ADP核糖基化因子6在病原体感染中的作用

ADP核糖基化因子6(ADP ribosylation factor 6,Arf6)是Ras超家族中的一个小分子GTP结合蛋白,属于Arf亚家族成员,在哺乳动物细胞中广泛表达,是一种广泛参与分泌、内吞、吞噬、囊泡运输、细胞黏附、胞质分裂以及癌细胞侵袭等基本生物学过程的胞内调节因子。近年来发现Arf6参与了多种病原体的感染过程,因此,深入研究Arf6在细菌、病毒和胞内寄生虫感染中的功能和调控机制,对于揭示病原体与宿主相互作用的机制以及发现新的病原体治疗干预靶点具有重要意义。本文介绍了Arf6的结构和功能,并对Arf6在病原体感染中所发挥的功能与调控机制作一综述。

ADP核糖基化因子样蛋白2通过下调AXL蛋白抑制宫颈癌的机制研究

目的检测宫颈癌组织中ADP核糖基化因子样蛋白2(ARL2)的表达情况,探究ARL2/AXL在宫颈癌发病过程中的作用与机制。方法收集2019年6月至2021年6月在黄冈市中心医院行手术治疗的80例宫颈癌患者的宫颈癌组织和癌旁组织,采用免疫组化检测组织中ARL2蛋白的表达量。向宫颈癌细胞系Hela细胞中转染vetor/overexpression-ARL2质粒,采用CCK8法、集落形成实验、划痕实验和Transwell侵袭实验检测过表达ARL2后Hela细胞的增殖、迁移和侵袭能力,采用Western blot法检测转染vetor/overexpression-ARL2质粒或Control-siRNA/ARL2-siRNA后Hela细胞中ARL2/AXL的表达变化。结果与癌旁组织相比,宫颈癌组织中ARL2蛋白的表达量降低(P<0.001)。转染vetor/overexpression-ARL2质粒后Hela细胞的增殖速度变慢、集落形成能力减弱、划痕愈合时间延长、侵袭能力减弱(P<0.01)。通过siRNA敲除ARL2后,AXL蛋白表达上升;而转染质粒过表达ARL2后抑制了AXL蛋白的表达(P<0.05)。结论ARL2在宫颈癌组织中表达降低,且ARL2通过抑制AXL蛋白抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖、迁移和侵袭能力,提示ARL2可能成为一种潜在的宫颈癌诊断标志物和治疗靶标。

ADP-核糖基化样因子-15及脂联素与2型糖尿病的相关性研究进展

2型糖尿病（T2DM）是以慢性血糖升高为特点的复杂性疾病,胰岛素抵抗（IR）或胰岛素分泌相对不足是T2DM发病的主要机制.据报道,我国糖尿病患病率为9.7%,患病人数近1亿,且近年来呈快速增长趋势.糖尿病可引起诸多并发症,2010年美国糖尿病协会的统计数据显示,10年以上病程的糖尿病患者出现并发症的几率高达98%.

延边地区朝鲜族ADP-核糖基化样因子15基因和内向整流通道蛋白J亚单位11号成员基因的基因单核苷酸多态与2型糖尿病的相关性

[目的]探讨ADP-核糖基化样因子15基因(ARL15)和内向整流通道蛋白J亚单位11号成员基因(KCNJ11)的单核苷酸多态(SNP)位点rs26770、rs5219与延边地区朝鲜族2型糖尿病(T2DM)的相关性.[方法]采用病例对照设计,选择延边地区朝鲜族307例,其中T2DM患者255例、糖耐量正常(NGT)人52例.利用单碱基延伸方法检测rs26770、rs5219的基因型.[结果]在显性遗传模型中,T2DM组KCNJ11基因携带rs5219位点的TT+CT基因型频率显著高于NGT组(P=0.001,OR=2.917, 95%CI:1.531~5.558);2个SNPs联合作用结果显示,T2DM组携带AA-CC和AG-CC联合基因型明显小于NGT组(P=0.008,OR=0.320, 95%CI:0.133~0.770;P=0.012,OR=0.357,95%CI:0.156~0.817).[结论]KCNJ11基因rs5219-T可能是延边地区朝鲜族人群罹患T2DM的易感因子,而携带KCNJ11和ARL15基因SNPs rs26770、rs5219的联合基因型AA-CC和AG-CC可能具有保护健康人群罹患T2DM的作用.

ADP-核糖基化样因子15与过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α基因单核苷酸多态性与糖尿病肾脏疾病的相关性研究

背景ADP-核糖基化样因子15(ARL15)基因rs4311394位点和过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)基因rs7656250位点已被证实与血脂紊乱密切相关,而血脂紊乱作为糖尿病肾脏疾病(DKD)的重要危险因素之一,其是否与DKD存在相关性尚未可知。目的探究ARL15、PGC-1α基因单核苷酸多态性(SNP)与DKD的相关性。方法选取2018-2019年于延边大学附属医院和延吉市医院确诊的朝鲜族和汉族2型糖尿病(T2DM)患者393例(记为T2DM组)、DKD患者90例(记为DKD组),同期选取在延边大学附属医院进行单位体检的健康人268例〔记为糖耐量正常组(NGT组)〕。检测所有受试者生理、生化指标,采用单碱基延伸法检测ARL15、PGC-1α基因rs4311394、rs7656250位点基因型,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测ARL15、脂联素蛋白水平。结果NGT组中汉族137例,朝鲜族131例;T2DM组中汉族205例,朝鲜族188例;DKD组中汉族55例,朝鲜族35例。NGT组汉族和朝鲜族人群ARL15基因rs4311394位点、PGC-1α基因rs7656250位点等位基因频率、基因型频率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。三组ARL15基因rs4311394位点、PGC-1α基因rs7656250位点等位基因频率、基因型频率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。三组ARL15、PGC-1α基因联合位点等位基因频率、基因型频率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。携带PGC-1α基因rs7656250位点CT基因型受试者空腹血糖(FPG)水平高于CC、TT基因型受试者(P<0.05);携带PGC-1α基因rs7656250位点CT、TT基因型受试者脂联素低于CC基因型受试者,TT基因型受试者脂联素低于CT基因型受试者(P<0.05)。T2DM组患者脂联素低于NGT组(P<0.05);DKD组患者ARL15、脂联素高于NGT组、T2DM组(P<0.05)。Spearman秩相关分析结果显示,ARL15与脂联素呈正相关(rs=0.372,P<0.05)。结论ARL15、PGC-1α基因SNP与DKD不相关,但携带PGC-1α基因rs7656250位点CT、TT基因型人群的脂联素水平下降。

ADP核糖基化因子样6相互作用蛋白1(ARL6IP1)低表达对电离辐射所致小鼠小肠上皮细胞损伤的影响

目的探讨ADP核糖基化因子样6相互作用蛋白1(ARL6IP1)对电离辐射后小肠上皮细胞损伤的影响。方法①动物实验:C57BL/6N小鼠进行^(60)Co源γ射线全腹部单次照射,剂量15 Gy,制备小鼠放射性肠损伤模型,Western印迹法测定正常对照组及照射后1,3,7和14 d小鼠空肠组织ARL6IP1蛋白表达。②细胞实验:设计3条不同序列的Arl6ip1-小干扰RNA(siRNA)(Arl6ip1-siRNA-132,Arl6ip1-siRNA-249和Arl6ip1-siRNA-565),以慢病毒LV5(EF-1aF/GFP&Puro)为载体,构建Arl6ip1敲低的小肠上皮IEC-6细胞。用流式细胞术测定上述慢病毒转染细胞绿色荧光蛋白表达,计算转染效率。分别用CCK-8法和免疫荧光法测定细胞存活率和磷酸化组蛋白H2AX(γH2AX)表达水平。结果①动物实验:与正常对照组相比,小鼠腹部照射15 Gy后1和3 d,空肠组织中ARL6IP1蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01);照射后7和14 d,ARL6IP1蛋白表达无显著差异。②细胞实验:阴性对照siRNA组和Arl6ip1-siRNA-565组慢病毒的转染效率均>80%,Arl6ip1-siRNA-132和Arl6ip1-siRNA-249组慢病毒转染效率<80%。与阴性对照siRNA组相比,转染Arl6ip1-siRNA-565慢病毒的IEC-6细胞中ARL6IP1蛋白表达显著降低(P<0.05)。照射15 Gy后,与阴性对照siRNA细胞相比,Arl6ip1-siRNA-565转染后Arl6ip1敲低细胞存活率显著下降(P<0.01),γH2AX表达显著升高(P<0.01)。结论ARL6IP1低表达可促进照射后细胞DNA损伤,抑制细胞存活,从而加重电离辐射所致小鼠小肠上皮细胞损伤。

ADP-核糖基化样因子4C在脑胶质瘤中的表达及对替莫唑胺敏感性的影响

目的探究ADP-核糖基化样因子4C在脑胶质瘤中的表达及对替莫唑胺敏感性的影响。方法选取脑胶质瘤患者45例。收集患者临床资料,采用替莫唑胺化疗后对患者进行化疗耐药分析,RT-qPCR检测ADP-核糖基化样因子4C水平。结果ARL4C mRNA的表达水平与淋巴结转移、WHO分级密切相关(P<0.05),而与肿瘤大小、性别、年龄无关(P<0.05)。敏感组患者ARL4C水平显著低于耐药组(P<0.05)。ARL4C水平均是影响脑胶质瘤对化疗药物敏感性的独立危险因素(P<0.05)。结论ADP-核糖基化样因子4C在脑胶质瘤中的表达与淋巴结转移、WHO分级关系密切,且与替莫唑胺敏感性有关,旨在为脑胶质瘤的治疗提供临床指导意义。

ADP核糖基化因子的结构及其功能机制

ADP核糖基化因子(ADP-ribosylation factor,ARF)是Ras基因超家族的成员,它们是大小约20kDa的鸟嘌呤核苷酸结合蛋白。ARF最初发现作为霍乱毒素ADP-核糖转移酶的辅助因子共同作用于G蛋白α亚基,促使其ADP-核糖基化。近来人们发现ARF还参与囊泡运输、调节磷脂酶D的活性,在细胞内物质运输和信号转导过程中具有更加重要的生理功能。现就ARF的发现、分类、结构和功能、表达以及生理功能作一综述。

松墨天牛ADP核糖基化因子1基因的序列及表达特性分析

为了探讨Ras基因超家族中ADP核糖基化因子1基因(ARF1)在昆虫生长发育进程中以及在温度胁迫下的表达特性,以松墨天牛为研究对象,从已构建的cDNA文库中筛选到松墨天牛ARF1基因,命名为MaARF1(Gen Bank:KY368168),对其进行序列分析以及不同虫态和不同温度胁迫下的表达特性分析。结果显示,MaARF1基因编码区序列长为549 bp,编码182个氨基酸。预测蛋白质二级结构主要由α螺旋与β片层组成,其次是无规则卷曲和β转角。通过DNAMAN软件比对发现,MaARF1与赤拟谷盗ARF1蛋白氨基酸序列完全一致,二者同源性为100%,且存在1个十四酰基化位点(G^2)和5个保守域(G_1 box—G_5 box)。通过RT-qPCR分析表明,MaARF1的表达量与松墨天牛的完全变态发育相关,各虫态不间断表达,幼虫期在2龄幼虫(L2)、5龄幼虫(L5)中表达量较高,蛹化期间(L5—P0)表达量表现为上升趋势,并在第2天蛹(P2)中达到最大值,羽化期间(P10—A0)表达量表现为下降趋势;MaARF1在不同温度胁迫下均有表达,低温与高温都会导致表达量下调,温度越高或越低,表达量下调越显著。因此,MaARF1可能主要影响松墨天牛蛹化和羽化这2个变态发育关键点,从而影响整个变态发育历程,同时其也可能参与了松墨天牛体内依赖温度的Ca^(2+)信号途径。

ADP核糖基化因子与消化道肿瘤

二磷酸腺苷-核糖基化作用因子（ADP-ribosylation factor,ARF）是广泛存在于真核生物细胞膜上,属于小G蛋白Ras家族,是大小约20×10^3的GTP结合蛋白。1982年ARF首次被发现,并根据它能作为霍乱毒素催化Gs蛋白ADP核糖基化反应的辅助因子而命名[1]。

ADP-核糖基化因子拮抗剂对人视网膜血管内皮细胞形成血管管腔的抑制作用及其机制

背景研究证实ADP-核糖基化因子（ARF）能促进角膜组织中促血管相关因子的分泌，如血管内皮生长因子（VEGF）和一氧化氮合酶（NOS）等，从而导致病理状态下角膜新生血管的发生，但ARF对人视网膜膜血管内皮细胞（HRECs）管腔形成能力的影响和机制尚不清楚，了解ARF对HRECs形成管腔能力的影响对研究视网膜新生血管相关疾病的靶向治疗具有重要意义。 目的探讨ARF拮抗剂对HRECs管腔形成能力的影响以及其作用机制。 方法对HRECs进行常规培养和传代，取对数生长期细胞分为对照组和ARF拮抗剂组，对照组细胞在实验过程中按常规培养法培养，培养基中不添加ARF拮抗剂，而ARF拮抗剂组细胞在后续实验时于培养液中添加15 μmol/L的ARF拮抗剂1 ml。采用逆转录PCR法和Western blot法检测ARF mRNA及蛋白在HRECs中的表达。应用半固态Matrigel胶体外三维成型法检测对照组和ARF拮抗剂组HRECs形成管腔形态和数目。采用RT-PCR和Western blot法检测VEGF、NOS、局部黏着斑激酶（FAK）、热休克蛋白90（HSP90）mRNA及蛋白在各组HRECs中的相对表达量。 结果逆转录PCR和Western blot法检测显示，对照组和ARF拮抗剂组HRECs中ARF mRNA的相对表达量分别为0.65±0.14和0.32±0.10，对照组和ARF拮抗剂组HRECs中ARF蛋白的相对表达量分别为0.85±0.15和0.24±0.17，ARF拮抗剂组ARF mRNA及其蛋白的相对表达量均明显低于对照组，差异均有统计学意义（t＝7.32，P＝0.00；t＝5.15，P＝0.00）。对照组和ARF拮抗剂组HRECs形成管腔的数量分别为（51.46±7.12）和（34.66±8.57）个/视野，差异有统计学意义（t＝2.99，P＝0.04）。RT-PCR和Western blot法检测显示，ARF拮抗剂组HRECs中VEGF mRNA和NOS mRNA及蛋白的相对表达量均明显低于对照组，差异均有统计学意义（t＝3.02，P＝0.04；t＝3.68，P＝0.02；t＝3.33，P＝0.03；t＝2.89，P＝0.04）。ARF拮抗剂组HRECs中FAK mRNA和HSP90 mRNA的相对表达量分别为0.65±0.18和0.28±0.05，均明显低于对照组中0.76±0.25和0.46±0.09，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。 结论ARF拮抗剂对HRECs的管腔形成能力有抑制作用，其作用机制可能与下调VEGF、NOS和下游重要信号转导因子FAK、HSP90在HRECs中的表达有关。

siRNA特异性沉默ADP核糖基化因子6对前列腺癌PC-3细胞增殖、迁移和侵袭的影响（英文）

目的研究ADP核糖基化因子6(Arf6)对雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞株增殖、迁移和侵袭能力的影响并初步探讨其可能的分子作用机制。方法设计合成3条针对不同靶向区域的Arf6特异性si RNA序列,转染细胞后通过real-time PCR和蛋白质印迹法检测其对Arf6的干扰效果,筛选出干扰效果最佳的si RNA序列;通过噻唑盐(MTT)实验、划痕实验、及transwell细胞迁移和侵袭实验观察si RNA干扰Arf6表达对PC-3细胞增殖、迁移和侵袭的影响;蛋白质印迹法检测AKT、p-AKT、ERK1/2、p-ERK1/2和Rac1蛋白表达水平的变化。结果与空白对照组相比,转染阴性对照序列对PC-3细胞内源性Arf6的m RNA和蛋白表达水平无明显影响,3条si RNA序列均能抑制Arf6的表达,其中si RNA-3对PC-3细胞Arf6表达干扰效果最好,Arf6m RNA和蛋白抑制率分别为(91.88±3.13)%和(86.37±0.57)%。si RNA-3干扰Arf6表达抑制PC-3细胞的增殖,且PC-3细胞体外迁移距离和侵袭细胞数较空白和阴性对照组明显减少(P<0.05)。蛋白质印迹法检测发现转染si RNA-3的PC-3细胞p-ERK1/2和Rac1表达水平明显降低,而AKT、p-AKT和ERK1/2表达水平较对照组差异无统计学意义。结论 si RNA干扰Arf6表达可显著抑制PC-3细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其分子作用机制可能与p-ERK1/2和Rac1表达下调相关。

黄芪甲苷通过抑制氯化物细胞内通道蛋白4/ADP核糖基化因子6信号通路改善血管紧张素Ⅱ诱导的高血压大鼠模型的心肌损伤

目的探究黄芪甲苷在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的高血压大鼠模型中的心肌保护作用及其机制。方法将60只SD大鼠分随机分为6组,每组10只:对照组,模型组,黄芪甲苷低(10 mg/kg)、中(20 mg/kg)、高剂量(50 mg/kg)组和ADP核糖基化因子6(Arf6)特异性抑制剂(NAV-2729)组。建立AngⅡ诱导高血压心肌损伤大鼠模型后给予不同药物或剂量处理2周后,观察各组大鼠左心室舒张末期内径、心脏射血分数及短轴缩短率、心肌病理损伤、心肌细胞凋亡以及相关凋亡蛋白B细胞淋巴瘤因子-2(Bcl-2)及Bcl-2关联X蛋白(Bax)表达情况。另选30只SD大鼠随机分为3组,每组10只:氯化物细胞内通道蛋白4(CLIC4)过表达联合黄芪甲苷组、腺病毒阴性对照联合黄芪甲苷组及腺病毒阴性对照组。先通过尾静脉注射相应腺病毒,再用AngⅡ诱导高血压模型。2周后观察大鼠左心室舒张末期内径、心脏射血分数及短轴缩短率、心肌病理损伤、心肌细胞凋亡情况。结果与模型组大鼠比较,中剂量和高剂量的黄芪甲苷能够改善AngⅡ诱导的高血压心肌损伤模型大鼠的心脏功能及心肌结构,促进抗凋亡蛋白Bcl-2表达(0.36±0.01比0.22±0.02,0.78±0.01比0.22±0.02;均P<0.05),抑制Bax表达(1.51±0.02比2.13±0.03,1.22±0.01比2.13±0.03;均P<0.05)。黄芪甲苷通过抑制CLIC4/Arf6蛋白表达发挥心肌保护作用,过表达CLIC4则减弱这种保护作用。结论黄芪甲苷能够改善AngⅡ诱导的高血压大鼠模型中的心肌损伤,可能通过抑制CLIC4/Arf6信号通路实现。

BTG2、ARL2在非小细胞肺癌中的表达及其病理分型的相关性

目的探讨ADP核糖基化样因子2(ARL2)、B细胞异位基因2(BTG2)蛋白在非小细胞肺癌组织中表达水平及其病理分型相关性分析。方法选择2021年5月—2022年5月本院收治的60例非小细胞肺癌患者作为研究对象,共收集非小细胞肺癌的癌组织和癌旁正常组织标本60对,其中非小细胞肺癌的癌组织作为实验组,癌旁正常组织作为对照组。应用免疫组化方法分别检测非小细胞肺癌患者的癌组织和癌旁组织中ARL2蛋白和BTG2蛋白的表达水平。分析ARL2蛋白和BTG2蛋白的表达水平与非小细胞肺癌的临床病理分型相关性。结果实验组中ARL2蛋白表达阳性率为66.7%,,明显高于对照组的25.4%(P<0.05);实验组中BTG2蛋白表达阳性率为20.6%,明显低于对照组的71.4%(P<0.05)。ARL2、BTG2蛋白表达与患者年龄、性别无相关性,差异无统计学意义(P>0.05);而与肿瘤TNM分期、淋巴结转移、肿瘤最大直径、复发率、病理学分级、复发相关性密切,差异具有统计学意义(P<0.05)。统计患者的1年生存率为47.6%(29/60),其中ARL2阳性生存率为31.0%(6/20),ARL2阴性生存率为81.0%(30/40);BTG2阳性生存率为96.1%(25/26),BTG2阴性生存率为35.0%(11/34);ARL2阴性、BTG2阳性非小细胞肺癌患者生存率显著增高(P<0.001)。结论非小细胞肺癌患者的ARL2蛋白表达明显升高,BTG2蛋白表达水平明显降低,证实了ARL2水平的高表达和BTG2的低表达,对非小细胞肺癌患者的ARL2阳性蛋白、BTG2阴性表达与病理分型有着十分密切的相关性,值得未来在预后方面进一步研究探讨。

转化生长因子-β受体Ⅱ环状RNA通过调节核糖核酸结合蛋白2/胚胎致死性异常视觉样蛋白1促进前列腺癌发生发展

目的探讨前列腺癌细胞中转化生长因子-β受体Ⅱ环状RNA(circTGFBR2)调节核糖核酸结合蛋白2(PTBP2)/胚胎致死性异常视觉样蛋白1(ELAVL1)激活SMAD2信号途径促进前列腺癌发生发展。方法利用生物信息学方法, 寻找与circTGFBR2结合microRNA以及其他相关蛋白结合位点, 以及与PTBP2存在相互作用的RNA结合蛋白。PC3转染pcDNA3.1-circTGFBR2后, 实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测circTGFBR2的表达。PC3细胞过表达circTGFBR2同时敲低微小RNA(microRNA, miR)-29b, 蛋白质印迹法(Western blot)检测ALK5、SMAD2及p-SMAD2表达。PC3分别转染pcDNA3.1-circTGFBR2及对照质粒后, 利用circTGFBR2特异性探针进行pulldown, 检测PTBP2与circTGFBR2的相互作用。过表达circTGFBR2与ELAVL1, 检测细胞上皮-间充质转化(EMT)的标志基因E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及ZMYM1表达, 以及Transwell检测细胞迁移。组间比较应用单因素方差分析。结果分析结果显示circTGFBR2存在多个miR-29b结合的位点, ALK5(又名TGFBR1)mRNA 3’端非编码区(3’UTR)同样存在miR-29b的结合位点, 并证实PTBP2与另一个RNA结合蛋白ELAVL1存在相互作用。用转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激PC3细胞发现, circTGFBR2的表达高于对照组(1.83±0.02比1.03±0.02, F=2 832.200, P<0.01)。PC3分别转染pcDNA3.1-circTGFBR2及对照质粒后, RT-qPCR检测circTGFBR2的表达, 可见circTGFBR2组高于对照组(176.41±1.21比1.04±0.02, F=63 426.15, P<0.01)。应用miR-29b抑制剂或circTGFBR2处理细胞后ALK5的蛋白水平明显高于对照组, 应用miR-29b抑制剂同时过表达circTGFBR2后进一步增加ALK5的表达(分别为0.15±0.01、0.48±0.02、0.55±0.01、0.74±0.01, F=1268.314, P<0.01), 并且SMAD2(分别为1.14±0.02、1.28±0.02、1.42±0.01、1.5±0.25, F=4.852, P<0.01)和p-SMAD2(分别为0.18±0.02、0.36±0.01、0.65±0.01、0.94±0.02, F=1663.667, P<0.01)的磷酸化水平也呈相同趋势。Pulldown-MS实验, 多个蛋白质能与circTGFBR2结合, 并证实PTBP2与circTGFBR2相互作用。与对照组比较, 敲低前列腺癌细胞PTBP2或过表达circTGFBR2时, 间质标志基因Vimentin表达高于对照组, 而上皮样标志基因E-cadherin表达低于对照组, 当同时过表达circTGFBR2并敲低PTBP2会逆转上述结果(Vimentin分别为0.22±0.02、0.87±0.02、0.85±0.02、0.6±0.01, F=1319.52, P<0.01;E-cadherin分别为0.80±0.01、0.45±0.03、0.36±0.02、0.9±0.02, F=614.919, P<0.01)。当过表达circTGFBR2或高表达ELAVL1时, PTBP2与ELAVL1的相互作用减弱, 细胞EMT的标志基因E-cadherin表达低于对照组, Vimentin及ZMYM1表达高于对照组, Transwell检测细胞迁移高于对照组, 而当同时高表达ELAVL1及circTGFBR2时, 上述趋势会进一步增强(Vimentin分别为0.22±0.02、0.87±0.02、0.85±0.02、0.6±0.01, F=1 319.52, P<0.01;E-cadherin分别为0.93±0.02、0.76±0.02、0.43±0.02、0.27±0.01, F=1 108.46, P<0.01;ZMYM1分别为0.24±0.01、0.53±0.02、0.32±0.01、1.04±0.02, F=2 023.794, P<0.01)。结论 circTGFBR2通过调节PTBP2/ELAVL1激活SMAD2信号途径促进前列腺癌发生发展。

口腔癌患者癌组织KLF5和KDM2A表达与临床病理特征及预后的关系

目的探讨口腔癌患者癌组织Krüppel样因子5(KLF5)、赖氨酸去甲基化酶2A(KDM2A)表达与临床病理特征及预后的关系。方法回顾性收集2015年1月至2018年1月在自贡市第一人民医院进行手术治疗的80例口腔癌患者癌组织作为研究对象,另选取正常癌旁组织作为对照。采用免疫组织化学染色法检测口腔癌患者癌组织及癌旁组织KLF5和KDM2A表达情况,并采用Spearman相关性分析癌组织KLF5和KDM2A表达的相关性。收集口腔癌患者临床病理特征资料,分析癌组织KLF5和KDM2A表达情况与患者临床病理特征的关系,以及经多因素Cox回归分析口腔癌患者预后的影响因素,并进一步采用Kaplan-Meier法分析KLF5和KDM2A表达情况与口腔癌患者预后的关系。结果口腔癌患者癌组织KDM2A和KLF5高表达率显著高于癌旁组织KDM2A和KLF5高表达率,差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示,口腔癌患者癌组织KLF5和KDM2A表达呈正相关(r=0.375,P<0.05)。口腔癌患者KLF5和KDM2A表达与TNM分期、临床分期、有无淋巴结转移、有无局部浸润和分化程度有关(P<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示,KLF5、KDM2A表达水平、TNM分期、淋巴结转移、局部浸润和分化程度均为口腔癌患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。癌组织KLF5、KDM2A高表达患者5年生存率[依次为38.88%(21/54)、42.37%(25/59)],均低于癌组织KLF5、KDM2A低表达患者5年生存率[依次为65.38%(17/26)、61.90%(13/21)],差异有统计学意义(χ^(2)=6.554、4.046,P<0.05)。结论口腔癌患者癌组织KLF5和KDM2A呈高表达且影响患者预后。

二磷酸腺苷核糖基化因子6对甲状腺乳头状癌细胞增殖和转移的影响

目的探讨二磷酸腺苷核糖基化因子6(ARF6)对甲状腺乳头状癌细胞B-CPAP增殖和转移的影响及相关机制。方法在B-CPAP细胞中构建ARF6沉默细胞系及瞬时转染外源3×Flag-ARF6;利用EdU、CCK-8实验检测ARF6对B-CPAP细胞增殖的影响;利用Transwell实验检测ARF6对B-CPAP细胞转移的影响;利用蛋白质印迹法(Westernblotting)检测沉默及过表达ARF6对细胞外调节激酶1/2(ERK1/2)、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达的影响。结果与对照组相比,沉默ARF6后B-CPAP细胞的增殖、侵袭和迁移的能力明显下降[ARF6沉默组及其对照组EdU阳性细胞的比例分别为(33.75±1.50)%和(39.65±2.21)%,第5天OD值分别为(0.66±0.03)和(0.83±0.03),细胞侵袭数量分别为(614.66±18.52)和(898.34±38.94)个,细胞迁移数量分别为(588.67±18.02)和(922.32±34.91)个,均P<0.05]。与对照组相比,过表达ARF6后B-CPAP细胞的增殖、侵袭和迁移的能力明显提升[ARF6过表达组及其对照组EdU阳性细胞的比例分别为(46.53±4.09)%和(36.89±2.27)%,第5天OD值分别为(1.06±0.03)和(0.81±0.02),细胞侵袭数量分别为(943.68±24.69)和(758.42±10.78)个,细胞迁移数量分别为(974.68±23.68)和(726.32±27.04)个,均P<0.05]。沉默ARF6可上调B-CPAP细胞中p-ERK1/2和MMP-9的表达、下调E-cadherin的表达,过表达ARF6时则相反,均P<0.05。结论ARF6可能通过调控p-ERK1/2、MMP-9及E-cadherin的蛋白表达,从而促进甲状腺乳头状癌细胞B-CPAP的增殖和转移。

基于转录组测序技术分析穿心莲内酯抑制HepG2.CW细胞分泌乙型肝炎病毒表面抗原作用机制

目的基于转录组测序技术分析穿心莲内酯(andrographolide)抑制乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)分泌的作用机制。方法BALB/c小鼠ig给予穿心莲内酯0(正常对照组),6.25和18.75 mg·kg^(-1),24 h后取肝组织进行转录组测序,采用R包edgeR分析穿心莲内酯作用后的差异基因,用2个剂量组差异基因的交集作为穿心莲内酯作用后显著变化的基因。用含乙型肝炎病毒(HBV)基因组的HepG2.CW细胞作为验证模型,与不同浓度穿心莲内酯(1.5625,3.125,6.25和12.5μmol·L^(-1))分别作用12,24,48或72 h,采用CCK-8法检测细胞存活率;实时荧光定量PCR检测差异基因表达水平,对转录组测序结果进行验证;化学发光法检测HepG2.CW细胞培养上清中HBsAg和乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)含量。结果转录组测序结果显示,与正常对照组相比,穿心莲内酯6.25 mg·kg^(-1)组小鼠肝组织检出151个差异基因,其中72个基因上调,79个基因下调;穿心莲内酯18.75 mg·kg^(-1)组检出50个差异基因,其中25个基因上调,25个基因下调;2个剂量组同时显著变化的基因共17个,其中ADP核糖基化因子样蛋白4D(Arl4d)基因上调,肝细胞核因子6(HNF6)和Arl8a基因下调。与细胞对照组相比,穿心莲内酯1.5625,3.125和6.25μmol·L^(-1)组细胞存活率显著提高(P<0.01),12.5和25μmol·L^(-1)组细胞存活率无显著差异,50μmol·L^(-1)组细胞存活率显著降低(P<0.01);穿心莲内酯3.125,6.25和12.5μmol·L^(-1)组细胞内Arl4d mRNA表达水平均显著降低(P<0.01),穿心莲内酯各浓度组细胞培养上清中HBsAg含量均显著降低(P<0.01),细胞内Arl4d mRNA表达水平与细胞培养上清中HBsAg含量呈显著正相关(r=0.8525,P<0.01)。与细胞对照组相比,穿心莲内酯6.25μmol·L^(-1)作用HepG2.CW细胞12,24和48 h,细胞内Arl4d mRNA表达量均显著降低(P<0.05,P<0.01),作用72 h,细胞培养上清中HBsAg含量显著降低(P<0.01)。结论穿心莲内酯可能通过降低HepG2.CW细胞内Arl4d mRNA的表达,进而抑制HBsAg分泌。

多聚ADP-核糖结合蛋白的鉴定

多聚ADP-核糖基化(poly(ADP-ribose),PAR)是一种蛋白翻译后修饰方式,在很多细胞生命过程中行使重要的功能.近年来已经鉴定了许多被PAR修饰或与PAR结合的蛋白.本研究中,通过亲和纯化和质谱分析的方法发现了很多与PAR结合的蛋白,其中包括一些已经报道的与PAR结合的蛋白,但大部分是未知的.通过体外实验,我们进一步验证了HRP-2,CDK9,EWSR和FXR1与PAR的结合,并发现HRP家族的PWWP结构域是一个特异的与PAR结合的结构域.此外,HPR-2缺失的细胞对DNA损伤试剂敏感,说明HRP-2参与了DNA的损伤应答过程,可能在DNA损伤修复中起到非常重要的作用.

ADP核糖基化因子的GTP酶激活蛋白1、肌动蛋白束蛋白1在胃癌组织中的表达及与患者预后的关系

目的探讨ADP核糖基化因子的GTP酶激活蛋白1(ASAP1)、肌动蛋白束蛋白1(FSCN1)在胃癌中的表达、预后相关性。方法运用UALCAN、Kaplan-Meier数据库分析ASAP1、FSCN1在胃癌组织与正常胃黏膜组织中的表达与患者预后的关系,并采用qRT-PCR、免疫组化验证ASAP1、FSCN1在胃癌与癌旁的表达差异。结果与正常胃黏膜组织相比,ASAP1、FSCN1在胃癌组织中表达升高(P<0.01),且ASAP1、FSCN1高表达组患者的总生存率下降(P<0.05)。qRT-PCR显示胃癌中ASAP1、FSCN1 mRNA的表达水平高于癌旁正常黏膜组织(P<0.05)。免疫组化结果显示,胃癌ASAP1、FSCN1阳性表达率高于癌旁正常胃黏膜组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。ASAP1 mRNA和FSCN1 mRNA的表达成正相关(r=0.558,P=0.000)。ASAP1、FSCN1的表达与胃癌浸润深度、淋巴结转移及远处转移相关(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析发现,ASAP1、FSCN1阴性表达总体生存率高于阳性表达(P<0.05)。结论ASAP1、FSCN1在胃癌组织中均高表达,2者可能协同促进胃癌的发生和发展,且在胃癌的浸润、转移中发挥了重要作用。