黄曲霉毒素B_1抗体和纳米金颗粒的相互作用机理

研究了纳米金标黄曲霉毒素B1单克隆抗体（McAb）探针的制备及其标记机理,确定了稳定标记5种不同粒径金溶胶（10.7～67.4 nm）所需McAb的最适质量浓度,分别为0.07,0.051,0.033,0.019,0.012mg/mL,作用时间为5 min,pH为7.4.对金标探针复合物进行透射电镜、红外光谱和免疫反应性鉴定的结果表明,与未标记抗体相比,抗体探针的免疫亲和常数、效价和常温贮藏稳定性得到了明显提高.通过荧光光谱和圆二色谱研究纳米金与AFB1单抗McAb的相互作用机理,发现纳米金对McAb产生静态猝灭,猝灭的速率常数随着温度升高而降低.确定了结合位点数和结合常数.结果显示,表明McAb的色氨酸残基与纳米金颗粒之间发生了F rster偶极-偶极无辐射能量转移.初步确定反应前后McAb构象组成发生了变化是McAb探针亲和力和稳定性提高的原因.

黄曲霉毒素B1液相芯片定量检测方法的探索

采用间接竞争法的原理和液相芯片技术平台,选用黄曲霉毒素B1（AFB1）多克隆抗体对AFB1的定量检测方法进行了探索。通过优化偶联抗原浓度,确定AFB1多抗临界饱和浓度和抗原抗体最佳孵育时间,建立了AFB1液相芯片定量检测方法。以通用的IC50值作为灵敏度衡量标准,其灵敏度为1.33ng/mL,以IC10作为最低检测限衡量标准,其最低检测限为0.15ng/mL,线性方程为y=0.000 6x＋0.000 8。应用该方法对脱脂牛奶和全脂牛奶中的AFB1进行添加回收率检测,在2.0~16.0ng/mL添加水平下,平均回收率均大于75%,相对标准偏差介于2.80%-4.69%（n=7）之间。经过实际样品的检测,证明该方法灵敏、稳定、快速、简便,适用于大量样本的检测。