野生型和功能增强型ADAMTS13蛋白酶分子的表达及功能鉴定

背景:血管性血友病因子水解蛋白酶13(a disintegrin and metalloproteinase with a thrombospondin type 1motif,member 13,ADAMTS13)可结合并酶切血管性血友病因子,在防止血小板过多聚集和血栓的形成中起到关键作用。重组ADAMTS13通常选择在真核细胞中表达分泌,然而对于其表达纯化目前仍缺乏一个明确高效的途径。目的:寻找合适的宿主细胞,得到稳定表达野生型ADAMTS13和功能增强型ADAMTS13的细胞株,建立高纯度ADAMTS13的纯化方法,进而研究其生物学功能。方法:以野生型ADAMTS13重组质粒为模板,利用位点突变试剂盒得到功能增强型ADAMTS13重组质粒。比较CHO-S细胞、CHO-K1细胞、293T细胞对ADAMTS13的表达效果,挑选出合适的宿主细胞。通过Ni柱亲和层析和分子筛纯化蛋白;采用7.5%SDS-PAGE、Western-blot鉴定野生型ADAMTS13和功能增强型ADAMTS13的纯度及特异性;利用原子力显微镜技术检测野生型及功能增强型ADAMTS13与血管性血友病因子A2的相互作用,鉴定两种蛋白的活性。结果与结论:相对于CHO-S和CHO-K1,293T细胞更适合作为野生型ADAMTS13和功能增强型ADAMTS13的表达宿主;经Ni柱亲和层析和分子筛纯化后,所得到的野生型ADAMTS13和功能增强型ADAMTS13质量浓度分别为103.7,149.7 mg/L,且两种蛋白纯度均约90%;原子力显微镜检测结果显示,野生型ADAMTS13、功能增强型ADAMTS13与血管性血友病因子A2的黏附频率分别为11.37%,14.70%,表明功能增强型ADAMTS13与血管性血友病因子A2的结合亲和力更高,这与近期ADAMTS13构象研究一致。

外力调控金属蛋白酶ADAMTS13构象和功能研究

目的金属蛋白酶ADAMTS13水解血管性血友病因子v WF减少血小板在血管受损处的过度聚集和血栓的形成。ADAMTS13存在多种构象态,但血流剪应力是否会介导ADAMTS13构象转换,其调控机制如何尚未清楚。方法利用流动腔技术对ADAMTS13施加不同的作用力并利用原子力显微镜(AFM)扫描技术其进行扫描,分析其分子构象特征。利用AFM拉伸技术对ADAMTS13进行力学加载,分析ADAMTS13分子解折叠力、分子长度和内部结构域间分子键生存时间。利用拉伸分子动力学模拟技术分析ADAMTS13解折叠过程。结果高流体剪应力(100 dyn/cm^(2))作用显著增加ADAMTS13分子的纵横比,分子的“闭合”态和“中间”态比例下降,而“伸展”态比例增加。AFM拉伸实验显示ADAMTS13发生解折叠后分子长度增加量呈双峰分布(10.3 nm和25.9 nm),平均解折叠力约为40 p N。ADAMTS13分子内部结构域间的分子键生存时间随作用力的增加呈先增加后减少的“逆锁键”-“滑移键”转换趋势。拉伸分子动力学模拟结果显示外力作用下,exosite-4先解离,exosite-3后解离。结论本研究表明,高流体剪应力可伸展ADAMTS13分子构象。“逆锁键”-“滑移键”转换机制调控ADAMTS13分子的内部结构域间相互作用和解折叠。本研究为外力调控ADAMTS13构象和功能提供了新的见解。

ADAMTS13蛋白C-末端结构调节其酶活性的研究

目的 初步研究并探讨ADAMTS13蛋白C-末端结构域变化在调节其酶活性方面的作用.方法 将人全长野生型及缺失C-末端TSP8和CUB结构域的截短型重组ADAMTS13基因转染Hela细胞并稳定表达.分别在静态尿素变性条件及蜗旋装置提供的高剪切力条件下观察这两种ADAMTS13蛋白酶切血管性血友病因子（vWF）的差异,同时利用Western blot技术及残余胶原结合实验对结果进行检测,另外利用ELISA法直接检测这两种ADAMTS13蛋白静态条件下结合vWF的能力.结果 在Hela细胞真核表达载体表达并纯化了全长野生型及缺失C-末端TSP8和CUB结构域的截短型ADAMTS13蛋白,分别利用鼠抗His-Tag单抗（抗载短型ADAMS113单）及兔抗人ADAMTS13多抗Western blot法鉴定了其特异性.静态尿素变性条件下,截短型ADAMTS13蛋白酶活性显著高于野生型,且静态条件下在结合vWF的能力方面,截短型也显著高于野生型;但在高剪切力作用下,只有全长野生型ADAMTS13可以对vWF进行剪切.结论 ADAMTS13蛋白C-末端TSP8和CUB结构域在不同条件下可以调节ADAMTS13蛋白结合vWF的能力,从而调节其酶活性的发挥,ADAMTS13蛋白C-末端在高剪切力作用条件下对ADAMTS13酶活性的发挥至关重要.

血浆ADAMTS-13联合Gas6对维持性血液透析尿毒症患者AVF血栓的预测价值研究

目的探讨血浆血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS-13)联合生长停滞特异性蛋白(Gas6)预测维持性血液透析(MHD)尿毒症患者自体动静脉内瘘(AVF)血栓的价值。方法回顾性分析148例以AVF为通路行MHD治疗的尿毒症患者的临床资料,并统计患者出院1 a内AVF血栓发生情况。对MHD尿毒症患者AVF血栓的影响因素进行单因素分析及多因素Logistic回归分析,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血浆ADAMTS-13、Gas6及两者联合对MHD尿毒症患者AVF血栓的预测价值。结果出院1 a内,148例MHD尿毒症患者发生AVF血栓31例(20.95%)。发生AVF血栓组C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)及血浆Gas6水平显著高于未发生组,铁蛋白及血浆ADAMTS-13水平显著低于未发生组(P<0.05或0.01)。Logistic回归分析显示,CRP、TNF-α、IL-6、血浆ADAMTS-13、血浆Gas6水平均是MHD尿毒症患者AVF血栓的影响因素(P<0.05或0.01)。ROC曲线显示,两者联合预测MHD尿毒症患者AVF血栓的曲线下面积(AUC)为0.836,高于血浆ADAMTS-13、Gas6单独预测的0.793和0.780。结论血浆ADAMTS-13、Gas6联合预测MHD尿毒症患者AVF血栓的效能较高。

人巨细胞病毒感染与孕妇脐血ADAMTS13蛋白酶活性相关性研究

目的 研究人类巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)感染与晚孕妇女脐血血管性血友病因子裂解蛋白(ADAMTS13)活性的相关性.方法 选择2014年10月份至2015年10月份在河南省人民医院产科住院分娩的470例健康晚孕孕妇,于分娩时采集脐血,PCR法检测脐血HCMV DNA和mRNA水平,残余胶原结合试验法检测脐血中ADAMTS13的活性,ELISA法检测脐血血友病因子(vWF)抗原水平.结果 470例孕晚期孕妇中,脐血HCMV DNA阳性率7.65％(36/470),其中21例HCMV mRNA阳性,阳性率58.3％ (21/36);HCMV DNA阴性孕妇(正常对照组,n=70) ADAMTS13活性为82.4±12.3％,显著高于宫内感染组(60.4±16.7％,P＜0.001);HCMV mRNA阳性病例ADAMTS13活性为(51.3±15.9％),显著低于HCMV mRNA阴性病例(65.8±19.1％,P＜0.01);正常对照组脐血vWF水平为(105.6±25.4) ng/ml,显著低于宫内感染组[(147.2±29.1)ng/ml;P ＜0.05];HCMV mRNA阳性病例脐血vWF水平为(161.3 ±23.3)ng/ml,显著高于HCMV mRNA阴性病例[(130.5±26.4) ng/ml;P =0.034];宫内感染组病例ADAMTS13活性水平与vWF抗原水平呈显著负相关(r=-0.343,P=0.014).结论 孕妇脐血ADAMTS13活性下降与HCMV宫内感染密切相关.

H型高血压患者血清DcR3、ADAMTS13浓度与其心血管功能及预后的关系

目的探究H型原发性高血压(高血压)患者血清诱骗受体3(decoy receptor 3,DcR3)、含1型血小板反应蛋白基序的去整合素金属蛋白酶13(A disintegrin and metalloproteinase with A thrombospondin type 1 motif member 13,ADAMTS13)浓度与其心血管功能及预后的关系。方法选取大庆市人民医院2020年6月至2022年6月收治的132例高血压患者作为观察对象,根据同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)浓度分为非H型高血压组40例和H型高血压组92例,根据预后情况将H型高血压患者分为预后良好组和预后不良组,并选择同期来大庆市人民医院健康体检的成年人70名作为对照组。采用酶联免疫吸附试验法检测受试者血清中DcR3、ADAMTS13浓度,Pearson法分析血清中DcR3、ADAMTS13浓度与心血管功能指标的相关性,多因素Logistic回归分析H型高血压患者1年预后不良的影响因素。绘制受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析血清DcR3、ADAMTS13浓度对H型高血压患者1年预后不良的预测价值。结果与对照组[(122.28±32.34)mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)、(48.16±8.65)mmHg、(8.59±1.25)mm、(118.34±34.25)g/m2、(1.48±0.34)g/L、(57.15±14.94)mg/L、(1.45±0.31)、70.28%±15.21%]比较,H型高血压组患者的收缩压[(139.35±38.21)mmHg]、脉压[(57.37±11.75)mmHg]、左心室后壁厚度(posterior wall thickness,PWT)[(11.69±2.00)mm]以及左心室质量指数(left ventricular mass index,LVMI)[(148.54±38.22)g/m2]显著升高,DcR3[(0.74±0.19)g/L]、ADAMTS13浓度[(14.13±4.62)mg/L]、二尖瓣舒张早期血流峰值/二尖瓣舒张晚期血流峰值(E-peak to A-peak of the mitral flow spectrum,E/A)(0.65±0.13)、左心室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)(64.26%±12.75%)显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);与非H型高血压组患者组比较,H型高血压组患者的DcR3、ADAMTS13浓度及E/A显著降低,LVMI显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。H型高血压组患者血清中DcR3、ADAMTS13浓度均与收缩压、脉压和LVMI呈负相关(P<0.05),而与E/A、LVEF呈正相关(P<0.05)。预后不良组患者的年龄显著高于预后良好组,E/A(0.38±0.07)、DcR3[(0.45±0.13)g/L]、ADAMTS13浓度[(8.45±2.11)mg/L]显著低于预后良好组[0.75±0.11、(0.85±0.27)g/L、(16.25±4.85)mg/L],差异有统计学意义(P<0.05)。DcR3、ADAMTS13是H型高血压患者预后不良的保护因素(P<0.05)。血清DcR3、ADAMTS13浓度单独及二者联合预测H型高血压患者1年发生预后不良的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.906、0.844、0.950。结论H型高血压疾病患者血清DcR3、ADAMTS13浓度降低,与心血管功能及预后密切相关,对该疾病的预后评估有重要价值。

VWF-分解蛋白酶(ADAMTS13)活性严重缺乏定义为血栓性微血管病患者-独特型

背景 ADAMTS13活性严重缺乏是血栓形成微血管病(TMA)的一种生物学危险因子。本文假设ADAMTS13活性严重缺乏与一组独特TMA群体相关。研究设计与方法 107例TMA成人患者经过血浆置换治疗,在治疗前检测患者ADAMTS13活性。患者未进行临床分类,但按照ADAMTS13活性严重缺乏(n=50)和不严重缺乏(n=57)分为2组。治疗前比较2组患者实验室及临床参数。结果

血清ADAMTS13水平与接受ECMO治疗患者的预后关系

目的分析血清血管性血友病因子特异性裂解酶(a disintegrin-like and metalloprotease with thrombospondin type1 motif,member 13,ADAMTS13)水平与接受体外膜肺氧合(extracorporeal membrane oxygenation,ECMO)治疗患者的预后关系。方法本研究选取2020年1月—2022年6月在湖南医药学院第一附属医院接受ECMO治疗的42例患者,按照ECMO撤离1个月内预后分为生存组(n=29)和死亡组(n=13)。通过分析接受ECMO治疗患者的血清ADAMTS13水平,分析血清ADAMTS13与接受ECMO治疗患者的预后。结果生存组年龄小于死亡组(P<0.001)。2组性别和体表面积比较,差异无统计学意义(P>0.05)。生存组平均动脉压为(54.24±5.81)mmHg、氧合指数为(178.84±29.38)mmHg,均高于死亡组的(52.56±4.42)mmHg、(155.71±23.12)mmHg;生存组急性生理与慢性健康评分(acute physiology and chronic health evaluation-Ⅱ,APACHE-Ⅱ)评分为(22.51±2.62)分,低于生存组的(27.35±3.85)分(P<0.05)。2组左室射血分数和ECMO流量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。ECMO治疗后,2组血清ADAMTS13水平升高。生存组ECMO治疗前1 h及治疗后24 h、48 h血清ADAMTS13水平高于死亡组,差异有统计学意义(P<0.001)。ECMO治疗48 h后血清ADAMTS13水平为ECMO辅助治疗患者死亡的独立危险因素(P<0.001)。结论接受ECMO治疗患者的血清ADAMTS13水平降低与预后不佳相关。

血清ADAMTS13、SEMA3A、NDRG3水平与缺血性脑卒中患者病情和预后的关系

目的探究血清血管性血友病因子裂解蛋白酶13(ADAMTS13)、信号蛋白3A(SEMA3A)、N-myc下游调控基因3(NDRG3)水平与缺血性脑卒中(IS)患者病情和预后的关系。方法选择312例IS患者作为IS组,312例健康体检者作为对照组。采用美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分对IS患者病情严重程度进行评估,根据NIHSS评分将患者分为重度组(n=45)、中度组(n=112)、轻度组(n=155)。对所有患者随访3个月,采用改良Rankin量表(mRS)评分对预后进行评价,根据mRS评分将患者分为预后不良组(n=103)、0~2分为预后良好组(n=209)。Spearman相关法分析血清ADAMTS13、SEMA3A、NDRG3水平与mRS评分、NIHSS评分的相关性;受试者工作特征曲线分析血清ADAMTS13、SEMA3A、NDRG3水平对IS患者预后的预测价值。结果与对照组比较,IS组血清SEMA3A、NDRG3水平高,ADAMTS13水平低(P均<0.05)。轻度组、中度组、重度组血清SEMA3A、NDRG3水平逐渐升高,ADAMTS13水平逐渐降低(P均<0.05)。与预后良好组比较,预后不良组血清SEMA3A、NDRG3水平高,ADAMTS13水平低(P均<0.05)。血清ADAMTS13、SEMA3A、NDRG3联合预测IS患者预后的曲线下面积为0.861,均高于各自单独预测(P均<0.05)。ADAMTS13与NIHSS评分、mRS评分呈负相关(r分别为-0.527、-0.435,P均<0.05),SEMA3A与NIHSS评分、mRS评分呈正相关(r分别为0.443、0.496,P均<0.05),NDRG3与NIHSS评分、mRS评分呈正相关(r分别为0.487、0.515,P均<0.05)。结论IS患者血清SEMA3A、NDRG3水平高,ADAMTS13水平低,三者与患者病情和预后相关,可预测IS患者预后。

狼疮性肾炎患者血浆中ADAMTS13水平与疾病活动度的相关性

【目的】探讨狼疮性肾炎(LN)患者血浆血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS13)水平与疾病活动度的相关性。【方法】以本院2018年10月至2020年12月收治的LN患者100例为LN组,根据红斑狼疮疾病活动性指数(SLEDAI)将其分为基本无活动组、轻度活动组、中度活动组、重度活动组,另外选取同期健康体检者100例为对照组。收集各组临床资料及血生化指标,测定所有对象血浆中ADAMTS13、血管性血友病因子(VWF)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达水平。【结果】与对照组相比,LN组患者三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、尿酸水平显著升高(P<0.05),载脂蛋白A1(apoA-1)显著降低(P<0.05)。对照组及基本无活动组、轻度活动组、中度活动组、重度活动组LN患者红细胞、白细胞、血小板、血红蛋白、补体C3和C4、血浆中ADAMTS13水平依次降低,血浆中炎性因子IL-6、TNF-α及VWF、VWF/ADAMTS13水平依次升高,且各组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。LN患者血浆中ADAMTS13水平与IL-6、TNF-α、VWF水平、SLEDAI呈显著负相关(r=-0.405、-0.464、-0.465、-0.925,均P<0.05)。【结论】ADAMTS13在LN患者血浆中呈低表达,其水平变化对于评估LN患者疾病活动度具有重要意义。

急性ST段抬高心肌梗死患者血清ADAMTS13、SFRP5、hs-CRP的表达及临床意义

目的 分析急性ST段抬高心肌梗死(ASTEMI)患者血管性血友病因子裂解酶13(ADAMTS13)、分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)的表达及临床意义。方法 回顾性分析2020年1月至2021年1月绍兴市中心医院收治的134例ASTEMI患者(ASTEMI组)的临床资料,另择本院同期健康体检者76人作为对照组。比较组间ADAMTS13、SFRP5、hs-CRP水平,对ASTEMI组患者随访1年。根据主要不良心血管事件(MACE)发生情况分为预后不良亚组和预后良好亚组。采用多因素logistic回归分析ASTEMI患者预后不良的影响因素。结果 ASTEMI组ADAMTS13、SFRP5表达水平低于对照组,hs-CRP表达高于对照组(均P<0.01)。不同Killip分级患者ADAMTS13、SFRP5表达水平为:Ⅰ级>Ⅱ级>Ⅲ级>Ⅳ级,hs-CRP表达水平为:Ⅰ级<Ⅱ级<Ⅲ级<Ⅳ级(均P<0.05)。ASTEMI组中,26例患者预后不良,预后不良亚组支架置入个数、冠状动脉多支病变率、Killip分级≥Ⅱ级占比、hs-CRP水平、左心室射血分数(LVEF)值均高于预后良好亚组,ADAMTS13、SFRP5表达水平均低于预后良好亚组(均P<0.01)。多因素logistic回归分析显示支架置入个数、冠状动脉多支病变率、Killip分级、hs-CRP、LVEF、ADAMTS13、SFRP5均为ASTEMI患者预后不良的影响因素(均P<0.05)。结论ASTEMI患者ADAMTS13、SFRP5降低,hs-CRP升高,与患者心功能及预后密切相关。

新型金属蛋白酶ADAMTS家族的研究进展

含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶ADAMTSs(a disintegrin and metallo-proteinase with thrombospondin motifs)是一类新的Zn2+依赖的金属蛋白酶家族,广泛存在于哺乳动物和无脊椎动物体内。从1997年发现第一个ADAMTSs家族成员以来,迄今共有19个成员被发现,在保持凝血系统的稳态、器官生成、炎症、生育等方面有重要作用。尽管其中大部分酶的功能尚不清楚,但已有研究显示该家族成员与多种疾病密切相关。ADAMTSs与基质金属蛋白酶MMPs、解聚蛋白样金属蛋白酶ADAMs同属金属蛋白酶家族,但在结构组成、组织细胞分布、底物作用的特异性、酶活性的调节等方面有明显差别。本文综述了其在结构功能及与疾病关系的研究进展。

慢性阻塞性肺疾病患者血浆ADAMTS-13变化及其与血栓前状态关系

【目的】探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS-13)水平及其与COPD血栓前状态、炎症反应的关系。【方法】采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定67例在我院呼吸内科门诊及住院COPD患者(其中40例AECOPD,27例稳定期COPD)、21例健康对照者(11例吸烟健康者,10例非吸烟健康者)入组当天外周血血管性血友病因子(vWF)和ADAMTS-13水平,白介素6(IL-6)水平及血栓前状态的各指标(D-二聚体、纤维蛋白原)。【结果】AECOPD组、稳定期COPD组、吸烟健康组及非吸烟健康组血浆vWF水平分别为(12.5±1.9)、(9.8±1.5)、(5.5±1.9)及(3.8±1.3)pg/mL,呈依次下降趋势,协方差分析示各组间差异有统计学意义(P<0.001);血浆ADAMTS-13水平分别为(261±59)、(396±74)、(668±138)及(913±131)ng/mL,呈依次上升趋势,协方差分析示各组间差异有统计学意义(P<0.001)。多重线性回归分析显示血浆ADAMTS-13与血浆vWF(偏相关系数-0.661,P<0.001)、D-二聚体(偏相关系数-0.357,P=0.028)、纤维蛋白原(偏相关系数-0.402,P=0.004)及IL-6(偏相关系数-0.275,P=0.001)均呈负相关。【结论】COPD患者血浆ADAMTS-13水平下降,全身炎症反应和吸烟可能是其原因之一,血浆ADAMTS-13水平下降或许是COPD患者血栓前状态形成的机制之一。

vWF和ADAMTS13活性对脓毒症患者早期预后评估的意义

目的本研究旨在研究和探讨血管性血友病因子（von Willebrand factor，vwF）和含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶（A disintegrin—like and metalloprotease with thrombospondin type 1 motif，vWF裂解酶，ADAMTS13）的活性在感染性休克和脓毒症患者早期及预后评估方面的临床意义。方法选取2012—06—2013—06收住无锡市人民医院ICU的感染性休克或脓毒症患者40例，根据预后分为存活组20例和死亡组20例，记录其一般情况及入组时APACHE11评分，于发病第1、3、5、7天分别运用ELISA法检测其血浆vWF活性及ADAMTS13活性，各样本均数用方差分析、受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线分析、参数间进行Spearman相关分析，并绘制ROC曲线探讨vWF活性、ADAMTS13活性与APACHE Ⅱ评分之间的相关性。结果死亡组的vWF活性均明显高于存活组（P〈0．05），ADAMTS13活性明显低于存活组（P〈0．05）；同时死亡组APACHEⅡ评分明显高于存活组（P〈0．05）；存活组在第3天vwF活性升高、ADAMTS13活性下降、APACHEⅡ评分升高，而在第5天和第7天又出现vWF活性持续下降、ADAMTS13活性持续升高、APACHEⅡ评分持续下降，死亡组则呈现vWF活性持续上升、ADAMTS13活性持续下降、APACHEⅡ评分持续升高（P〈0．05）。40例患者的平均vWF活性与APACHEⅡ评分呈正相关（P〈0．01），而ADAMTS13活性与APACHEⅡ评分呈负相关（P〈0．01）：ROC曲线分析，vWF活性和ADAMTS13活性AUC均接近于1，提示能很好地预测患者的预后（P〈0．01）。结论vWF活性、ADAMTS13活性均是判断感染性休克和脓毒症患者预后的可靠指标。在脓毒症的病理过程中，此二者数值的变化与疾病严重程度密切相关，即vWF活性的升高、ADAMTS13活性的降低预示了患者预后差。

非急性期肺血栓栓塞患者血浆ADAMTS-13及炎症因子变化

【目的】探讨肺动脉血栓栓塞症(PTE)患者血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS-13)水平及其与炎症反应的关系。【方法】采用酶联免疫吸附的方法 (ELISA)测定25例我院呼吸科门诊随访病程超过3个月的PTE患者、15例健康对照者的外周血血管性血友病因子(v WF)、ADAMTS-13、C反应蛋白(CRP)、白介素6(IL-6)。【结果】PTE组及健康组血浆v WF水平分别为136.89(78.90)ng/m L、57.12(25.23)ng/m L,PTE组v WF水平高于健康组(P<0.001)。PTE组及健康组血浆ADAMTS-13水平分别为213.34±52.39 ng/m L、354.71±79.02 ng/m L,PTE组ADAMTS-13水平显著低于健康对照组(P<0.001)。多重线性回归分析显示血浆ADAMTS-13水平与血浆v WF水平呈负相关(r=-0.490,P=0.013)PTE组及健康组血浆IL-6水平分别为2.59(2.34)pg/m L、1.70(0.71)pg/m L,PTE组IL-6水平高于健康组(P<0.05)。【结论】PTE患者在急性发作后相当长的一段时间内仍存在血浆ADAMTS-13水平的下降及非特异性的炎症反应。

抗ADAMTS13单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

目的:建立分泌抗ADAMTS13单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备针对ADAMTS13不同结构域的单克隆抗体。方法:利用真核表达的重组血浆金属蛋白酶ADAMTS13截短型蛋白(ADAMTS13-T7)纯品免疫BALB/c小鼠。用ELISA方法测定免疫小鼠与ADAMTS13-T7蛋白的抗血清效价。取小鼠脾脏,制成单细胞悬液与SP2/0骨髓瘤细胞以10∶1的比例混合,进行细胞的融合,并将杂交瘤细胞稀释培养。2周后选生长良好的克隆孔检测,阳性克隆孔扩大培养并再次检测。结果:获得真核表达截短型血管性血友病因子裂解蛋白酶ADAMTS13-T7蛋白纯品。利用真核表达的截短型ADAMTS13-T7蛋白免疫BALB/c雌性小鼠,ELISA检测免疫后抗血清效价约为1∶20 000。利用杂交瘤技术通过融合,获得多株分泌抗重组ADAM TS13抗体的杂交瘤单克隆细胞株。将其中的30株转入液氮中冻存,以备进一步分选及功能研究。结论:融合获得多株分泌抗重组ADAMTS13抗体的杂交瘤单克隆细胞株,为进一步筛选出具有一定功能活性的单克隆抗体及研究ADAMTS13结构和功能提供更多的有力工具。

ADAMTS13的结构、功能及其与TTP诊疗的关系

血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS13)是一种能够特异性裂解血管性血友病因子(vWF)的血浆金属蛋白酶,严重的ADAMTS13活性缺失可导致特发性血栓性血小板减少性紫癜(TTP)的发生。本文简要综述了ADAMTS13的结构和功能及其与TTP的发病机制、诊断和治疗之间的关系。

多发性骨髓瘤中ADAMTS13活性和vWF水平改变的相关性研究

目的:研究多发性骨髓瘤(MM)沙利度胺治疗前后血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS13)活性和血管性血友病因子(vWF)水平的改变情况及其对疾病预后的影响。方法:对2016年6月-2018年6月本院及宝安区人民医院诊治的40例MM患者进行前瞻性研究,并选择同时期、同年龄段的健康体检人群50例作为对照组,比较MM患者沙利度胺治疗前后血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS13)活性和血管性血友病因子(vWF)水平的改变情况,对比临床治愈与难治复发患者的临床资料,应用多因素Logistic回归模型探究影响MM患者治疗效果的独立危险因素。结果:MM患者ADAMTS13活性治疗前后均显著低于对照组,且治疗后显著低于治疗前(P<0.05);vWF水平治疗前后均显著高于对照组,且治疗后显著高于治疗前(P<0.05);在治疗后及半年的随访中发现,临床治愈21例,难治11例,复发8例;难治复发组的临床分期和治疗后vWF水平明显高于临床治愈组(P<0.05);难治复发组的治疗后ADAMTS13活性明显低于临床治愈组(P<0.05);沙利度胺联合化疗组的治愈率明显高于沙利度胺单药组、非沙利度胺联合化疗组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,治疗方式和治疗后ADAMTS13活性是影响MM患者治疗效果的独立危险因素,临床分期Ⅰ期是MM患者治疗效果的独立保护因素(P<0.05)。结论:MM患者沙利度胺治疗后ADAMTS13活性明显降低,vWF水平显著升高,治疗后的ADAMTS13活性是影响多发性骨髓瘤患者治疗效果的独立危险因素。

大豆GmNF-YA13互作蛋白的筛选及鉴定

大豆GmNF-YA13蛋白是一个核转录因子Y(NF-Y),在干旱和高盐响应过程中均发挥重要作用。为研究其抗旱和耐盐的作用机理,寻找GmNF-YA13的互作蛋白,构建pGBKT7-GmNF-YA13诱饵载体,采用酵母双杂交筛选大豆酵母文库,并进行X-α-gal染色验证。结果显示:酵母双杂交获得85个阳性克隆,测序分析后得到36个候选的互作蛋白。功能预测显示互作蛋白主要参与生长发育、胁迫响应、能量代谢、转录调控和信号转导等生物过程。选择GmUVR8、GmCML41、GmFbox13和GmFBA与诱饵pGBKT7-GmNF-YA13进行一对一验证,只有GmFBA能与GmNF-YA13发生相互作用,预示GmNF-YA13功能的发挥需要GmFBA的参与。该结果可为NF-YA抗逆分子网络的研究提供基础。

ADAMTS-13在血栓性疾病中作用的研究进展

血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS-13)是血浆中一种重要的金属蛋白酶,目前对于它的结构、生物学特征及其功能方面的研究已经取得较大的进展,除外调控vWF的裂解,ADAMTS-13在动、静脉血栓中也发挥着重要的作用,而离子浓度和凝血酶信号转导通路都会影响ADAMTS-13的活性,但ADAMTS-13如何受控的机制还不是很清楚。本文将对其改变,相关机制以及影响该酶调控的因素进行综述。