lncRNA ADPGK-AS1通过调控miR-217表达对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的研究lncRNA ADPGK-AS1和miR-217在非小细胞肺癌中的表达及其对非小细胞肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。方法以癌旁组织为对照,qRT-PCR检测lncRNA ADPGK-AS1和miR-217在116例非小细胞肺癌组织中的表达水平,双荧光素酶报告系统验证ADPGK-AS1和miR-217的调控关系,在A549细胞中转染si-ADPGK-AS1和miR-217以抑制lncRNA ADPGK-AS1和过表达miR-217,MTT法和流式细胞术检测A549细胞增殖和凋亡,Western blot检测细胞中CyclinD1、p21、Bax和Bcl-2的蛋白表达水平。结果与癌旁组织相比,在116例非小细胞肺癌组织中lncRNA ADPGK-AS1的含量显著升高(P<0.05),miR-217的含量则显著下降(P<0.05);lncRNA ADPGK-AS1靶向负调控miR-217的表达;抑制ADPGK-AS1表达和过表达miR-217均可抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖并促进细胞凋亡,使细胞中CyclinD1和Bcl-2含量降低(P<0.05),p21和Bax含量升高(P<0.05);干扰miR-217表达逆转了抑制ADPGK-AS1表达对A549细胞增殖、凋亡的作用。结论 LncRNA ADPGK-AS1可能通过靶向miR-217促进非小细胞肺癌A549细胞增殖,抑制细胞凋亡。LncRNA ADPGK-AS1可能是非小细胞肺癌的潜在分子靶点。

ADPGK-AS1调控miR-1301-3p基因表达影响胃癌细胞增殖和凋亡的机制研究

目的探讨二磷酸腺苷依赖葡糖激酶反义RNA1(ADPGK-AS1)对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法培养人胃黏膜上皮正常细胞系GES-1和胃癌细胞系AGS、HGC-27和Hs-746T,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中ADPGK-AS1和微小RNA-1301-3p(miR-1301-3p)表达水平。转染ADPGK-AS1小干扰RNA或miR-1301-3p模拟物至HGC-27细胞,四甲基噻唑蓝染色法(MTT)、流式细胞术和蛋白印迹(Western blot)分别检测沉默ADPGK-AS1或过表达miR-1301-3p对HGC-27细胞增殖、凋亡及增殖细胞核抗原(PCNA)、Ki-67、剪切型聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(Cleaved PARP)、剪切型半胱天冬酶-3(Cleaved caspases-3)、磷酸化p38(p-p38)和磷酸化p53(p-p53)蛋白表达的影响。双荧光素酶报告基因实验验证ADPGK-AS1与miR-1301-3p调控关系。结果与GES-1细胞比较,胃癌细胞AGS、HGC-27和Hs-746T中ADPGK-AS1表达水平升高(P<0.05),miR-1301-3p表达水平降低(P<0.05)。沉默ADPGK-AS1或过表达miR-1301-3p后,HGC-27细胞存活率及PCNA、Ki-67和Cleaved caspase-3蛋白表达降低(P<0.05),细胞凋亡率和Cleaved PARP蛋白表达升高(P<0.05)。沉默ADPGK-AS1还可促进HGC-27细胞p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)信号途径蛋白p-p38和p-p53表达(P<0.05)。ADPGK-AS1在HGC-27细胞中靶向负调控miR-1301-3p表达。抑制miR-1301-3p表达降低了沉默ADPGK-AS1对HGC-27细胞增殖、凋亡及PCNA、Ki-67、Cleaved caspase-3、Cleaved PARP、p-p38和p-p53表达的影响。结论沉默ADPGK-AS1表达抑制胃癌细胞增殖,并促进细胞凋亡,其机制与靶向上调miR-1301-3p表达和激活p38MAPK信号通路有关。

lncRNA ADPGK-AS1、miR-1301-3p的表达与胃腺癌预后的关系

目的研究长链非编码RNA(lncRNA)ADPGK-AS1及微小RNA(miR)-1301-3p的表达与胃腺癌预后的关系。方法选择2016年5月至2018年5月河北医科大学第二医院收治的142例胃腺癌患者。实时定量PCR检测癌组织和癌旁组织中lncRNA ADPGK-AS1、miR-1301-3p表达,并根据两者的平均值分为lncRNA ADPGK-AS1高表达组(69例)、lncRNA ADPGK-AS1低表达组(73例)、miR-1301-3p高表达组(70例)、miR-1301-3p低表达组(72例)。Pearson相关性分析癌组织中lncRNA ADPGK-AS1与miR-1301-3p表达的相关性。采用在线生物信息学软件预测lncRNA ADPGK-AS1与miR-1301-3p之间的相互结合位点。应用Kaplan-Meier生存分析不同lncRNA ADPGK-AS1、miR-1301-3p表达水平对患者生存情况的影响。结果癌组织中lncRNA ADPGK-AS1、miR-1301-3p的表达高于癌旁组织(P<0.05)。lncRNA ADPGK-AS1与miR-1301-3p呈正相关(r=0.601,P<0.01)。lncRNA ADPGK-AS1在2422~2443碱基处与miR-1301-3p存在结合位点。lncRNA ADPGK-AS1高表达组患者中位生存期为23.3个月(95%CI:15.2~26.1),低于lncRNA ADPGK-AS1低表达组的31.6个月(95%CI:22.9~34.9)(P<0.05)。miR-1301-3p高表达组患者中位生存期为24.2个月(95%CI:17.6~28.5),低于miR-1301-3p低表达组的30.5个月(95%CI:21.6~34.5)(P<0.05)。结论胃癌中lncRNA ADPGK-AS1、miR-1301-3p表达升高,两者存在结合位点,是胃癌预后预测的潜在分子标志物。

长链非编码RNA二磷酸腺苷依赖的葡萄糖激酶反义RNA1通过靶向miR-200b-5p促进视网膜母细胞瘤细胞增殖抑制凋亡

目的探讨长链非编码RNA二磷酸腺苷依赖的葡萄糖激酶反义RNA1(lnc RNA ADPGK-AS1)对视网膜母细胞瘤细胞增殖及凋亡的影响及其可能的作用机制。方法收集2020年2—6月河南省立眼科医院收治的31例视网膜母细胞瘤患者的肿瘤组织及其相应癌旁正常组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测视网膜母细胞瘤组织和癌旁正常组织中lncRNA ADPGK-AS1、miR-200b-5p的表达水平。体外培养人视网膜上皮细胞ARPE-19、人视网膜母细胞瘤细胞Y-79和WERI-Rb-1,qRT-PCR法检测lncRNA ADPGK-AS1、miR-200b-5p的表达水平。以Y-79细胞为研究对象,随机分组si-con组、si-lncRNA ADPGK-AS1组、miR-con组、miR-200b-5p组、si-lncRNA ADPGK-AS1+anti-miR-con组、si-lncRNA ADPGK-AS1+anti-miR-200b-5p组。四甲基偶氮唑蓝法、平板克隆形成实验与流式细胞术分别检测各组细胞的增殖、克隆及凋亡情况,双荧光素酶报告实验检测lncRNA ADPGK-AS1与miR-200b-5p的靶向关系,Western blot法检测Cleaved-caspase-3蛋白的表达水平。结果视网膜母细胞瘤组织中lncRNA ADPGK-AS1的表达水平高于癌旁正常组织,miR-200b-5p的表达水平低于癌旁正常组织(均P<0.05);Y-79、WERI-Rb-1细胞中lncRNA ADPGK-AS1的表达水平高于ARPE-19细胞,miR-200b-5p的表达水平低于ARPE-19细胞(均P<0.05)。si-lncRNA ADPGK-AS1组细胞吸光度(A)值(0.53±0.05)、细胞克隆形成数[(57.00±4.13)个]低于si-con组[分别为1.06±0.09和(114.00±8.03)个,均P<0.05],细胞凋亡率[(25.43±1.94)%]高于si-con组[(7.93±0.68)%,P<0.05],Cleaved-caspase-3蛋白水平高于si-con组(P<0.05)。miR-200b-5p组细胞A值(0.57±0.05)、细胞克隆形成数[(64.00±5.13)个]低于miR-con组[分别为1.05±0.08和(118.00±10.02)个,均P<0.05],细胞凋亡率[(23.15±1.62)%]高于miR-con组[(7.89±0.71)%,P<0.05],Cleaved-caspase-3蛋白水平高于miR-con组(P<0.05)。lncRNA ADPGK-AS1可靶向调控miR-200b-5p的表达。si-lncRNA ADPGK-AS1+anti-miR-200b-5p组细胞A值(1.25±0.10)、细胞克隆形成数[(125.00±10.03)个]高于si-lncRNA ADPGK-AS1+anti-miR-con组[分别为0.53±0.04和(54.00±4.39)个,均P<0.05],细胞凋亡率[(9.76±0.71)%]低于si-lncRNA ADPGK-AS1+anti-miR-con组[(25.38±1.53)%,P<0.05],Cleaved-caspase-3蛋白水平低于si-lncRNA ADPGK-AS1+anti-miR-con组(P<0.05)。结论抑制lncRNA ADPGK-AS1表达可通过靶向调控miR-200b-5p表达而抑制视网膜母细胞瘤细胞增殖及克隆形成,并可诱导细胞凋亡。