响应面法优化河蚬多肽的制备工艺

为实现河蚬的高值化利用,本研究采用酶法制备河蚬多肽。以乙醇脱氢酶(Alcohol Dehydrogenase,ADH)激活率为指标,采用单因素和响应面法优化酶解工艺参数。结果表明,在料液比1∶130(g∶mL)、酶解时间140 min、酶解温度45℃的条件下,河蚬多肽对ADH的激活率为77.21%±0.82%。该研究为河蚬的精深加工及高值化开发利用提供了理论依据。

一种高纯度小分子解酒护肝肽的制备

目前海洋生物活性肽在功能食品中的应用已成为研究热点。针对中西药类解酒产品不足的问题,该研究制备了一种高纯度、高活性的小分子解酒护肝肽产品。采用多酶中度水解鱿鱼蛋白,以蛋白质回收率和乙醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase,ADH)激活率为指标。确定了最佳酶解条件为胃蛋白酶∶碱性蛋白酶∶风味蛋白酶=1∶1∶1(质量比),酶添加量为0.2%(质量分数)、料液比为1∶10(g∶mL)、反应时间3 h。在最佳酶解条件下的酶解液,其蛋白回收率为80.34%,ADH激活率为83.37%。为进一步提纯小肽并提升其功能活性,对酶解液进行精制工艺研究,采用树脂吸附疏水性肽组分,用梯度乙醇洗脱,收集液浓缩、干燥,获得淡黄色产品肽粉末。其蛋白肽纯度为95.33%,其分子质量<3000 Da的占99.96%,对ADH的酶活率为122.71%,对DPPH自由基的清除率可达92.01%。该研究制备的小肽产品在功能食品领域具有广阔的应用前景。

具有醒酒活性的玉米肽的制备、富集和鉴定

为制备具有高效醒酒活性的玉米肽,采用木瓜蛋白酶和胰酶复合酶酶解玉米黄粉。以蛋白质回收率和乙醇脱氢酶(ADH)激活率为指标,确定最佳的酶解工艺。结果:木瓜蛋白酶和胰酶复合酶的最佳酶解条件是:料液比1∶10,总加酶量2%,木瓜蛋白酶和胰酶质量比1∶1,酶解时间8 h。在此条件下蛋白质回收率为69.89%,ADH激活率为65.72%。为进一步分离富集具有高醒酒活性的成分,先用不同体积分数浓度的乙醇富集玉米肽中的醒酒成分,其中以80%乙醇的醇沉组分的ADH激活率最高(75.08%);再用葡聚糖凝胶G-15(Sephadex G-15)对80%乙醇的醇沉组分进行第2步分离,共获得4个组分,其中G4组分的ADH激活率高达90.12%。这2种分离方法高效富集了具有醒酒活性的玉米肽;最后用超高压液相色谱串联质谱(UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS)分离鉴定具有高效醒酒活性的肽段结构,共得6条肽段。这些肽段都含丙氨酸,其中3条肽段含有亮氨酸。由于这2种氨基酸有利于醒酒,所以这6条肽段具有醒酒活性。本研究结果为深入研发玉米醒酒肽提供了理论基础。

玉米粗肽的可控酶法制备及其体外醒酒活性的研究

利用不同来源的蛋白酶催化玉米蛋白粉水解制备玉米蛋白肽,比较了不同水解度下所得产物肽的体外醒酒活性。结果表明,Alcalase为催化制备玉米粗肽的较理想催化剂。以水解度为指标,对Alcalase促玉米蛋白的水解条件进行了优化,确定底物质量浓度为5 g/mL、酶体积分数为1%、水解温度为60℃,水解时间为120min。在上述条件下,反应水解度可达48.4%,且反应水解度与肽提取率之间呈正相关性。Alcalase酶解产物玉米蛋白肽具有良好的体外醒酒活性,当控制酶解反应水解度为30%(肽提取率为57.0%)时,其ADH激活率可达38.5%。

丝蛋白肽醒酒活性组分分离纯化及其构效关系研究

以废蚕丝为原料,采用40%CaCl_2溶液将其溶解、透析后得蚕丝蛋白,优化其酶解工艺条件,并将制得的丝蛋白肽经凝胶过滤色谱(HPGFC)和反相液相色谱(RP-HPLC)分离纯化,利用瓦勒-霍赫法考察了不同浓度和组分丝蛋白肽的体外醒酒活性。结果表明,最佳蚕丝蛋白酶解工艺条件为时间240 min、加酶量([E]/[S]) 2. 0%、pH 8. 5、温度60℃、底物浓度5%,该工艺下可获得水解度为23. 22%的丝蛋白肽;体外醒酒活性试验表明有较高ADH激活率的丝蛋白肽浓度为2 mg/mL;经HPGFC和RP-HPLC分离纯化,可分别得到3个和17个组分,其中SFP-II-8组分体外醒酒活性最高,其ADH激活率可达44. 51%;将SFP-II-8组分通过液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱联用分析(UPLC-Q-TOF-MS)后得出其氨基酸序列为L-G-G-V-G-A。

卵白蛋白肽复合酶法制备工艺优化及解酒效果

目的:验证卵白蛋白肽的解酒活性,提高鸡蛋产品的附加值。方法:用碱性蛋白酶和胰蛋白酶复合酶解卵白蛋白,以乙醇脱氢酶(ADH)激活率为指标,采用响应曲面法优化酶解工艺。通过检测卵白蛋白肽的总抗氧化性、水解度、氨基酸组成及相对分子质量,评估卵白蛋白肽的解酒效果。结果:最佳酶解工艺条件:酶解时间5 h,复合酶用量3100 U/g,酶解温度50℃,料液比(m_(卵白蛋白)∶V_(蒸馏水))3.5∶25(g/mL),在此条件下得到的卵白蛋白肽ADH激活率为(22.71±0.15)%,总抗氧化能力值为(9.51±0.03)U/mL,水解度为(29.28±0.16)%。卵白蛋白肽富含谷氨酸(9.5543%)、丙氨酸(3.8633%)、亮氨酸(5.7647%)等有益于提高解酒活性的氨基酸,小分子肽(<1000 Da)含量超过88.77%。结论:使用复合酶解法制备的卵白蛋白肽具有良好的抗氧化活性和解酒效果。

辣木籽醒酒肽的酶解制备工艺优化

旨在促进辣木籽醒酒肽的开发利用,以辣木籽蛋白粉为原料,蛋白水解度和辣木籽醒酒肽的乙醇脱氢酶(ADH)激活率为考察指标,采用单因素实验和响应面法优化辣木籽醒酒肽的制备工艺。结果表明,辣木籽醒酒肽制备的最佳酶解工艺条件为料液比1∶20、碱性蛋白酶添加量5.0%、酶解pH9.0、酶解温度63℃、酶解时间142min,在此条件下辣木籽蛋白水解度为12.23%,辣木籽醒酒肽的ADH激活率为22.16%。综上,以辣木籽为原料制备醒酒肽具有良好的发展前景。

玉米蛋白水解条件对蛋白水解物体外解酒活性的影响

玉米蛋白粉是玉米湿法生产淀粉的副产物,含蛋白质质量分数62%~71%。玉米蛋白粉疏水性强的特点限制了其在食品行业的应用。但是,玉米蛋白具有特殊的氨基酸组成,且在其多肽链中存在促酒精代谢、抗氧化等功能区,这为其功能性的表现提供了良好的原料优势。利用碱性蛋白酶（Alcalase）和复合蛋白酶（Protamex）对高底物质量浓度（10 g/100 m L）玉米蛋白进行水解,研究水解条件对蛋白水解物的乙醇脱氢酶（ADH）激活率、·OH清除活性和蛋白回收率的影响。结果表明Alcalase水解玉米蛋白的适宜条件为酶解温度65℃,p H 8.0,加酶量2.5%,时间2h,该条件下蛋白水解物的ADH激活率为18.62%,·OH清除率为82.9%,蛋白回收率为25.08%;Protamex水解玉米蛋白的适宜条件为酶解温度55℃,p H 7.0,加酶量2.5%,时间2 h,该条件下玉米蛋白水解物的ADH激活率为9.67%,·OH清除率为82.0%,蛋白回收率为17.63%。Alcalase和Protamex顺序协同水解（酶底比为1.5%＋1.5%）所得玉米蛋白水解物的ADH激活率达到19.71%,·OH的清除率达到76.7%,蛋白回收率为52.63%。优化条件下蛋白水解物多肽分子量主要分布在955.0~546.8 Da之间。