根癌农杆菌介导AFL2基因转化苹果实生苗的研究

将苹果杂交种(长富2号×新红星)种子用50mg/LGA3液打破休眠,经消毒处理后接种在MS培养基上,获得无菌组培苗。以该组培苗叶片为试材,通过不同激素组合,获得适宜于植株再生的培养基为MS+NAA0.4mg/L+TDZ2.0mg/L。通过不同质量浓度的Kan筛选,证明15mg/L是Kan最佳的选择。利用含AFL2基因的根癌农杆菌LBA4404转化苹果叶片,得到转AFL2基因的阳性植株,经PCR检测,有2株出现特异性条带,证明该基因已经整合到苹果基因组中。

菊苣再生体系建立及转AFL2基因的研究

以菊苣叶片为外植体,研究建立高效再生体系和农杆菌介导的稳定转化体系。结果表明:再生频率从48%提高至100%;单叶盘再生芽数达12个;试管苗叶片与农杆菌菌株PIG121Hm共培养3d,在附加卡那霉素20mg/L和头孢霉素600mg/L再生培养基上选择培养2周后,叶片再生出转化芽,绿芽率达8.6%,转化芽在附加30mg/L卡那霉素培养基中长大并继代增殖,初步鉴定是转化芽。