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题名大肠杆菌不耐热肠毒素突变体的原核表达及其活性研究
被引量:6
- 1
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作者
唐思静
刘惠莉
马勋
赵艳敏
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机构
上海市农业科学院畜牧兽医研究所
新疆巴音郭楞职业技术学院
石河子大学动物科技学院
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出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第9期697-701,共5页
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基金
上海市科技兴农重点攻关项目[2005攻字(10-1)]
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文摘
为使大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)的毒性丧失或减弱的同时仍保留其较强的免疫原性,本实验通过PCR和重叠-延伸PCR扩增,制备了突变体LTR72/G192的基因片段,经酶切和测序结果表明构建的表达载体pLTR72/G192阅读框架正确,而且相应位点氨基酸获得了替换。IPTG诱导表达目的蛋白经SDS-PAGE电泳检测,表达出突变体重组蛋白为约30 ku和10 ku的两个蛋白带,与LTA、LTB亚基分子量相吻合。Western blot检测结果表明两个蛋白亚基均可与His抗体发生特异性反应。目的蛋白经纯化后进行ADP-核酸转移酶试验及Patent-mouse毒性试验检测其酶活性与毒性,突变重组蛋白与野生型LT相比其酶活性和毒性均明显降低。纯化的目的蛋白与鸡新城疫病毒弱毒疫苗联合一起经滴鼻免疫鸡,ELISA结果显示,突变体LTR72/G192能辅助新城疫疫苗在血清和黏膜中产生较高滴度的抗新城疫病毒的IgG和IgA。
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关键词
大肠杆菌不耐热肠毒素
免疫原性
adp-核酸转移酶
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Keywords
heat-labile enterotoxin
immunogenicity
adp-ribosyltransferase
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分类号
S852.4
[农业科学—基础兽医学]
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题名大肠埃希菌不耐热肠毒素双突变体的表达及活性研究
被引量:1
- 2
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作者
唐思静
姜云
吕转平
刘惠莉
马勋
赵艳敏
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机构
新疆巴音郭楞职业技术学院
新疆兵团第二师畜牧兽医工作站
上海市农业科学院畜牧兽医研究所
石河子大学动物科技学院
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出处
《西北农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第9期8-13,共6页
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基金
上海市科技兴农重点攻关项目[2005攻字(10-1)]
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文摘
为了使大肠埃希菌不耐热肠毒素(LT)的毒性丧失或减弱的同时仍保留其较强的免疫原性,通过PCR和重叠—延伸PCR扩增突变体LTK63/G192基因片段,IPTG诱导表达目的蛋白,经Western免疫印迹检测目的蛋白,在HPLC系统上纯化目的蛋白,经ADP-核酸转移酶试验及Patent-mouse毒性试验检测其酶活性与毒性,纯化的目的蛋白与鸡新城疫病毒弱毒疫苗联合一起经滴鼻免疫鸡。结果表明:制备的突变体LTK63/G192的基因片段经酶切和测序发现,所构建的表达载体pLTK63/G192阅读框架正确,且相应位点氨基酸获得了替换;经SDS-PAGE电泳检测,野生型LT及双突变体均表达出约33.0ku和13.0ku的两条蛋白带,与LTA、LTB亚基分子质量相吻合;经Western bolt检测,两个蛋白亚基均可与His抗体发生特异性反应;双突变蛋白的酶活性和毒性与野生型LT相比酶活性和毒性都有所降低;突变体LTK63/G192能辅助新城疫疫苗在血清和黏膜中产生较高抗新城疫病毒的IgG和IgA。说明LTK63/G192是一个良好的免疫佐剂。
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关键词
大肠埃希菌不耐热肠毒素
免疫原性
adp-核酸转移酶
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Keywords
Heat-labile enterotoxin
Immunogenicity
adp-ribosyltransferase
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分类号
Q78
[生物学—分子生物学]
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