅读框架完整,未发现突变。②得到初步纯化的GST-ADAM28融合蛋白。经IPTG诱导后出现一条约35.3×103的新蛋白带。结论:ADAM28基因编码蛋白质能够在原核细胞中表达并纯化,为进一步研究该蛋白质的功能打下基础。
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关键词
adam28基因
原核表达载体
融合蛋白
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职称材料
牦牛附睾ADAM28基因CDS区的克隆和表达研究
2
作者
王红梅
杨刘玥玲
+3 位作者
吴逸韬
杨献康
郑旭昕
赵旺生
《中国畜牧杂志》
CAS
北大核心
2021年第6期120-123,共4页
为研究牦牛附睾组织中精子成熟的相关机理,本研究通过分子技术对牦牛ADAM28基因进行克隆,分析ADAM28基因的生物信息学特征及其在附睾组织中的表达特点。结果显示:牦牛ADAM28基因CDS区有2 235 bp,编码744个氨基酸,所编码的蛋白为中性蛋白...
为研究牦牛附睾组织中精子成熟的相关机理,本研究通过分子技术对牦牛ADAM28基因进行克隆,分析ADAM28基因的生物信息学特征及其在附睾组织中的表达特点。结果显示:牦牛ADAM28基因CDS区有2 235 bp,编码744个氨基酸,所编码的蛋白为中性蛋白,具有亲水性且稳定,存在跨膜螺旋区但没有信号肽;牦牛ADAM28基因在附睾头部的表达显著高于附睾体和附睾尾。
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关键词
牦牛
附睾
adam28基因
表达
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职称材料
牙齿发育相关基因adam28多克隆抗体的制备及鉴定
被引量:
1
3
作者
赵征
文玲英
+2 位作者
金岩
杨曦
轩东英
《实用口腔医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第2期166-170,共5页
目的制备及鉴定抗ADAM28的多克隆抗体。方法采用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)扩增出adam28基因的蛋白编码区序列,克隆到中间载体pMD18-T Vector中,再经双酶切得到adam28片段定向克隆到pGEX-4T-1载体中,构建融合表达载体pGEX-4T-adam28...
目的制备及鉴定抗ADAM28的多克隆抗体。方法采用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)扩增出adam28基因的蛋白编码区序列,克隆到中间载体pMD18-T Vector中,再经双酶切得到adam28片段定向克隆到pGEX-4T-1载体中,构建融合表达载体pGEX-4T-adam28,在大肠杆菌中用IPTG进行诱导表达,得到GST-ADAM28融合蛋白,经过初步纯化及SDS-PAGE电泳,在35300的新蛋白带处直接割胶,作为抗原免疫新西兰大白兔后获取抗体。结果成功构建融合表达载体pGEX-4T-adam28,得到初步纯化的GST-ADAM28融合蛋白,免疫兔子1个月后,获得免疫血清,盐析法纯化得到多克隆抗体。Western印迹结果显示所得到的抗体具有较高的特异性,ELISA分析证实其效价可达1∶16000。结论成功制备出高效价的抗ADAM28多克隆抗体,为进一步研究ADAM28在牙齿发育中的作用和表达分布奠定基础。
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关键词
adam28基因
融合蛋白
多克隆抗体
免疫印迹
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职称材料
题名
ADAM28基因原核表达载体的构建和在大肠杆菌中的融合表达
被引量:
4
1
作者
赵征
文玲英
金岩
轩东英
轩昆
机构
第四军医大学口腔医学院
出处
《牙体牙髓牙周病学杂志》
CAS
2005年第5期246-250,共5页
文摘
目的:利用消减杂交技术克隆出牙齿发育相关基因ADAM28。方法:本研究为构建ADAM28基因的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导其表达并纯化出ADAM28蛋白;采用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)扩增出ADAM28基因的蛋白编码序列,克隆到中间载体pMD18-TVector中产生pMD18-T-ADAM28,再经双酶切得到ADAM28片段定向克隆到pGEX-4T-1载体中,构建融合表达载体pGEX-4T-ADAM28;在大肠杆菌中利用IPTG进行诱导表达,得到GST-ADAM28融合蛋白,并经SDS-PAGE电泳初步纯化。结果:①成功构建融合表达载体pGEX-4T-ADAM28,并经酶切鉴定、PCR鉴定和测序验证显示插入的ADAM28序列正确,阅读框架完整,未发现突变。②得到初步纯化的GST-ADAM28融合蛋白。经IPTG诱导后出现一条约35.3×103的新蛋白带。结论:ADAM28基因编码蛋白质能够在原核细胞中表达并纯化,为进一步研究该蛋白质的功能打下基础。
关键词
adam28基因
原核表达载体
融合蛋白
Keywords
adam
28
gene
prokaryotic expression vector
fusion protein
分类号
Q344.11 [生物学—遗传学]
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职称材料
题名
牦牛附睾ADAM28基因CDS区的克隆和表达研究
2
作者
王红梅
杨刘玥玲
吴逸韬
杨献康
郑旭昕
赵旺生
机构
西南科技大学生命科学与工程学院
出处
《中国畜牧杂志》
CAS
北大核心
2021年第6期120-123,共4页
基金
国家自然科学基金(31601946)
四川省科技计划(2021YFH0101)
西南科技大学龙山人才支持计划(17LZX671、18lzx661)。
文摘
为研究牦牛附睾组织中精子成熟的相关机理,本研究通过分子技术对牦牛ADAM28基因进行克隆,分析ADAM28基因的生物信息学特征及其在附睾组织中的表达特点。结果显示:牦牛ADAM28基因CDS区有2 235 bp,编码744个氨基酸,所编码的蛋白为中性蛋白,具有亲水性且稳定,存在跨膜螺旋区但没有信号肽;牦牛ADAM28基因在附睾头部的表达显著高于附睾体和附睾尾。
关键词
牦牛
附睾
adam28基因
表达
分类号
S823.2 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
牙齿发育相关基因adam28多克隆抗体的制备及鉴定
被引量:
1
3
作者
赵征
文玲英
金岩
杨曦
轩东英
机构
西安第四军医大学口腔医学院儿童口腔科
西安第四军医大学组织工程研发中心
西安第四军医大学医学遗传学与发育生物学教研室
出处
《实用口腔医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第2期166-170,共5页
基金
国家自然科学基金资助课题(30572046)
文摘
目的制备及鉴定抗ADAM28的多克隆抗体。方法采用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)扩增出adam28基因的蛋白编码区序列,克隆到中间载体pMD18-T Vector中,再经双酶切得到adam28片段定向克隆到pGEX-4T-1载体中,构建融合表达载体pGEX-4T-adam28,在大肠杆菌中用IPTG进行诱导表达,得到GST-ADAM28融合蛋白,经过初步纯化及SDS-PAGE电泳,在35300的新蛋白带处直接割胶,作为抗原免疫新西兰大白兔后获取抗体。结果成功构建融合表达载体pGEX-4T-adam28,得到初步纯化的GST-ADAM28融合蛋白,免疫兔子1个月后,获得免疫血清,盐析法纯化得到多克隆抗体。Western印迹结果显示所得到的抗体具有较高的特异性,ELISA分析证实其效价可达1∶16000。结论成功制备出高效价的抗ADAM28多克隆抗体,为进一步研究ADAM28在牙齿发育中的作用和表达分布奠定基础。
关键词
adam28基因
融合蛋白
多克隆抗体
免疫印迹
Keywords
adam
28
gene
Fusion protein
Polyclonal antibody
Western blot
分类号
R78 [医药卫生—口腔医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
ADAM28基因原核表达载体的构建和在大肠杆菌中的融合表达
赵征
文玲英
金岩
轩东英
轩昆
《牙体牙髓牙周病学杂志》
CAS
2005
4
下载PDF
职称材料
2
牦牛附睾ADAM28基因CDS区的克隆和表达研究
王红梅
杨刘玥玲
吴逸韬
杨献康
郑旭昕
赵旺生
《中国畜牧杂志》
CAS
北大核心
2021
0
下载PDF
职称材料
3
牙齿发育相关基因adam28多克隆抗体的制备及鉴定
赵征
文玲英
金岩
杨曦
轩东英
《实用口腔医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006
1
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
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参考文献
引证文献
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