下调AFAP-1L2表达对人胰腺癌细胞吉西他滨化疗敏感性的影响

目的观察下调AFAP-1L2表达对胰腺癌细胞吉西他滨(Gem)化疗敏感性的影响及对胰腺癌细胞的杀灭作用。方法构建靶向siAFAP-1L2干扰质粒下调AFA-1L2表达,转染MIAPACA-2细胞,以Western blot法及(qRT)-PCR法检测转染效率;MTT检测AFAP-1L2下调后细胞存活率。对siAFAP-1L2转染MiaPaCa-2细胞给予吉西他滨干预,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果与siNegative control组比较,给予不同浓度梯度siAFAP-1L2转染MIAPACA-2细胞,siAFAP-1L2组细胞存活率较低(P<0.05);MiaPaCa-2细胞在培养24、48、72、96 h后,转染siAFAP-1L2组细胞在48 h后存活率较低(P<0.05);siAFAP-1L2转染后细胞存活率与siAFAP-1L2转染浓度和时间具有相关性(r=-0.921,r=-0.907)。将化疗药Gem 20 nmol/L加入分别以不同浓度梯度siAFAP-1L2转染的胰腺癌细胞48 h后,与siNegative control组比较,siAFAP-1L2组细胞存活率较低(P<0.05);将化疗药Gem 20 nmol/L加入siAFAP-1L2 100 nmol/L转染的MiaPaCa-2细胞,培养24、48、72、96 h后,与siNegative control组比较,siAFAP-1L2组细胞在72、96 h后存活率较低(P<0.05);siAFAP-1L2转染后,Gem化疗细胞存活率与siAFAP-1L2转染浓度和时间具有相关性(r=-0.967,r=-0.984)。siAFAP-1L2+Gem组与siAFAP-1L2组凋亡率分别为37.28%、11.65%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论下调AFAP-1L2表达可增强胰腺癌细胞对吉西他滨化疗的敏感性,促进对胰腺癌细胞的杀伤作用,可作为胰腺癌治疗的靶向候选基因。

沉默AFAP-1L2对胃癌MKN-28细胞的生物学影响

目的:探讨AFAP-1L2对胃癌MKN-28细胞的生物学影响。方法:siRNA干扰AFAP-1L2;CCK-8检测沉默AFAP-1L2后细胞的增殖情况;免疫荧光分析各组细胞的凋亡率;Transwell小室观察细胞的侵袭情况;Real time-PCR检测细胞中基因的表达情况。结果:siRNA有效干扰了AFAP-1L2的表达;沉默AFAP-1L2细胞组的细胞增殖明显受到抑制(P<0.05);siRNA-AFAP-1L2组细胞的凋亡率与其他组比较,凋亡率增高;细胞的侵袭情况,沉默AFAP-1L2明显抑制了细胞的侵袭,与其他两组比较差异显著(P<0.05);ERK1/2、p-ERK1/2和Bcl-2的表达水平,均是siRNA-AFAP-1L2细胞组低于其他两组(P<0.05)。结论:沉默AFAP-1L2抑制了胃癌MKN-28细胞的增殖,诱导细胞的凋亡,抑制了细胞的侵袭和抗凋亡基因的表达,AFAP-1L2可以通过ERK1/2途径发挥作用,为肿瘤的靶向治疗提供一定的理论依据。

下调AFAP-1L2表达增强顺铂对子宫内膜癌细胞的杀伤作用

目的观察AFAP-1L2下调后对顺铂干预的子宫内膜癌KLE细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响,为子宫内膜癌治疗提供新的靶点。方法以Western blot及q RT-PCR检测不同分化程度子宫内膜癌细胞(KLE,Ishikawa)中AFAP-1L2蛋白及m RNA表达;构建siAFAP-1L2质粒并转染子宫内膜癌细胞,检测转染效率;顺铂干预siNegative Control细胞为对照组(DDP组),对siAFAP-1L2干扰细胞(siAFAP-1L2+DDP组)给予不同浓度顺铂干预或同一浓度不同培养时间下以MTT法观察细胞存活率,流式细胞术观察细胞凋亡率,PI法观察细胞周期。结果 AFAP-1L2蛋白及m RNA在低分化KLE细胞株中表达水平明显高于高分化Ishikawa细胞株。AFAP-1L2下调后能够增加KLE细胞对DDP化疗敏感度,并具有剂量依赖性及时间依赖性。下调AFAP-1L2表达能够促进DDP干预的KLE细胞凋亡,使更多细胞生长停滞。结论 siAFAP-1L2沉默可增强顺铂对子宫内膜癌细胞的杀灭作用,为子宫内膜癌治疗研究的候选靶点。