细胞因子诱导的杀伤细胞体外逆转K562/ADR细胞株多药耐药性观察

目的:研究细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)体外逆转K562/ADR细胞株多药耐药(MDR)的可行性。方法:在含细胞因子(人重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、人重组白细胞介素-1、人重组白细胞介素-4和人重组肿瘤坏死因子-α)的RPMI1640完全培养液中诱导K562细胞株、K562/ADR耐药细胞株分化成树突状细胞(DC)。正常人外周血单个核细胞(PBMC)在上述细胞因子诱导下培养成CIK,与成熟的DC共培养成CIK+K562/ADR-DC。应用流式细胞术检测CIK及CIK+K562/ADR-DC的细胞表型。MTT法测定CIK和K562/ADR-DC对K562/ADR的细胞毒作用,流式细胞仪检测CIK组和CIK+K562/ADR-DC组细胞中糖蛋白(P-gp)、阿霉素(ADR)的含量,RT-PCR检测mdr-1基因表达。结果:CIK、CIK+K562/ADR-DC细胞经流式细胞仪检测,均具有自己独特的表型。PBMC诱导培养4d后,CIK开始增殖,第7～9天细胞数量明显增多。K562/ADR来源的DC和CIK共培养后,细胞增殖速度明显加快,9d以后与CIK相比2组细胞的增殖速度呈现明显差异。CIK+K562/ADR-DC细胞对K562/ADR的细胞毒作用在效靶比20:1范围内明显高于CIK细胞(P<0.05)。CIK组和CIK+K562/ADR-DC组细胞的P-gp和Mdr-1与对照组相比显著降低(P<0.05),ADR表达明显升高。结论:CIK+K562/ADR-DC对高表达P-gp的K562/ADR耐药细胞株表现出了特异性细胞毒作用,有效提高了细胞内ADR的含量,下调了P-gp蛋白和mdr-1基因的表达,从而使免疫效应细胞体外逆转MDR的效果得以显现。

地西他滨逆转K562/ADR细胞株多药耐药性机理初步探讨

目的探讨地西他滨(Decitabine,DCA)体外逆转耐阿霉素(ADR)的K562细胞株(K562/ADR)多药耐药性(Multi-drug resistance,MDR)的机理。方法设实验组为不同浓度的DCA与不同浓度的ADR联合作用于K562/ADR细胞;同时设对照组1为不同浓度的DCA作用的K562/ADR细胞组,对照组2为不同浓度的ADR作用的K562/ADR细胞组。检测各组对K562/ADR细胞杀伤活性、细胞膜P-糖蛋白(P-glycoproteins,P-gp)含量以及靶细胞凋亡情况等。结果实验组对K562/ADR细胞杀伤活性高于两个对照组(P<0.05);且随DCA浓度增大,杀伤活性增大(P<0.05);随所加入的ADR浓度增大,杀伤活性差异无统计学意义(P>0.05)。实验组和仅经DCA作用对照组1的P-gp含量均下降,P-gp含量随DCA浓度增大,下降明显(P<0.05);而随所加入的ADR浓度增大,下降无统计学意义(P>0.05)。流式细胞仪凋亡实验提示DCA诱导靶细胞的凋亡;DCA与ADR联合应用,部分靶细胞凋亡同时可见部分靶细胞死亡。结论通过DCA与ADR的联合应用,降低了K562/ADR细胞的胞内P-gp表达、增强了ADR对靶细胞的杀伤活性,为解决白血病MDR和联合化疗提供理论依据。

As_2O_3对胃癌细胞SGC7901/ADR阿霉素耐药性逆转作用

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对胃癌细胞SGC7901/ADR阿霉素(ADM)耐药性的逆转作用和对Pgp、GSTπ表达的影响。方法以胃癌多药耐药细胞株SGC7901/ADR为靶细胞,用MTT法检测SGC7901/ADR细胞对ADM的敏感性,用流式细胞仪检测细胞内药物浓度及免疫组织化学法检测细胞Pgp、GSTπ表达。结果0.4～0.8μmol/LAs2O3对耐药细胞SGC7901/ADR无明显毒性(P>0.05)。As2O3可下调Pgp、GSTπ表达,提高SGC7901/ADR细胞内ADM浓度,增加SGC7901/ADR细胞对ADM的敏感性。结论As2O3能够抑制SGC7901/ADR细胞Pgp、GSTπ表达,增加细胞内ADM药物浓度而部分逆转其对ADM的耐药性。

葛根素注射液对K562/Adr细胞化疗药物敏感性及机理研究

目的：通过观察葛根素注射液协同化疗药物对K562／Adr白血病耐药细胞的抑制作用，探讨葛根素增加白血病耐药细胞对化疗药物的敏感性及作用机理。方法：选K562／Adr耐药细胞株作为靶细胞，采用MTT法观察不同浓度的葛根素注射液对K562／Adr耐药细胞增殖的影响，及细胞对化疗药物的敏感性。RT—PCR的方法检测葛根素对耐药相关基因（MDR1／P-gp、MRP）表达的影响。结果：①MTT法结果显示低到中等浓度的葛根素（25～100μg／mL）对15562／Adr耐药株的生长与对照组相比无显著差异（P〉0.05），但当葛根素浓度提高至250μg／mL以上时，对细胞则出现增殖抑制作用，且随浓度增加抑制作用增强。②用不同浓度的葛根素和化疗药物（Adr 1μg/mL）合用时结果显示，低浓度（25～50μg／mL）的实验组与对照组无显著差异（P〉0．05）；随着葛根素浓度增加（100～500μg／mL），Adr对细胞的抑制作用明显，即K562／Adr对Adr的敏感性与葛根素呈剂量依赖吴系。③K562／Adr细胞经葛根素（100μg/mL）处理1周后，MDR1基因表达受到抑制，是未经处理细胞的2．5倍，MRP基因表达在处理前后无明显变化；当处理1个月后，细胞中MDR1、MRP两基因表达均明显低于未经处理过的细胞，分别是未经处理细胞的2．6倍和3．5倍。结论：葛根素注射液在一定浓度下，能直接抑制白血病耐药细胞增殖，并能提高耐药细胞对化疗药物的敏感性；其机制可能通过对耐药相关基因（MDR1、MRP）表达抑制来起作用。

裴氏升血颗粒含药血清对K562/ADR细胞p170表达的影响

目的:观察裴氏升血颗粒(PG)含药血清对人白血病细胞株K562/ADR细胞p170蛋白表达水平的影响。方法:采用MTT法测定不同浓度含药血清对K562细胞系的细胞毒作用,用流式细胞仪检测非细胞毒性浓度含药血清处理后K562/ADR细胞膜表面p170表达变化。结果:不同浓度含药血清对K562/ADR细胞无明显细胞毒作用,非细胞毒性含药血清能明显下调K562/ADR细胞p170蛋白的表达。结论:裴氏升血颗粒能够提高化疗疗效,其机制可能与下调p170蛋白表达有关。

升血颗粒含药血清对人白血病K562/ADR细胞多药耐药的逆转作用

目的:观察升血颗粒(PG)含药血清对人白血病K562/ADR细胞多药耐药性的逆转作用,并探讨其逆转机制。方法:采用MTT法测定细胞的药敏性及耐药逆转性,应用流式细胞仪检测非细胞毒性的含药血清处理后K562/ADR细胞内阿霉素(ADM)的浓度。结果:低、中、高剂量含药血清对K562/ADR细胞无明显细胞毒性。低、中、高剂量含药血清作用后,ADM对K562/ADR细胞的半数抑制浓度(I C50)显著下降,逆转倍数分别为1.34、1.71、1.82倍;ADM外渗试验显示,低、中、高剂量含药血清处理后K562/ADR细胞内ADM浓度显著增加,增加倍数分别为1.41、1.67、2.04倍。结论:升血颗粒含药血清对人白血病K562/ADR细胞耐药性有一定的逆转作用。

维药异常黑胆质成熟剂总黄酮对K562/ADR细胞的耐药逆转作用及mRNA表达的影响

目的异常黑胆质成熟剂总黄酮ASMq对白血病K562/ADR多药耐药逆转作用机制研究及其对耐药株m RNA表达的影响。方法不同浓度的ASMq联合不同浓度的ADR作用于K562/ADR细胞株,用MTT法检测ASMq对K562/ADR的细胞毒活性及对耐药细胞株的抑制率,用RT-PCR方法分析对K562/ADR细胞ABCB-1及ABCC-1和BCL-2表达的影响。结果异常黑胆质成熟剂总黄酮ASMq对K562/ADR细胞株增值表现为抑制作用,对K562/ADR细胞耐药基因ABCC-1、ABCB-1及BCL-2同样表达抑制作用。结论异常黑胆质成熟剂总黄酮通过抑制ABCB-1、ABCC-1、BC-L2基因表达,发挥对K562/ADR细胞株耐药逆转的作用。

CIK细胞体外逆转多药耐药性的研究

目的:研究CIK细胞体外逆转多药耐药(multidrug resistance,MDR)可行性。方法:用人外周血分离出的单个核细胞,在不同细胞因子诱导下培养成细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)及树突状细胞(DC),然后将其与成熟DC进行共培养,作为效应细胞,以K562敏感株与耐药细胞株为靶细胞进行体外逆转研究。流式细胞术检测靶细胞的P-gp表达及细胞内的ADR相对含量,MTT法测定其细胞毒作用,RT-PCR检测mdr-1基因耐药性逆转表达状况。结果:K562/ADR耐药细胞株ADR含量经效应细胞细胞作用后,细胞内的ADR含量分别提高了13.80%、39.50%,(P<0.01);,P-gp分别降低12.00%、42.69%,(P<0.01),mdr-1基因表达呈下调趋势,效应细胞对靶细胞的细胞毒作用分别达45.8%、78.9%,(P<0.01)。结论:CIK+K562/ADR-DC对P-gp高表达K562/ADR耐药细胞株具有特异性的细胞毒作用,有效提高了细胞内的ADR含量,下调了P-gp、mdr-1表达,使免疫效应细胞体外逆转多药耐药的效果得以显现。

细胞因子诱导杀伤细胞联合阿霉素逆转多药耐药的研究

目的:探讨细胞因子诱导杀伤细胞联合阿霉素逆转多药耐药的可能性及其机制。方法:以人外周血分离单个核细胞后进行体外诱导、扩增作为效应细胞,联合不同浓度的阿霉素与其耐药靶细胞K562/ADR进行共培养,经四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法计算半数抑制浓度(IC50)、耐药倍数和逆转倍数;流式细胞仪检测细胞内阿霉素相对含量和P糖蛋白表达水平;RT-PCR检测mdr-1基因mRNA表达。结果:未经细胞因子诱导杀伤细胞联合阿霉素处理时,阿霉素对K562和K562/ADR的IC50分别为(0.68±0.04)μmol/L和(66.23±4.38)μmol/L;K562/ADR对阿霉素的耐药倍数为97.43倍;经细胞因子诱导杀伤细胞联合阿霉素处理48 h(效靶比1∶5、阿霉素1.1μmol/L)后,IC50为(32.15±0.79)μmol/L,联合逆转倍数为2.06倍,细胞内的阿霉素相对含量增加1.83倍;P糖蛋白表达下调36.7%,mdr-1基因mRNA相对表达值也呈下调趋势。结论:细胞因子诱导杀伤细胞联合阿霉素可提高耐药细胞K562/ADR胞内的阿霉素浓度,下调mdr-1基因及P糖蛋白的表达,提高阿霉素对耐药细胞K562/ADR的敏感性,使细胞因子诱导杀伤联合阿霉素对多药耐药的逆转效果得以显现。

人红白血病细胞来源的DC对细胞因子诱导的杀伤细胞逆转多药耐药的影响

目的:探讨人红白血病细胞(K562/ADR)来源的DC与CIK细胞体外共培养后对多药耐药逆转影响。方法:K562敏感株和K562/ADR耐药细胞株,在含细胞因子GM-CSF(1000u/mL)、IL-4(500u/mL)和TNF-α(100ng/mL)的RPMI1640完全培养液中诱导分化成DC。同时将PBMC在细胞因子诱导下培养成细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK),与成熟DC进行共培养。采用MTT法测定免疫效应细胞对靶细胞杀伤率、耐药性逆转。流式细胞术检测靶细胞的Pgp表达及细胞内的ADR浓度,RT-PCR检测MDR1基因表达状况。结果:K562/ADR来源的DC与CIK细胞共培养后,细胞增殖速度明显加快,17d以后两者的增殖倍数呈现明显差异。效应细胞对靶细胞的生长抑制率高达78.9%,与单纯CIK细胞相比较显示出高特异免疫杀伤作用。结论:CIK+K562/ADR-DC对P-gp高表达K562/ADR耐药细胞株具有特异性的细胞毒作用,有效提高了细胞内的ADR含量,下调了P-gp、mdr-1表达,从而使免疫效应细胞体外逆转多药耐药的效果得以显现。

蛋氨酸脑啡肽对MCF-7/ADR生长抑制作用机制的初步研究

目的研究阿片生长因子蛋氨酸脑啡肽(Met-ENK)对MCF-7/ADR肿瘤细胞的抑制作用的效果及机制的初步研究。方法采用CCK-8法检测不同剂量的Met-ENK(10-3、10-4、10-5、10-6、10-7 mol/L)对乳腺癌细胞MCF-7/ADR作用48 h后的肿瘤抑制率;采用细胞计数法绘制Met-ENK孵育0、24、36、48及72 h后的MCF-7/ADR的生长曲线;采用流式细胞术及PI染色法记录用药孵育48 h后,MCF-7/ADR细胞周期变化情况。结果结果显示与空白对照组相比,Met-ENK对MCF-7/ADR细胞的生长有明显的抑制作用,呈时间依赖性,但不呈剂量依赖性,10-6mol/L浓度时,Met-ENK抑制肿瘤细胞生长效应最强;在Met-ENK作用后主要将细胞抑制于生长周期的G0/G1期。结论 Met-ENK对MCF-7/ADR肿瘤细胞有明显的抑制作用,且主要是通过影响细胞周期阻滞来发挥抑制肿瘤细胞生长的作用。但其机制仍需进一步研究及证实。

五味子甲素对K562/ADR、HL60/ADR、MCF-7/ADR多药耐药逆转机制的研究

目的探讨五味子甲素(schizandrin A or deoxyschizan-drin,schA)对白血病细胞K562/ADR、HL60/ADR、乳腺癌细胞MCF-7/ADR多药耐药的逆转作用,并初步探讨其逆转机制。方法 MTT法检测schA对耐药细胞的逆转作用;流式细胞仪检测schA对细胞内柔红霉素、罗丹明-123含量和细胞表面P-gp表达水平的变化;用Real-time PCR方法检测schA对细胞内mdr1 mRNA和mrp1 mRNA表达;生化检测法检测schA对细胞内GSH含量的变化。结果耐药逆转实验显示:不同浓度的schA对作用机制不同的化疗药物耐药产生不同的逆转效果;蓄积实验表明schA可增加柔红霉素、罗丹明123在耐药细胞内的蓄积,并且有良好的剂量依赖关系;schA处理K562/ADR、HL60/ADR细胞24 h后,能降低P-gp蛋白和mdr1、mrp1基因的表达;schA处理K562/ADR、HL60/ADR细胞4 h后,可降低细胞内谷胱甘肽含量。结论 schA对耐药机制不同的细胞株K562/ADR、HL60/ADR均有耐药逆转作用,推测可能是与抑制细胞表面的P-gp蛋白功能和表达,降低mdr1、mrp1耐药基因的表达和降低细胞内谷胱甘肽含量有关,schA通过影响上述机制,进而增加细胞内的药物浓度,达到有效杀灭肿瘤细胞的作用。

柔红霉素在耐药细胞株K562/ADR内的异常分布

目的 了解化疗药物在糖蛋白 (Pgp)耐药细胞株K5 6 2 /ADR亚细胞结构的异常分布及其与耐药的关系。方法 采用共聚焦激光扫描显微镜、荧光法和RT PCR等方法 ,研究柔红霉素(DNR)在K5 6 2 /ADR细胞亚细胞结构的分布及其与耐药的关系 ,以及维拉帕米尔 (verapamil)、布雷菲尔得菌素 (brefeldinA)、氯喹对细胞内DNR异常分布的影响。将 3种特异染色线粒体、高尔基体、溶酶体的荧光物质Rh12 3、NBD ceramide、中性红作为探针 ,鉴定分隔储留DNR的细胞器。结果 在K5 6 2 /ADR细胞中 ,DNR荧光主要集中在核周和周边胞浆 ,核内及胞浆其他部位荧光很少。这种分布方式与Rh12 3荧光在该细胞的分布极其相似 ,与DNR在敏感细胞K5 6 2 /S细胞核、浆均匀分布不同。verapamil可逆转DNR在K5 6 2 /ADR的异常分布 ,而氯喹、brefeldinA无此作用。结论 DNR在耐药细胞的异常分布参与了肿瘤细胞耐药的形成 ,Pgp在此过程中发挥了重要作用。

维吾尔药异常黑胆质成熟剂总黄酮对K562/ADR细胞多药耐药性及耐药相关蛋白表达的影响

目的研究异常黑胆质成熟剂总黄酮(ASMq)对K562/ADR(耐阿霉素的慢性粒细胞株)多药耐药(MDR)及耐药相关蛋白表达的影响。方法不同浓度的总黄酮联合不同浓度的ADR作用于体外培养的K562/ADR细胞株,用CCK-8法检测K562/ADR的存活及不同浓度ASMq的耐药逆转倍数,用Western blot方法分析总黄酮对K562/ADR细胞耐药相关蛋白ABCC-1、ABCB-1、BCL-2表达的影响。不同浓度ASMq对K562/ADR的毒活性及三种蛋白质表达的差异采用t检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果 (1)当ASMq达到800μg/ml以上时,随着总黄酮浓度的升高,K562/ADR细胞的OD下降,与ASMq为0μg/ml相比,差异具有统计学意义(P<0.001),且随着ASMq浓度的升高,K562/ADR细胞株的增殖抑制率升高,与低浓度组(200μg/ml)相比,差异亦具有统计学意义(P<0.001)。(2)随着ASMq浓度的升高,其耐药逆转倍数增大。(3)随着ASMq浓度的升高,ABCC-1、ABCB-1表达量下降,差异有统计学意义(P<0.05),而BCL-2表达无明显下降趋势。结论 (1)ASMq可以抑制K562/ADR细胞的增殖。(2)ASMq可实现耐药逆转,且随着ASMq浓度的升高,其逆转倍数增大。(3)ASMq通过下调K562/ADR细胞耐药蛋白ABCC-1、ABCB-1表达的机制,逆转K562/ADR细胞的多药耐药。

姜黄素抑制胃癌多药耐药相关因子特性研究

目的探讨姜黄素抑制人胃癌SGC7901/ADR细胞增殖情况以及与多药耐药相关因子P170及GST-π表达规律的相关性。方法采用CCK-8检测不同浓度姜黄素对SGC7901/ADR细胞12 h、24 h、36 h的抑制情况;通过免疫细胞化学法分析各浓度梯度姜黄素作用36 h时P170及GST-π的表达差异;采用统计学方法进行分析。结果姜黄素作用于人胃癌SGC7901/ADR耐药细胞剂量越高、时间越长吸光度越低(P<0.05),各浓度梯度姜黄素作用36 h时GST-π阳性表达有降低趋势,但无统计学意义(P>0.05),而与P170阳性表达则无直接关联性。结论姜黄素可抑制人胃癌SGC7901/ADR耐药细胞的增殖,可能抑制GST-π的表达。