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乙型肝炎病毒(adr亚型)转基因小鼠的研究 被引量:32
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作者 胡卫江 李建秀 +6 位作者 余宏宇 戴德顺 王新民 孙伟 郝光荣 王肖鹏 胡以平 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期212-215,共4页
目的:制备含有2.0拷贝乙型肝炎病毒(HBV,adr亚型)基因组的转基因小鼠,为HBV相关医学问题的研究准备实验动物模型。方法:应用受精卵原核显微注射的方法,产生HBV转基因小鼠。用PCR,Southern-blot... 目的:制备含有2.0拷贝乙型肝炎病毒(HBV,adr亚型)基因组的转基因小鼠,为HBV相关医学问题的研究准备实验动物模型。方法:应用受精卵原核显微注射的方法,产生HBV转基因小鼠。用PCR,Southern-bloting杂交、放射免疫、免疫组织化学以及亚显微结构分析等方法,研究外源基因在转基因小鼠体内的整合、表达以及复制。应用常规病理切片及血清生物化学方法分析转基因小鼠的病理学改变。结果:得到了4只整合有HBV基因组的建立者小鼠,并证明HBV基因在转基因小鼠体内可以稳定遗传,在肝、肾组织内可特异性表达、复制,并在肝细胞内发现了Dane颗粒。转基因小鼠的肝、肾组织未见明显的病理学改变。结论:获得了HBV的转基因小鼠,其病毒基因可以表达,并有病毒颗粒形成。该小鼠对于HBV的各个基因产物是免疫耐受的,其基本生物学特性与人类的HBV携带者特征相似。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 转基因小鼠 DANE颗粒 adr亚型
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Adr亚型乙型肝炎病毒转染细胞模型的构建 被引量:2
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作者 赵艳芳 闫永平 +5 位作者 张磊 王安辉 苏海霞 门可 张景霞 徐德忠 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期1066-1068,共3页
目的建立乙型肝炎病毒(HBV)复制状态的细胞模型。方法利用分子亚克隆技术,将9600bp的adr亚型HBV全基因克隆至pcDNA3的EcoRI和HindIII位点构建pcDNA3-3HBV,通过脂质体介导的方法转染HepG2细胞,G418筛选。结果成功构建了质粒pcDNA3-3HBV,... 目的建立乙型肝炎病毒(HBV)复制状态的细胞模型。方法利用分子亚克隆技术,将9600bp的adr亚型HBV全基因克隆至pcDNA3的EcoRI和HindIII位点构建pcDNA3-3HBV,通过脂质体介导的方法转染HepG2细胞,G418筛选。结果成功构建了质粒pcDNA3-3HBV,稳定转染后培养上清,ELISA检测结果显示,HBsAg、HBeAg阳性,且PCR检测前S/S基因阳性。PCR证实转染细胞中有HBV cccDNA存在,RT-PCR证实HBV S基因mRNA的表达。结论重组质粒pcDNA3-3HBV能在HepG2细胞中表达、转录、复制。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 adr亚型 真核表达质粒 转染 基因表达
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Adr亚型HBV转染人胎盘滋养层细胞株的体外研究 被引量:1
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作者 张磊 邵晨 +6 位作者 赵艳芳 张景霞 马向东 邵中军 门可 闫永平 徐德忠 《中国全科医学》 CAS CSCD 2008年第1期28-30,共3页
目的通过转染adr亚型HBV-DNA,建立可复制HBV的人胎盘滋养层细胞(HPT-8)。方法采用脂质体介导的方法将重组真核表达质粒pcDNA3-3HBV转染人胎盘滋养层细胞,经G418筛选,通过ELISA、免疫组化、PCR等方法对转染细胞和培养上清分别进行检测。... 目的通过转染adr亚型HBV-DNA,建立可复制HBV的人胎盘滋养层细胞(HPT-8)。方法采用脂质体介导的方法将重组真核表达质粒pcDNA3-3HBV转染人胎盘滋养层细胞,经G418筛选,通过ELISA、免疫组化、PCR等方法对转染细胞和培养上清分别进行检测。结果HPT-8细胞稳定转染质粒pcDNA3-3HBV后,第1、2代转染细胞的培养上清ELISA检测显示HBsAg、HBeAg阳性,免疫组化检测显示转染细胞胞浆中HBsAg、HBcAg呈阳性信号,PCR检测培养上清中HBV-DNA呈阳性,荧光定量PCR检测其滴度达9×106拷贝/L,并且转染滋养细胞中有HBV-rcDNA和HBV-cccDNA存在。结论重组质粒pcDNA3-3HBV能在人滋养层细胞中表达、转录、复制。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 滋养层细胞 adr亚型 转染
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乙型肝炎病毒(adr亚型)转基因小鼠的建立 被引量:1
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作者 胡卫江 余宏宇 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 1997年第6期386-387,共2页
关键词 乙型肝炎病毒 adr亚型 转基因小鼠
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adr亚型HBsAg冻干实验参考品的制备与检测 被引量:2
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作者 李津 洪云 +6 位作者 张国强 王昌华 许毅 张德有 冯素英 汪和睦 赵铠 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第11期847-850,共4页
目的制备用于检测重组酵母表达的adr亚型HBsAg含量的实验参考品。方法重组酵母表达的adr亚型HBsAg溶液经纯化后,经3家实验室联合标定蛋白含量,准确稀释并加入保护剂,使抗原最终含量为10μg/ml,分装安瓿后,冷冻干燥熔封,制备成adr亚型实... 目的制备用于检测重组酵母表达的adr亚型HBsAg含量的实验参考品。方法重组酵母表达的adr亚型HBsAg溶液经纯化后,经3家实验室联合标定蛋白含量,准确稀释并加入保护剂,使抗原最终含量为10μg/ml,分装安瓿后,冷冻干燥熔封,制备成adr亚型实验参考品。再由不同实验室用不同试剂和不同方法,以联合标定的蛋白含量为定量标准,分别验证冻干参考品中adr亚型HBsAg含量及37℃放置不同时间的稳定性。并以adw亚型HBsAg标准作为定量标准,检测adr亚型参考品中HBsAg含量。结果所制备的adr亚型冻干参考品分装准确均匀;以联合标定蛋白含量为标准,不同实验室分别以珠式EIA法和RIA法所测的adr亚型冻干参考品HBsAg含量与目标含量相近,各支参考品间差异小;adr亚型冻干实验参考品37℃放置2~10周后质量稳定。以adw亚型HBsAg参考品为定量标准,所测定adr亚型冻干参考品HBsAg含量,比实际含量约高出0.6倍。结论冻干adr亚型HBsAg实验参考品可用于重组酵母表达adr亚型HBsAg的定量检测。不同亚型HBsAg检测需用各自亚型的参考品作为定量标准。 展开更多
关键词 adr亚型 HBSAG 参考品 冷冻干燥 重组酵母 稳定性
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1例ayr亚型乙型肝炎标志物的鉴定
6
作者 侯晓霞 顾春瑜 +1 位作者 雷树红 蒋伟 《感染.炎症.修复》 2007年第3期181-181,共1页
关键词 乙型肝炎标志物 adr亚型 抗原决定簇 鉴定 HBSAG 临床标本 人群
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稳定表达HBsAg的P815细胞株的建立及鉴定 被引量:3
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作者 周凤娟 戴建新 +1 位作者 胡振林 孙树汉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期384-386,共3页
目的:筛选并建立稳定表达亚洲人常见的 adr亚型 HBsAg的 P815细胞株,为乙肝DNA疫苗的效果评价提供体外细胞感染模型。方法:用 PCR方法扩增乙肝病毒的S基因片段后装入PCDNA3载体,并通过脂质体转染 P815细胞,G418筛选。结果:构建了... 目的:筛选并建立稳定表达亚洲人常见的 adr亚型 HBsAg的 P815细胞株,为乙肝DNA疫苗的效果评价提供体外细胞感染模型。方法:用 PCR方法扩增乙肝病毒的S基因片段后装入PCDNA3载体,并通过脂质体转染 P815细胞,G418筛选。结果:构建了重组质粒pcDNA3-HBsAg(S),转染细胞及其培养上清中均可检测到HBsAg(S)的存在,PCR扩增也证实HBSAg(S)基因已稳定整合于p815细胞的染色体中。结论:获得了稳定表达HBsAg的P815细胞株,为今后在小鼠体内检测乙肝DNA疫苗激发的CTL反应奠定了基础。 展开更多
关键词 乙肝DNA疫苗 体外细胞感染 PCR方法 乙型肝炎表面抗原 adr亚型 P815细株
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乙型肝炎病毒表面抗原基因的克隆及序列分析
8
作者 李小月 何金生 +2 位作者 沈继龙 汪学龙 姜山 《热带病与寄生虫学》 2004年第2期75-76,94,共3页
目的克隆并鉴定乙型肝炎病毒表面抗原基因,为下一步构建该重组腺病毒载体以及进一步研究腺病毒载体的包装及在乙型肝炎病毒基因治疗中的作用。方法参照人 HBV adr 亚型序列,设计和合成 S 基因特异引物。应用 PCR 技术,从含有 HBsAg 的 H... 目的克隆并鉴定乙型肝炎病毒表面抗原基因,为下一步构建该重组腺病毒载体以及进一步研究腺病毒载体的包装及在乙型肝炎病毒基因治疗中的作用。方法参照人 HBV adr 亚型序列,设计和合成 S 基因特异引物。应用 PCR 技术,从含有 HBsAg 的 HBV DNA 中扩增目的 DNA,通过 TA 连接将其克隆人 pGEM-T easy 载体,经限制性内切酶 BglⅡ/SalⅠ鉴定后,进一步测序鉴定。结果从乙肝表面抗原阳性(HBsAg+)血清中成功提取 HBV DNA,并以此 DNA 为模板,成功扩增出 S 基因,测序结果与 GenBank 中注册的相应序列比对,核苷酸序列的同源性高达92%~99%,预测氨基酸序列同源性亦达82%。结论从 HBsAg 阳性血清中成功克隆出 S 基因序列,为进一步构建重组腺病毒及后续实验奠定了基础。 展开更多
关键词 表面抗原基因 乙型肝炎病毒 克隆 序列分析 乙肝表面抗原阳性 重组腺病毒载体 HBsAg 病毒基因治疗 限制性内切酶 HBVDNA adr亚型 PCR技术 核苷酸序列 序列同源性 S基因序列 特异引物 序列比对 阳性血清 鉴定 步研究 氨基酸
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乙型肝炎病毒全长PreS蛋白基因在酵母中的表达 被引量:4
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作者 孙明颢 叶林伯 +2 位作者 郜金荣 贺石汉 吴正辉 《中国病毒学》 CSCD 2003年第2期99-103,共5页
应用直接提取法从武汉地区乙型肝炎病人患者阳性血清中提取HBV基因组,以此作为模板,用引物PCR方法获得全长preS基因,该片段的DNA大小1 203bp.克隆到pUCm-T载体中,应用M13通用引物进行序列测定,与中国HBV标准株序列比较,证实基因型为Adr... 应用直接提取法从武汉地区乙型肝炎病人患者阳性血清中提取HBV基因组,以此作为模板,用引物PCR方法获得全长preS基因,该片段的DNA大小1 203bp.克隆到pUCm-T载体中,应用M13通用引物进行序列测定,与中国HBV标准株序列比较,证实基因型为Adr亚型。有24个核苷酸不同,preS基因包含3个起始密码ATG分别为preS1,preS2,和S的翻译起点。然后将preS基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,将Sal I线性化的pPIC9K-preS质粒用电击法导入巴斯德—毕赤酵母GS115His-中。通过MD-G418平板筛选和5AOX1和3AOX1引物PCR鉴定获得稳定重组HBV全长preS基因的His+Mut+酵母工程菌株。此酵母菌株在合适的培养条件和甲醇诱导下高效表达产生全长PreS蛋白并可分泌到培养液中,SDS-PAGE显示培养液中含有分子量约为48kDa的带;微孔ELISIA法证实表达并分泌到培养液中的PreS蛋白能够与HBV抗体阳性血清发生特异性反应。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 全长PreS蛋白基因 adr亚型 疫苗 毕赤酵母表达系统
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adr和adw亚型HBsAg单克隆抗体的制备
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作者 马锐 张国强 +6 位作者 李津 张德有 王曦 张小刚 王远征 魏静 赵铠 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2014年第4期544-547,共4页
目的制备adr和adw亚型乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)单克隆抗体,并用其区分两亚型HBsAg。方法利用杂交瘤细胞融合技术制备adr和adw亚型HBsAg单克隆抗体,采用间接ELISA法进行筛选;优化鉴别试验抗原包被剂量,并对H... 目的制备adr和adw亚型乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)单克隆抗体,并用其区分两亚型HBsAg。方法利用杂交瘤细胞融合技术制备adr和adw亚型HBsAg单克隆抗体,采用间接ELISA法进行筛选;优化鉴别试验抗原包被剂量,并对HBsAg亚型鉴别试验进行验证。结果共获得抗两亚型HBsAg的单克隆抗体7株;鉴别试验抗原的最佳包被剂量为10μg;1H6和4D3株单抗检测2份编盲adw亚型HBsAg样品的adwA450/adrA450值均大于2,判定其为adw亚型;1E9株单抗检测2份编盲adr亚型HBsAg样品adrA450/adwA450值均大于2,判定其为adr亚型;3A5株单抗检测4份编盲样品的adrA450/adwA450值和adwA450/adrA450值均小于2,未能区分两亚型HBsAg。结论抗adr亚型单抗1E9株及抗adw亚型单抗1H6株和4D3株可用于adr亚型汉逊酵母乙肝疫苗研制过程中HBsAg亚型的鉴别。 展开更多
关键词 乙型肝炎表面抗原 adr亚型 adw亚型 单克隆抗体
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