ADAMTS-7基因rs3825807及rs1994016位点多态性与KD发病及CAL的关联性分析

目的分析ADAMTS-7基因rs3825807、rs1994016位点多态性与川崎病(KD)发病及其冠状动脉损伤(CAL)是否存在关联性。方法选取KD患儿100例为KD组,健康体检儿童100例为健康组。提取两组外周血DNA进行基因测序,比较两组ADAMTS-7基因rs3825807位点及rs1994016位点的多态性差异。KD组根据是否存在冠状动脉损伤分为冠状动脉损伤组(KD-CAL组)和无冠状动脉损伤组(KD-NCAL组),比较两组ADAMTS-7基因rs3825807位点及rs1994016位点的多态性差异。结果KD组与健康组比较,KD-NCAL组与KD-CAL组比较,ADAMTS-7基因rs3825807位点A、G等位基因频率和AA、AG、GG基因型频率以及rs1994016位点C、T等位基因频率和CC、CT、TT基因型频率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论ADAMTS-7基因rs3825807、rs1994016位点多态性与KD的发病及CAL不存在明显关联性。

ADAMTS7基因多态性与原发性高血压相关性研究

目的:探讨含I型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶7(ADAMTS7)rs62011052和rs62012628位点多态性与原发性高血压的相关性。方法:选取原发性高血压病例211例,选取同时期体检血压正常人群208例作为对照组,Sanger法测序测定基因型;SPSS25.0软件对组间临床资料、基因多态性与原发性高血压的相关性进行比较分析。结果:(1)与对照组相比,高血压组BMI、脉压差、收缩压、舒张压、甘油三酯、总胆汁酸、尿酸更高,静息心率更快,高密度脂蛋白更低(P<0.05);其余临床资料差异无统计学意义(P>0.05)。(2)两组之间的rs62011052、rs62012628位点基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05);rs62011052、rs62012628位点基因型频率和等位基因频率在两组间的差异无统计学意义(P>0.05),按照性别对两组进行分层后分析,差异仍然无统计学意义(P>0.05)。(3)调整可能混杂后,不同遗传模型下携带rs62011052、rs62012628位点不同基因型的人群与高血压发病风险未见明显相关性(P>0.05)。(4)rs62011052不同遗传模型下各基因型之间的血压值差异均无统计学意义(P>0.05);rs62012628位点在共显性模型下不同基因型间的舒张压差异具有统计学意义(P<0.05),随后进行两两比较发现,共显性模型中基因型CT的舒张压低于基因型CC(P<0.05),在显性模型下,CT+TT基因型的血压值低于CC基因型(P<0.05),其余不同遗传模型下各基因型之间的血压值差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:ADAMTS7基因rs62012628位点T等位基因与较低的血压值水平有关。

基于蛋白质组学探讨RAB7对肾小球足细胞线粒体自噬的影响

目的通过蛋白质组学探究RAB7作为线粒体自噬生物标志物对肾小球足细胞线粒体自噬的影响。方法将6只SD大鼠随机分为对照组和模型组(n=3),尾静脉注射阿霉素复制慢性肾小球肾炎(CGN)模型。采用蛋白质组学技术联合自噬数据库鉴定CGN大鼠的差异自噬相关蛋白。体内采用Western blot方法验证相关蛋白的表达,体外采用嘌呤霉素氨基核苷(PAN)诱导肾小球足细胞损伤模型,使用免疫荧光、透射电镜、Western blot等方法检测线粒体自噬变化。结果共筛选出12个自噬相关蛋白,其中RAB7 degree值最高。体内经Western blot验证的SNRPE、CTNNBI、CAT、RAB7A、SOD2蛋白表达水平与蛋白质组学数据一致。体外实验中,与正常组比较,模型组中RAB7、Parkin和PINK1蛋白表达水平降低(P<0.01);RAB7过表达后,与正常组比较,模型组中自噬标志物LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1蛋白表达水平升高(P<0.01),P62蛋白表达水平降低(P<0.01)。结论RAB7可能是CGN中线粒体自噬生物标志物,影响肾小球足细胞线粒体自噬。

ADAMTS7在人胃癌中的表达及临床意义

目的:利用生物信息学方法分析含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶7(ADAMTS7)在人胃癌中的表达及临床意义,并进一步预测其可能的作用机制。方法:从癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载ADAMTS7基因表达数据及临床数据,应用R软件对数据整理比较其在不同肿瘤组织中的表达情况;对差异基因批量化生存分析、独立预后分析及绘制列线图;分析ADAMTS7基因表达与胃癌不同临床病理特征的相关性及对患者预后的影响;应用基因集富集分析(GSEA)对目的基因行富集分析,预测目的基因调控胃癌进展及预后可能的机制。结果:ADAMTS7在不同种类肿瘤中表达不同,其表达水平一般上调。其中,ADAMTS7在胃癌组织中显著高表达。生存分析表明,ADAMTS7高表达患者具有较差的总生存率及较差的疾病特异性生存率。多因素Cox回归分析显示ADAMTS7高表达、N3期、年龄大于65岁及残余肿瘤是胃癌患者预后较差的因素。基因集富集分析结果表明MAPK信号通路和Hedgehog信号通路可能是ADAMTS7高表达影响胃癌的机制。结论:ADAMTS7高表达水平在胃癌发生发展过程中可能起着重要作用,有望为胃癌诊治和预后判断提供新的靶点。

新基因BRD7对鼻咽癌蛋白质表达谱影响的初步研究

BRD7基因是与鼻咽癌相关的候选抑瘤基因 .为了进一步研究该基因的作用机制 ,将pcDNA3 1(+) /BRD7的表达质粒经脂质体导入HNE1细胞 ,RNA斑点杂交筛选出阳性克隆 ,通过双向电泳分离过表达BRD7的HNE1细胞内蛋白质 ,筛选出差异表达的蛋白质点 ,并进行质谱分析鉴定 .鉴定出 10种表达上调的蛋白质点 ,包括精氨 (基 )琥珀酸裂解酶 ,TSA (thio specificantioxdant) ,Proteaseomeactivator2 8betasubunit (PA2 8) ,金属蛋白酶抑制因子 2前体等 ,这些蛋白质涉及细胞生长 ,细胞代谢等很多相关事件 .

大豆蛋白质11S和7S组分及其亚基分析方法的研究述评

对大豆蛋白质组分及其亚基的分析方法进行了评述.主要内容为:利用超速离心技术把大豆蛋白质组分分为4种,以沉降系数分别表示为2S、7S、11S和15S,其中7S和11S是主要组分;利用碱溶、酸沉(冷沉)和缓冲液中沉淀的方法分别分离提取7S和11S,经凝胶过滤或离子交换柱层析提纯;利用碱溶、酸沉和离心分离方法分离提取大豆分离蛋白;利用D isc-PAGE技术初步分析7S和11S组分的个别亚基,利用SDS-PAGE技术测定7S和11S组分及其亚基的相对分子质量和相对含量;以相对分子质量为标准,在SDS-PAGE谱带中划分7S和11S组分的亚基组并测定其相对含量,然后计算7S和11S组分的相对含量和11S/7S比值.上述方法各有其优缺点和适用情况.在讨论的基础上提出食品科学与遗传育种科学要密切结合,培育含有不同蛋白质组分、不同亚基和组分比值的专用大豆品种,既可以深入研究亚基的功能特性,又能开发出新的大豆蛋白制品.

中国野生和栽培大豆11S及7S蛋白质相对含量的比较分析

大豆种质蛋白质11S和7S及其亚基组相对含量的遗传变异是专用型品种选育的基础。以全国各生态区的野生豆138份和地方品种409份,国内育成品种148份、国外育成品种83份,合计778份大豆种质为材料,采用SDS-PAGE电泳技术测定蛋白质11S和7S组分及其亚基组相对含量,研究其遗传变异。在南京同一条件下的结果表明：全国野生豆、地方品种和育成品种11S相对含量平均分别为54.7%、64.8%和71.7%,变幅28.8%～82.6%、38.8%～79.4%和48.2%～88.9%;7S相对含量平均分别为44.7%、34.9%和27.9%,变幅20.6%～71.2%、20.6%～61.1%和15.7%～47.8%;11S/7S比值平均分别为1.4、2.0和2.7,变幅0.4～3.9、0.6～3.9和0.9～4.0。野生豆驯化为栽培豆并经选育后11S相对含量和11S/7S比值上升,7S相对含量下降,变幅均减小;亚基组11S-2和11S-3相对含量增加;7S的6个亚基组,尤其7S-1和7S-6,相对含量下降。11S、7S、11S/7S以及各亚基组在各群体各生态区内均有较大变异,但与来源地纬度、蛋白质和油脂含量均无显著相关。从中优选到11S/7S比值大于3.7、11S相对含量为78.9%～88.9%的8份种质,发现有11S的4个亚基组相对含量分别大于37%、7S的6个亚基组相对含量分别大于24%、以及11S-1和7S的6个亚基组缺失的种质,这些特异种质可供蛋白质组分育种利用。

NAG7基因转染HNE1细胞后下调蛋白质的鉴定及其意义(英文)

NAG7基因是我室克隆的与鼻咽癌相关的肿瘤抑制候选基因 .将NAG7编码框的cDNA片段克隆至pGEM3.1(+ )的表达载体 ,经脂质体转染入HNE1细胞 ,经G4 18筛选 ,并运用PCR技术证实 .建立含NAG7基因稳定转染的细胞系 ,抽提细胞总蛋白质 ,双向凝胶电泳分离蛋白质 ,对表达下调的蛋白质点进行质谱分析 ,获得的肽质指纹经SWISS PROT数据库分析以鉴定蛋白质点 .鉴定出的 7个下调蛋白质包括纤溶酶原、收缩蛋白、Ras 相关蛋白Rab 36及ARF 相关蛋白等 .通过对蛋白质性质和功能的分析 ,发现这些蛋白质参与了细胞信号的转导、蛋白质的转运及细胞代谢等众多事件 .因此 。

猪源大肠杆菌 O157：H7与 O157的差异蛋白质组学分析

为了阐述O157:H7与O157的致病力差异与蛋白质表达差异之间的关系,我们利用双向电泳技术和质谱技术对大肠杆菌两类菌株之间进行蛋白质组学差异分析。菌体蛋白经双向电泳技术分离后,利用软件Image Master TM2DPlatinum7.0对所得双向电泳图谱进行差异分析并借助质谱技术对差异蛋白质点进行鉴定,获得了背景清晰、分辨率高、重复性好的菌体总蛋白的双向电泳图谱。两样品图谱差异分析结果表明,共确定了28个有效的蛋白质差异点(Av.ratio>2.0,ANOVA<0.05),经质谱鉴定将这28个差异点注释成23种蛋白质。对得到注释的23种蛋白质进行功能分类,发现7类蛋白质与致病性密切相关,即溶菌酶抑制剂、通用应激蛋白、LuxS、鞭毛蛋白以及3种外膜蛋白。本结果将为进一步研究O157:H7菌株的致病因子,探究O157:H7与其它大肠杆菌菌株的致病力差异,以及建立快速鉴别诊断O157:H7的试剂盒提供重要的依据。

7-苯基偶氮-变色酸与蛋白质的显色反应研究

研究了蛋白质与 7-苯基偶氮 -1 ,8-二羟萘 -3 ,6-二磺酸的显色反应。在 p H2 .7的缓冲溶液中 ,7-苯基偶氮 -1 ,8-二羟萘 -3 ,6-二磺酸与蛋白质形成红紫色复合物 ,λmax为 564 nm,ε为 1 .3× 1 0 5L· mol- 1· cm- 1,线性范围为 6.6～ 1 3 2 mg/ L。实验证实7-苯基偶氮 -1 ,8-二羟萘 -3 ,6-二磺酸与蛋白质的作用符合 Pesavento模式。

谷氨酰胺转胺酶对大豆7S蛋白质及肌球蛋白质胶凝性质的影响

大豆 7S蛋白与肌球蛋白质经谷氨酰胺转胺酶 (TGase)作用后 ,产物的十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)结果表明 ,两者均可在分子间生成共价键 ,形成相对分子质量较大的聚合物 .1 0 g/dL肌球蛋白质溶液加入 1 0U/g的TGase,于 35℃、pH 7.0的条件下反应 90min ,体系的凝胶强度较对照组有了很大提高 .1 0 g/dL大豆分离蛋白质溶液与 0 .0 2U/mg的TGase在37℃下保温 1 50min后 ,体系粘度增加了 1 50mPa·s;而 5g/dL的肌球蛋白质加酶并于 1 0℃下保温 1 80min后 ,其粘度值提高了 60 0mPa·s.

凝固剂种类对大豆蛋白质组分7S和11S胶凝能力的影响

在分离纯化得到具有较高纯度大豆蛋白7S和11S组分的基础上,采用动态流变仪测定了不同凝固剂单独作用于7S和11S时的胶凝曲线.结果表明,在采用葡萄糖酸内酯(GDL)作为凝固剂时,在GDL质量浓度0.5g/dL,60℃条件下,11S组分的胶凝速度明显高于7S组分,但反应后期两者形成的凝胶强度相当;转谷氨酰胺酶(TGS)更有利于11S的胶凝,在TGS作用下,11S凝胶的强度约为7S凝胶的3倍;而以木瓜蛋白酶(papain)为凝固剂时,低酶用量条件下对胶凝起主要作用的是11S组分,而高酶用量条件下起主要作用的是7S组分,在各自适宜的papain用量条件下,11S组分凝胶的强度高于7S组分.

血清COMP、ADAMTS-7对骨关节炎患者心血管疾病患病风险的预测价值

目的 探讨血清软骨寡聚基质蛋白(cartilage oligomeric matrix protein,COMP)、血小板反应蛋白解整合素金属肽酶7(a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs-7,ADAMTS-7)在骨关节炎(osteoarthritis,OA)患者并发心血管疾病(cerebrovascular disease,CVD)风险预测中的价值。方法 纳入120例OA患者设为OA组,另选择120例健康者设为健康组,检测两组COMP、ADAMTS-7水平,对比两组COMP、ADAMTS-7值。将OA组患者分为合并CVD组和未合并CVD组,再将未合并CVD组分为CVD低危组、中危组、高危组,比较各组血清COMP、ADAMTS-7。以合并CVD组患者为对象,分析血清COMP、ADAMTS-7与CVD病理特征的关系。结果 OA组患者血清COMP(14.35±2.13 vs. 7.13±1.02,P <0.001)、ADAMTS-7(56.54±5.23 vs. 30.13±3.15,P <0.001)均高于健康组;合并CVD组患者血清COMP(18.45±2.33 vs. 12.53±2.05,P=0.002)、ADAMTS-7(83.25±7.34 vs.45.15±5.23,P <0.001)均高于未合并CVD组;CVD高危组血清COMP、ADAMTS-7与中低危组存在显著差异;在合并CVD组患者中,动脉粥样硬化重度组血清COMP(P=0.007)、ADAMTS-7(P=0.009)高于轻中度组,心功能III-IV级组血清COMP(P=0.011)、ADAMTS-7(P=0.008)高于I-II级组,预后不良组患者血清COMP、ADAMTS-7均高于预后良好组(P <0.001)。结论 通过OA患者的血清COMP、ADAMTS-7值,可为预测OA患者并发CVD的风险提供相关参考,同时也可作为其病情及预后判断的重要参考指标。

2,7-二氯荧光素与蛋白质相互作用的分光光度法研究

首次采用分光光度法研究了模拟生理条件(pH7.4Tris-HCl缓冲溶液,离子强度I=0.1)下2,7-二氯荧光素与牛血清白蛋白(BSA)相互作用的情况。研究结果表明两者相互作用形成稳定的复合物,最大吸收波长为509nm,与2,7-二氯荧光素的最大吸收波长502nm比较,红移了7nm;两者之间主要通过静电引力结合,但并不排除疏水作用力和氢键;两者之间的结合数为32。

施氮量和密度对大麦苏啤7号茎叶氮含量、产量及籽粒蛋白质的影响

在江苏沿海地区对大麦苏啤7号进行种植密度和氮肥试验,结果表明,种植密度对茎叶氮含量和籽粒蛋白质含量的影响不显著,而对穗数、千粒重和产量有显著影响,在225万·hm^(-2)密度下可获得较高的籽粒产量。随着施氮量的增加,不同时期叶片氮含量和籽粒蛋白质含量显著提高,穗数、每穗粒数、千粒重和产量则随之先升高后降低。在栽培过程中,225万·hm^(-2)的种植密度和225 kg·hm^(-2)的纯氮施用量,苏啤7号能够获得高产,且籽粒蛋白质含量也符合啤酒大麦的标准。

维持性血液透析患者血清金属蛋白酶ADAMTS7浓度与血管钙化的关系

目的探讨血液透析患者血清金属蛋白酶ADAMTS7浓度与血管钙化的关系。方法根据患者血清金属蛋白酶ADAMTS7水平,将73例维持性血液透析分成高浓度组(n=29例)、低浓度组(n=44例),用多部位平片法评估患者血管钙化情况,比较2组患者临床资料、生化资料及血管钙化情况。结果高浓度组和低浓度组的血管钙化发生率分别是86%(23/29)和57%(25/44),差异具有显著性(P=0.048),高浓度组较低浓度组患者透析龄长(72.5±67.8月vs.46.7±37.1月,P=0.040),血钙浓度高(2.50±0.30 mmol/L vs.2.23±0.23mmol/L,P=0.002)。回归分析提示高浓度血清ADAMTS7是发生血管钙化的预测因素之一。结论血液透析患者血清金属蛋白酶ADAMTS7浓度与血管钙化发生有关,可能是其预测因素之一。

肠出血性大肠杆菌O157∶H7 Intimin和Tir-Tccp蛋白质对小鼠的免疫保护性

为了研究不同浓度的肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7 Intimin和Tir-Tccp蛋白质对接受1010 CFUEHEC O157∶H7小鼠的免疫保护作用,将Intimin和Tir-Tccp蛋白质和佐剂充分乳化后,通过皮下多点注射免疫小鼠,对照组注射等量的磷酸盐缓冲液。共免疫2次,间隔14 d,末次免疫后14 d攻毒1只小鼠EHEC O157∶H7 1010CFU。每次免疫后的14 d通过断尾采血,用间接ELISA法检测血清抗体。攻毒后,观察小鼠精神状态,记录死亡数并检测排菌量。ELISA检测结果表明,Tir-Tccp蛋白质诱导小鼠产生IgG抗体水平明显升高,而Intimin诱导产生的IgG抗体升高不明显。攻毒后,各免疫组小鼠均死亡1只,存活14只,存活率为93.3%;对照组小鼠死亡4只,存活6只,存活率为60.0%。免疫组在攻毒后6 d,粪便中检测不到EHEC O157∶H7,对照组在攻毒后13 d仍有较高的排菌量。表明Intimin和Tir-Tccp蛋白质对小鼠起到了有效的免疫保护作用,能够减少EHEC O157∶H7在小鼠体内的定殖。

假单胞菌sp.130 GL-7-ACA酰化酶的核苷酸和蛋白质序列分析

对来源于假单胞菌sp .130的戊二酰 7 氨基头孢烷酸 (GL 7 ACA)酰化酶结构基因的全序列及所编码蛋白质的α,β亚基的N末端和C末端的氨基酸序列进行了测定。将蛋白质序列与其他同类的GL 7 ACA酰化酶进行了同源性比较 ,结果显示该酶与来源于假单孢菌GK16和C42 7的酰化酶的序列有较高同源性 ,而与其它同类酰化酶的同源性较低。这些酶的α亚基N 末端差别较大 ,但是 β 亚基的N

A组人轮状病毒DQ-1株VP7基因序列和蛋白质结构分析

目的研究DQ-1株VP7基因的基因分型,对DQ-1株VP7基因序列和糖蛋白VP7的蛋白质结构进行分析。方法通过RT-PCR技术扩增人A组轮状病毒DQ-1株VP7全长基因,并将RT-PCR产物连接到pMD18-T载体,转化大肠杆菌JM109感受态细胞,在含有氨苄青霉素的LB琼脂培养基上筛选出两个PCR阳性菌落,并提取质粒,双酶切鉴定,最后利用通用引物进行测序。结果DQ-1株VP7基因与同型的我国已测序G1型地方株T73、R96-197株基因序列同源性均为97.6%,与G1型标准株Wa株核苷酸序列同源性为92.9%,与G2血清型代表株DS-1株基因序列同源性为73.8%,与G3血清型代表株SA11株核甘酸序列同源性为75.6%;其VP7基因mRNA可折叠多达20个发卡结构。DQ-1株氨基酸序列与T73、R96-197株同源性都达97.5%,与Wa株达94.6%,而与其他型DS-1株、SA11株和J-4621株分别仅为74.4%,79.4%和75.2%。结论DQ-1株属于G1血清型。DQ-1株VP7基因序列与已测序我国G1型地方株VP7基因序列几乎没有差别,而与G1型标准株VP7基因序列存在细微差异。

大鼠睾丸AQP7mRNA与蛋白质的表达及定位研究

目的 :探讨 AQP7在大鼠睾丸的基因与蛋白质表达及定位。方法 :取 4周和 1 2周 Wistar大鼠睾丸 ,采用 RT- PCR、Western blot检测 AQP7m RNA和蛋白质表达 ,免疫组化检测进行其定位研究。结果 :大鼠睾丸有 AQP7m RNA和蛋白质表达 ,定位于减数分裂后的精子细胞和精子膜上 ,管周细胞也有 AQP7的阳性染色。结论