肿瘤微转移的相关研究及AE1/AE3在其中的价值

在人口老龄化的全球大背景下,恶性肿瘤的发病率和致死率也逐年上升,在恶性肿瘤病灶局限、未发生转移时行医疗干预往往可以取得较好的疗效,因此早期发现恶性肿瘤或发现后进行精准有效的评估及干预显得尤为重要。免疫组化法(Immunohistochemistry, IHC)利用特异性的抗原抗体染色在鉴别肿瘤微转移中发挥着重要作用,有助于识别出常规病理切片HE染色未能识别的转移病灶;AE1/AE3主要表达于上皮细胞,常被用作诊断上皮性肿瘤转移的分子标记物,HE染色可见肿瘤转移的淋巴结经AE1/AE3标记均为阳性,HE染色阴性的淋巴结中也可见AE1/AE3的部分表达,且在常规病理检测为阴性的淋巴结中,AE1/AE3阳性患者往往比阴性患者具有更高的复发率和更低的5年生存率。因此常规病理联合检测AE1/AE3表达有助于评估患者肿瘤分期和判断预后,进而能对高危患者进行早期干预,提高患者生存期。本综述主要从恶性肿瘤淋巴结转移、常用的肿瘤转移检测方法以及分子标记物AE1/AE3在诊断淋巴结微转移中的作用等方面入手,为诊断恶性肿瘤淋巴结微转移可采用的方法和精准识别提供理论依据。

AE_1/AE_3在食管癌手术标本的淋巴结及肿瘤周围组织的检测及其意义

[目的]探讨AE1/AE3免疫组化标记检测食管癌根治标本中淋巴结内微小转移癌及食管周围软组织癌浸润的意义。[方法]对30例食管癌根治切除后阴性的淋巴结及食管周软组织的石蜡包埋组织用SP法进行AE1/AE3标记。[结果]30例中337个淋巴结中292个HE切片诊断为阴性淋巴结者行AE1/AE3标记,发现23个阳性淋巴结,阳性表达率为7.9%。根据HE染色阴性再经AE1/AE3标记发现食管周软组织内微小癌灶者,其中黏膜下癌为0/3,癌浸及肌层者为7/11(63.6%)、癌浸及纤维膜者为13/16(81.3%)。[结论]AE1/AE3标记可为食管癌淋巴结的清扫提供参考,为判断癌细胞的浸润深度及范围、PTNM分期提供依据。

益气复生方对胃癌组织中STAT3及HIF-1表达的影响

目的观察益气复生方对胃癌组织中STAT3及HIF-1表达的影响。方法取2015年1月~2016年7月医院进行实验的BALB/c小鼠60只,建立BALB/c小鼠胃癌抑制瘤模型,根据处理方法不同分为对照1组、对照2组和观察组,每组20只。对照1组不进行任何处理,对照2组给予5-氟尿嘧啶注射液,观察组给予益气复生方。14 d后处死小鼠,采用免疫组织化学Envision法检测3组小鼠胃癌组织中STAT3的表达水平,免疫组织化学SP法检测3组小鼠胃癌组织中HIF-1的表达水平;对肿瘤组织进行HE染色,分析益气复生方对胃癌组织中STAT3及HIF-1表达水平的影响。结果观察组小鼠胃癌组织中STAT3及HIF-1的表达水平显著低于对照2组和对照1组(P<0.05);对照2组小鼠胃癌组织中STAT3及HIF-1的表达水平显著低于对照1组(P<0.05)。观察组小鼠STAT3及HIF-1的表达阳性率显著高于对照2组和对照1组(P<0.05);对照2组小鼠STAT3及HIF-1的表达阳性率显著高于对照1组(P<0.05)。免疫组化结果显示,3组小鼠均存在STAT3的阳性表达,表达量从低到高依次为观察组、对照2组、对照1组;观察组与对照2组HIF-1表达的差异无统计学意义(P>0.05),对照1组HIF-1表达相对较高。观察组肠黏膜绒毛轻度破坏,排列相对整齐,治疗后有所恢复;对照1组和对照2组肠黏膜绒毛完整性被破坏,部分绒毛坏死脱落、稀疏,排列紊乱。结论益气复生方可降低胃癌组织中STAT3的表达水平,抑制HIF-1的表达。

Beclin1和LC3在食管癌组织中的表达水平和临床意义

目的探讨Beclin1和LC3在食管鳞癌和腺癌组织中的表达水平和临床意义。方法通过免疫组织化学SP法检测89例食管癌组织标本中Beclin1和LC3的表达情况。结果 Beclin1和LC3在食管癌中的阳性表达率(47.2%,40.4%)均显著低于正常食管癌组织标本组(88.9%,80.6%)(P<0.05)。Beclin1和LC3在食管癌中的表达与TNM分期、组织浸润程度、淋巴结转移和组织分化程度有关(P<0.05),与年龄、性别和组织类型(P>0.05)等无明显差异。Beclin1与LC3在食管鳞癌和腺癌中的表达呈正相关(r=7.935,P=0.005)。结论在食管鳞癌和腺癌中,肿瘤分化程度越低、浸润程度越高、有淋巴结转移、临床分期越高,Beclin1和LC3的表达越低,可能与肿瘤的发生发展与侵袭转移相关。

抗体22C3与SP263检测非小细胞肺癌标本PD-L1水平的一致性比较

目的:比较抗体22C3与SP263检测非小细胞肺癌标本程序性死亡分子1配体(PD-L1)水平的一致性。方法:选取2020年1月至2021年8月该院病理科检测的40例肺非小细胞肺癌标本进行前瞻性研究,均进行免疫组织化学检测,比较抗体22C3与SP263检测(不同病理分型、不同T分期)非小细胞肺癌标本PD-L1水平的结果判定难度等级、阳性检出率,采用Kappa检验分析抗体22C3与SP263检测非小细胞肺癌标本PD-L1水平的一致性。结果:抗体22C3与SP263检测非小细胞肺癌标本PD-L1水平的结果判定难度等级比较,差异无统计学意义(P>0.05);抗体22C3与SP263检测非小细胞肺癌标本PD-L1阳性检出率比较,差异无统计学意义(P>0.05);抗体22C3与SP263检测不同病理分型非小细胞肺癌标本PD-L1阳性检出率比较,差异无统计学意义(P>0.05);抗体22C3与SP263检测不同T分期非小细胞肺癌标本PD-L1阳性检出率比较,差异无统计学意义(P>0.05);Kappa检验结果显示,抗体22C3与SP263检测非小细胞肺癌标本PD-L1水平的一致性高(Kappa值=0.823,P<0.05)。结论:抗体22C3与SP263检测非小细胞肺癌标本PD-L1水平的一致性高。

染料法术中标记34例大肠癌前哨淋巴结的意义

目的探索前哨淋巴结活检(SLNB)技术在早期大肠癌中的应用及前哨淋巴结(SLN)微转移检测的临床意义。方法应用染料法对34例大肠癌患者,在根治术中于肿瘤周围或基底部浆膜下注射亚甲蓝溶液2mL左右,识别和定位蓝染的淋巴结(即前哨淋巴结),术后行常规HE病理和鼠抗人细胞角蛋白单克隆抗体AE1/AE3免疫组化染色法(ELIVISION二步法)检查。结果34例大肠癌患者中33例检出SLN,检出率为97.1%。由SLN状态预测其周淋巴结转移情况的准确率为93.9%(31/33),敏感性为88.9%(16/18),特异性为100.0%(16/16),假阴性率为11.1%(2/18)。免疫组化与常规HE对SLN转移的检出率相比较,差异有统计学意义(P=0.034),免疫组化法共检出12枚18例SLN存在微转移现象。结论SLN能够较准确反映早期大肠癌的淋巴转移状况,免疫组化法较常规HE病理检查更为敏感,AE1/AE3免疫组化发能提高SLN微转移的检测,对确定临床分期诊疗及判断预后有积极临床意义。

自噬相关蛋白LC-3和Beclin-1在大鼠硅沉着病发生中的表达及意义

目的观察自噬相关蛋白LC-3和Beclin-1在大鼠硅沉着病模型中的表达及意义,并探讨其机制;从细胞自噬角度研究硅沉着病形成的分子机制。方法将90只健康SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组和自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)组,每组30只。采用非暴露式气管插管一次性灌注二氧化硅粉尘混悬液法建立大鼠硅沉着病模型,并给予3-MA干预,各组分别于造模后第1、3、7、14及28天分批处死6只大鼠。留取肺组织,HE和Masson染色观察肺组织形态变化;免疫组织化学染色检测LC-3、Beclin-1的表达及分布;免疫印迹法检测LC-3、Beclin-1的蛋白表达量。结果与对照组相比,模型组有显著的肺泡炎改变、明显的矽结节形成及大量胶原沉积。LC-3、Beclin-1在各时间点的表达均上调(P<0.05),并随时间呈现动态变化趋势,SiO2注入后1 d表达有升高趋势,14d达高峰(P<0.05),28 d回落,但仍高于基础表达。与模型组相比,3-MA组肺泡炎减轻,矽结节减小,胶原沉积减少,LC-3、Beclin-1在各时间点的表达均下调(P<0.05),各时间点的变化趋势无显著性改变。结论细胞自噬参与大鼠硅沉着病的病理进程,并在硅沉着病的发生与发展过程中起重要作用。

CTRP3、TGF-β1在糖尿病肾病中的表达及相关性研究

采用免疫组织化学法检测糖尿病肾病组(DN)及正常对照组(NC)大鼠肾组织CTRP3与转化生长因子β1(TGF-β1)的表达情况。采用病例对照,研究正常健康者(NC组)、单纯2型糖尿病(T2DM组)、早期糖尿病肾病(DN1组)和临床糖尿病肾病(DN2组)患者胰岛素代谢参数、血脂和肾功能等临床指标,ELISA法检测血清CTRP3和TGF-β1水平。结果表明:DN组大鼠肾组织TGF-β1表达增高(P<0.05),CTRP3低表达(P<0.05);ELISA检测显示DN2组血清CTRP3水平显著下降(P<0.01),而TGF-β1水平显著升高(P<0.01);DN2组HOMA-IR、HbA1c、TG、ACR、BUN、SCr、Cysc水平升高(P<0.05),而GFR水平降低(P<0.01);相关分析显示血清CTRP3与TGF-β1、HOMA-IR、FBG、HbA1c、SBP、TG、ACR、SCr、BUN、Cysc呈负相关(P<0.05),与GFR呈正相关(P<0.01);回归分析显示HOMA-IR、TGF-β1、ACR、GFR是CTRP3的影响因素。这一研究提示CTRP3、TGF-β1参与DN的发展过程,与胰岛素代谢参数、血脂和肾功能相关标志物有一定的相关性。

人卵巢组织中各种组织成分的免疫组化研究

目的研究人卵巢组织中不同组织成分的分布。方法对人卵巢组织中各种不同组织成分单抗进行免疫组化研究。结果角蛋白抗原AE1/AE3阳性细胞存在于皮质内特别是卵泡周围,平滑肌肌动蛋白(α-actin)和肌球蛋白(Desmin)抗原存在于血管及黄体周围,而代表神经组织的S-100阳性细胞则主要分布髓质及卵泡周围。结论这一结果说明卵泡是卵巢组织中最重要的功能单位。

PI3K/AKT/TORC1信号通路对丝素蛋白合成转录因子SGF1表达的影响

SGF1(silk gland factor 1)是一种转录调控因子,属于Fox家族的Fox A亚家族成员,能够启动丝素基因的表达,合成丝素蛋白。已知果蝇和其他高等动物中的PI3K/AKT/TORC1信号通路可以调控Fox转录蛋白的表达。为了探究家蚕幼虫后部丝腺(PSG)中PI3K/AKT/TORC1信号通路对SGF1表达水平的影响,对4龄第4天和5龄第7天家蚕幼虫分别注射信号通路抑制剂Wort、Rapa和LY294,24 h后解剖取出后部丝腺,一组用于免疫组织化学染色实验,另一组用于提取蛋白质进行Western blot检测。免疫组织化学染色实验表明,与对照组相比,注射3种信号通路抑制剂的家蚕幼虫后部丝腺组织的绿色荧光亮度明显减弱;Western blot检测表明,与对照组相比,实验组家蚕幼虫后部丝腺的蛋白质浓度有所下降。综合以上结果初步得出PI3K/AKT/TORC1信号通路抑制剂处理均可降低家蚕幼虫后部丝腺中SGF1表达的结论,即提示可以通过上游信号通路PI3K/AKT/TORC1影响SGF1的表达水平,进而调控丝素蛋白的合成。

Bcl-2腺病毒/E1B 19kD相互作用蛋白3对弥漫性轴索损伤后少突胶质细胞凋亡的调控作用

目的探讨Bcl-2腺病毒/E1B 19kD相互作用蛋白3(BNIP3)对大鼠弥漫性轴索损伤(DAI)后少突胶质细胞凋亡的调控作用。方法 77只SD雄性成年大鼠随机分为假手术组(11只)、DAI组(33只)及干预组(33只)。参照Marmarou方法制做DAI模型,干预组大鼠在打击后立即给予脑室注射BNIP3抑制剂necrostatin-1 (Nec-1,30 g/L,2μl),检测Nec-1干预前后DAI大鼠BNIP3蛋白表达,少突胶质细胞凋亡以及髓鞘的组织病理学变化。结果与假手术组相比,大鼠DAI损伤后脑干组织BNIP3表达上调,且与细胞凋亡成正相关;Nec-1干预有效降低DAI大鼠少突胶质细胞BNIP3蛋白表达,显著减少DAI大鼠少突胶质细胞凋亡的数目,提高DAI大鼠脑干髓鞘劳克坚牢蓝(LFB)染色平均吸光度和髓鞘碱性蛋白(MBP)表达,改善DAI大鼠脑干髓鞘的超微结构。结论 BNIP3参与DAI诱导的少突胶质细胞凋亡,抑制BNIP3可保护DAI大鼠少突胶质细胞和髓鞘。

异位错构瘤性胸腺瘤的临床病理学观察和免疫组织化学研究

目的探讨异位错构瘤性胸腺瘤的临床病理学特征、免疫学表型和组织发生。方法对2例异位错构瘤性胸腺瘤进行临床病理学分析,采用免疫组织化学LSAB法行AE1/AE3、细胞角蛋白(CK)5、CK7、CK8、CK20、上皮膜抗原(EMA)、波形蛋白、CD5、CD10、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)、calponin、结蛋白、CD34、S-100蛋白、CD57、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、甲状腺转录因子(TTF)-1和CD99标记。结果两例均发生于男性,年龄分别为20岁和40岁,因发现胸骨柄上缘肿块6个月和左锁骨上肿块2个多月就诊。肿块呈球形和卵圆形,边界清楚,最大直径分别为5cm和3cm,切面呈灰白色,质地柔软。组织学上,肿瘤由梭形细胞、上皮细胞和成熟的脂肪细胞3种成分混合组成。梭形细胞成分在2例中分别占到85%和70%,形态上类似纤维母细胞,多呈束状、编织状或席纹状排列。上皮细胞成分在两例中均占10%左右,形态上以非角化性鳞状上皮为主,可呈实性的小岛屿状、类似造釉细胞瘤的条索状和扩张的囊肿样排列,部分区域显示腺样分化,可见腺管形成。上皮细胞和梭形细胞在形态上有移行。成熟的脂肪组织呈不规则性分布,在两例肿瘤中所占的比例分别为<5%和20%。免疫组织化学标记显示,上皮细胞表达AE1/AE3、CK5、CK7、CK8和EMA,梭形细胞除CK外还表达波形蛋白、CD10和CD34,并部分表达α-SMA和calponin。两种细胞成分均不表达CK20、CD5、TTF-1、结蛋白、S-100蛋白、CD57、GFAP和CD99。结论异位错构瘤性胸腺瘤是一种好发于中青年男性锁骨上和胸锁关节附近软组织内的良性肿瘤,是一种由上皮和肌上皮组成的混合性肿瘤,可能起自于His颈窦,采用鳃原基混合瘤来命名或许更为合适。

半乳糖凝集素3低表达对人胃癌MGC-803细胞增殖的影响

目的探讨半乳糖凝集素3(galectin-3)表达抑制对人胃癌细胞系MGC-803细胞增殖产生的影响。方法将胃癌细胞系MGC-803细胞分为3组,siRNA干扰组(转染靶向galectin-3的特异siRNA),空白对照组(只加转染试剂)和阴性对照组(转染非特异性的siRNA)。用Western blotting法检测转染后细胞中galectin-3蛋白的抑制效率,应用MTT法、集落形成实验检测galectin-3基因低表达对MGC-803细胞增殖的影响;用Western blotting和免疫组织化学法检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况。结果 siRNA干扰组细胞中galectin-3蛋白的表达与阴性对照组和空白对照组相比明显降低(P<0.05);细胞集落形成实验和MTT显示,siRNA干扰组细胞的增殖能力与阴性对照和空白对照组细胞比较显著降低(P<0.05);cyclin D1和PCNA蛋白表达均为siRNA干扰组细胞表达显著低于两对照组(P<0.05)。结论 Galectin-3低表达可抑制胃癌MGC-803细胞的增殖能力,这可能与抑制cyclin D1和PCNA的表达有关。

三七皂苷Rg1上调SD大鼠大脑皮质巯醇抗氧化物(酶)发挥抗衰老作用

目的探讨三七皂苷Rg1抗衰老的分子机制。方法90只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和治疗组。采用侧脑室注射β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)联合腹腔注射D-半乳糖(D-gal)构建SD大鼠衰老模型,并同时给予三七皂苷Rg1预防性治疗,采用Morris水迷宫实验(MWM)进行行为学检测,用化学比色法检测大脑皮质谷胱甘肽还原酶(GR)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量。用免疫组织化学法和免疫印迹法检测大脑皮质中Caspase-3前体蛋白和Bcl-2的含量。结果衰老模型组与假手术组比较:逃避潜伏期明显延长(P<0.05),在第Ⅲ象限逗留的时间明显减少(P<0.05),跨越平台次数明显减少(P<0.05),皮质GR和GSH-Px的含量降低(P<0.05),Caspase-3前体蛋白阳性神经元数明显减少(P<0.05),Caspase-3前体蛋白活化切割增加(P<0.05);而三七皂苷Rg1治疗后:大鼠逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),在第Ⅲ象限逗留的时间明显增加(P<0.05),跨越平台次数明显增加(P<0.05),皮质GR和GSH-Px的含量升高(P<0.05),Caspase-3前体蛋白阳性神经元数明显增加(P<0.05),Caspase-3前体蛋白活化切割减少(P<0.05)。而Bcl-2阳性神经元数及表达在3组之间没有显著差异(P>0.05)。结论三七皂苷Rg1能通过上调衰老模型大鼠皮质内源性巯基抗氧化物(酶)GR和GSH-Px的含量,抑制凋亡相关蛋白Caspase-3前体蛋白的活化切割而改善学习记忆能力,对抗大鼠神经系统衰老。

HIF-1α和Rac1在肝细胞癌中的表达及其意义

目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和Ras相关的C3肉毒底物1(Racl)在肝细胞癌中的表达及其临床意义。方法选取正常肝组织20例、肝硬化组织42例及肝细胞癌组织58例,应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法检测组织中HIF-1α和Racl蛋白的表达,分析其表达与临床病理特征的关系,并结合临床资料进行分析。结果 HIF-1α主要为胞核或胞浆着色,Rac1为胞浆着色。HIF-1α蛋白在正常肝组织中的阳性表达率为0.0%(0/20),肝硬化组织为45.2%(19/42),原发性肝癌组织为81.0%(47/58),其中高分化阳性表达率为53.3%,中分化为83.3%,低分化为100.0%。HIF-1α蛋白在原发性肝癌发生、发展中的表达依次升高(P<0.05)。且原发性肝癌组织中HIF-1α蛋白表达与淋巴结转移有关。Rac1蛋白表达在正常肝组织中的阳性表达率为0.0%(0/20),癌旁肝硬化组织为40.5%(17/42),原发性肝癌组织为77.6%(45/58),其中高分化阳性表达率为60%,中分化为73%,低分化为94.7%。Rac1蛋白在肝癌发生、发展中的表达依次升高(P<0.05)。肝癌组织Rac1蛋白表达与淋巴结转移有关。HIF-1α蛋白的阳性表达率与Rac1蛋白的阳性表达率呈正相关(P<0.05)。结论 HIF-1α、Rac1与原发性肝癌癌变及进展有关,联合检测两者蛋白的表达有助于判断肝癌的病变程度及预后。

3例儿童APC基因突变的多发性肝肿瘤(英)

肝母细胞瘤（HB）作为儿童最常见的肝肿瘤,它与大肠腺瘤性息肉病（APC）基因的胚系突变相关,该抑癌基因突变导致了家族性腺瘤性息肉病综合征。家族性腺瘤性息肉病的个体发病风险为750~7500倍。该研究报道了3例进行过肝切除或肝移植术的APC基因突变的儿童HB,这些病例除了HB外,肝内均有多个独立的腺瘤样结节。该研究对25个结节进行了免疫组化分析,抗体包括磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3（GPC-3）、β-连环蛋白、细胞角蛋白AE1/AE3、CD34、Ki-67、

信号传导及转录活化因子3和Jagged1在骨肉瘤组织的表达及其临床意义

目的探讨信号传导及转录活化因子3(STAT3)和Jagged1在骨软骨瘤组织、骨肉瘤组织的表达及临床意义。方法选取大庆油田总医院2016年3月至2021年5月30例骨软骨瘤组织和84例骨肉瘤组织标本,采用免疫组织化学法检测上述组织STAT3蛋白和Jagged1蛋白的表达状态,采用χ^(2)检验分析其与各临床病理因素之间的关系。结果STAT3蛋白表达率在骨肉瘤组织和骨软骨瘤组织分别为63.10%(53/84)、13.33%(4/30),两者差异有统计学意义(χ^(2)=21.895,P<0.01);STAT3蛋白表达水平与骨肉瘤恩内金分期(Eneeking分期)、肺转移明显相关(χ^(2)=5.001、5.085,P<0.05)。Jagged1蛋白表达率在骨肉瘤组织和骨软骨瘤组织分别为70.23%(59/84)、10.00(3/30),两者差异有统计学意义(χ^(2)=32.334,P<0.01)。Jagged1蛋白表达水平与骨肉瘤Eneeking分期、肺转移、软组织浸润明显相关(χ^(2)=5.403、4.571、0.161,P<0.05)。结论STAT3蛋白和Jagged1蛋白高表达是骨肉瘤侵袭、转移的生物学标志,检测STAT3和Jagged1有助于评估骨肉瘤患者病情进展。

Foxp3^+Treg及免疫抑制因子PD-L1在宫颈病变微环境中的表达

对比Foxp3^+Treg与免疫抑制因子PD-L1在正常和不同病变状态下的宫颈微环境中的表达情况。采用亲和免疫组织化学技术SP法分别检测子宫颈癌(cervical cancer,CC)组织64例,宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)组织50例和正常宫颈组织50例,对比宫颈组织中Foxp3^+Treg和PD-L1的表达结果。宫颈病变组织中的Foxp3^+Treg和PD-L1蛋白表达均明显高于正常组织(P<0.05);随着病理级别升高,Foxp3^+Treg的侵袭性和PD-L1蛋白在异常分化细胞中的表达增强(P<0.05);Foxp3^+Treg与异常分化细胞中PD-L1的表达呈显著正相关(r=0.359,P=0.002)。在CC不断进展后,从不同组织病理阶段上看,宫颈细胞发生持续恶性转化的同时宫颈局部微环境也发生改变,即其中的Foxp3^+Treg数量在不断增多,且异常分化细胞中PD-L1的表达也逐渐增强。