禽脑脊髓炎病毒Luminex xTAG检测方法的建立

为了建立一种灵敏快速检测禽脑脊髓炎病毒(AEV)的Luminex xTAG技术方法,本试验针对AEV高度保守的VP 1基因设计了1对特异性引物,在上游引物的5′端通过Spacer18间隔添加Tag序列,下游引物的5′端标记生物素,进行反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增,构建质粒标准品,通过优化反应体系建立Luminex xTAG检测方法。用所建立的Luminex xTAG方法进行特异性、敏感性和重复性试验,并与SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR方法同时对45份脑组织临床样品进行检测。结果显示,所建立AEV Luminex xTAG检测方法与传染性法氏囊病毒、禽传染性贫血病病毒、新城疫病毒、禽流感病毒、传染性喉气管炎病毒、禽白血病病毒、马立克病毒和禽传染性支气管炎病毒无交叉反应;灵敏度可达1×10^(2)copies/μL;批内和批间重复性试验的变异系数均小于4.0%;对45份临床样品的Luminex xTAG检测结果与SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR检测结果一致。结果表明,所建立的AEV Luminex xTAG检测方法特异性好、灵敏度高、重复性和稳定性好,可用于AEV的快速检测。

禽脑脊髓炎病毒YL株的分离鉴定

为弄清陕西杨凌某鸡场种鸡产蛋量突然下降,种蛋孵化率降低,死雏、弱雏增多的原因,通过采集发病鸡脑组织进行SPF鸡胚连续传代、琼脂扩散试验（AGP）、人工感染试验、VP1基因的克隆及序列分析等对病原进行鉴定.结果显示,分离毒YL株与AEV标准阳性血清之间出现特异的沉淀线;在人工感染试验中可见雏鸡有震颤、共济失调等症状,剖检大脑有轻微的水肿和软化;成功克隆出AEV YL株的VP1基因,全长810 bp,编码270个氨基酸残基;与AEV参考毒株VP1基因核苷酸同源性92.0％～99.8％,氨基酸同源性为89.3％～99.3％;进化树分析表明,YL株与1143株、L2Z株和SX株亲缘关系较近,与VR株、HB株、SD株和NH937株亲缘关系较远.结果表明,分离毒株为禽脑脊髓炎病毒,与AEV已知毒株在进化方面存在一定程度的差异.

禽脑脊髓炎病毒VP1基因的克隆与序列分析

为了揭示禽脑脊髓炎病毒（AEV）的分子特性，使用RT-PCR方法扩增出AEVsD和HB分离株和1株标准鸡胚适应株VR株的VP1基因，克隆到载体pBluescriptSK（-）上，然后进行序列测定，并对这3株AEV的VP1基因与已发表的AEV活疫苗株1143株和强毒株L2Z株进行比较。结果，发现它们之间核苷酸和氨基酸的同源性分别为94．2％～99．9％和98．9％～100．0％。SD株和HB株与鸡胚适应毒VR株的VP1蛋白氨基酸序列完全相同。与1143株和L2Z株比较，VP1蛋白仅存在2～3个氨基酸的差异。结果表明，在不同AEV毒株中，VP1蛋白高度保守，存在极低的抗原性差异，不同AEV毒株的毒力和组织亲嗜性可能与VP1基因无关，VP1蛋白可作为防制AEV潜在的亚单位疫苗和诊断抗原。

禽脑脊髓炎的病理学研究

禽脑脊髓炎（ＡｖｉａｎＥｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ，ＡＥ）是由禽脑脊髓炎病毒（ＡＥＶ）引起的一种主要侵害雏鸡的传染病，本病已遍及全国各地〔１〕，尤其在山东时有本病发生的报道〔２～５〕，本病已成为危害养鸡业的主要传染病之一。但有关本病发病机理及组...