光敏核不育水稻等位突变系的AFLP分析

通过对NK58S和NK58F这一对光敏核不育水稻等位突变系的AFLP分析,比较了AFLP,RAPD及RFLP检测DNA多态性的相对效率。结果表明,这三种分子标记的DNA多态性检出效率依次为AFLP>RAPD>RFLP;找出了水稻AFLP分析的最适反应条件;通过AFLP和集群混合分析(Bulkedsegregatinganalysis,BSA),筛选出了一批与水稻光敏核不育(PGMS)基因连锁的多态性AFLP产物,已完成了对4个多态性AFLP产物的克隆,Southern杂交证明其中2个为单拷贝顺序,另外2个为低拷贝顺序。对上述三种分子标记各自的优缺点及它们在DNA多态性检测中的适用之处进行了分析探讨。

AFLP分析中多态性扩增产物的回收、克隆及鉴定

本研究在摸索和优化了水稻ＡＦＬＰ分析体系的基础上，发展了多态性ＡＦＬＰ产物的高效克隆方法。特异ＡＦＬＰ扩增产物直接从变性聚丙烯酰胺凝胶上分离纯化，再经过一至二轮ＰＣＲ扩增，即可高效地克隆于ｐＧＥＭ－Ｔｅａｓｙｖｅｃｔｏｒ系统中。本实验利用该方法成功地克隆了水稻温敏核不育等位突变系５４６０Ｓ和５４６０Ｆ间的４个多态性ＡＦＬＰ产物，Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ分析证明其中３个产物在水稻基因组中为单拷贝序列，另一个为低拷贝序列。ＡＦＬＰ技术强有力的多态性检出能力再结合多态性扩增产物的高效克隆方法，为寻找与目标基因紧密连锁的分子标记提供了有力工具。

红花RAPD和AFLP分子标记技术多态性效率比较

目的探讨RAPD和AFLP这两种分子标记技术应用于红花不同品系多态性效率的比较。方法以河南无刺大红袍和若羌有刺白两个红花品系为材料，应用100条RAPD引物、64对AFLP引物，对两品系进行多态性筛选，初步确定反映品系间差异的引物。结果筛选到RAPD特异性引物共5条，分别为AA52726、AA52729、AA52739、AA52766、AA52785，在两品系间扩增到稳定的差异片段；筛选到AFLP特异性引物共7对，分别为AF26356、AF26372、AF26385、AF26311、AF26396、AF26327、AF26343，在两品系间扩增到稳定的差异片段。结果表明，平均每条RAPD引物可以扩增出红花基因组片段数目4～10条，多态性选出率为O．20％；平均每对AFLP引物可以扩增出红花基因组片段数目为50～80条，多态性选出率为O．31％。就每条（对）引物平均可以扩增出多态性条带的数目而言，RAPD引物为1～2条，AFLP引物组合则4～5条，AFLP的检测效率明显高于RAPD。结论在红花的分子标记研究中，AFLP较RAPD为更有效的分子标记。