密码子优化的重组黄曲霉毒素解毒酶(rADTZ)在毕氏酵母中组成型分泌表达的研究

黄曲霉毒素解毒酶(ADTZ)来源于真菌Armillariella tabescens,它能够有效地分解黄曲霉毒素。为了使重组蛋白rADTZ能在毕氏酵母中高效分泌表达,根据毕氏酵母密码子的偏好性对rADTZ的5末端的编码区域进行了优化,利用two-step DNA synthsis技术合成出ADTZ优化的基因序列OPT-ADTZ,并与组成型表达载体pGAPZaA连接,构建重组质粒pNOA,线性化pNOA后转化至毕氏酵母GS115中,实现了密码子优化的rADTZ组成型分泌表达。

黄曲霉毒素解毒酶在大肠杆菌中的可溶性表达、纯化及其圆二色谱分析

目的:应用原核表达系统对黄曲霉毒素解毒酶(aflatoxin-detoxifizyme,ADTZ)进行高效可溶表达和纯化,并对其进行生物学活性与二级结构分析。方法与结果:亚克隆ADTZ的成熟肽,并构建与pMAL-c2x的重组质粒,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导实现了MBP_ADTZ融合蛋白的高效可溶表达,其表达量约占总蛋白的50%。经Amylose亲和层析、Factor Xa酶切和疏水层析后得到高纯度的rADTZ蛋白。生物学活性分析表明rADTZ蛋白具有降解AFB1的酶活性,酶比活为136U/mg。圆二色光谱对rADTZ蛋白二级结构的分析结果为:α-螺旋为43.3%、β-折叠为31.1%、β-转角为10.5%和无规则卷曲为15.1%。结论:用大肠杆菌成功表达并得到高纯度有活性的rADTZ蛋白,为进一步对rADTZ结构与功能研究奠定了基础。