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燕麦AFLP反应体系的建立与优化
被引量:
10
1
作者
刘欢
赵桂琴
+1 位作者
耿小丽
刘翠茹
《草业科学》
CAS
CSCD
2008年第2期84-89,共6页
在利用扩增片断长度多态性(AFLP)技术研究燕麦Avena sativa遗传多样性过程中,从引物筛选、酶切连接、扩增条件、检测方法等几个方面进行优化,建立燕麦AFLP最适反应体系为:800 ng/μL DNA用10U EcoRⅠ和4 U MseⅠ在37℃7 h,65℃4 h温浴...
在利用扩增片断长度多态性(AFLP)技术研究燕麦Avena sativa遗传多样性过程中,从引物筛选、酶切连接、扩增条件、检测方法等几个方面进行优化,建立燕麦AFLP最适反应体系为:800 ng/μL DNA用10U EcoRⅠ和4 U MseⅠ在37℃7 h,65℃4 h温浴双酶切;16℃下连接过夜;预扩增取连接产物1μL,10μmol/L预扩引物各0.6μL,10×buffer 2μL,dNTPS 2μL,ddH2O补平至20μL;取5μL稀释20倍后的预扩增产物,50 ng/μL EcoRⅠ、MseⅠ选扩引物各0.8μL,总体系20μL进行选择性扩增。在此优化体系下,可以得到重复性好、稳定且多态性高的燕麦AFLP条带。
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关键词
燕麦
aflp反应体系
优化
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职称材料
小麦基因组AFLP反应体系的建立
被引量:
11
2
作者
贾璇
杨文香
刘大群
《河北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第2期55-59,共5页
利用小麦抗叶锈近等基因系研究了小麦基因组AFLP反应体系,建立了适于小麦基因组的AFLP反应体系:40μL酶切体系中采用7.5UPstⅠ和5UMseⅠ37℃3h,65℃3h双酶切0.1~0.2μgDNA,然后加入10μL接头、T4连接酶混合液,16℃连接过夜;吸取未稀释...
利用小麦抗叶锈近等基因系研究了小麦基因组AFLP反应体系,建立了适于小麦基因组的AFLP反应体系:40μL酶切体系中采用7.5UPstⅠ和5UMseⅠ37℃3h,65℃3h双酶切0.1~0.2μgDNA,然后加入10μL接头、T4连接酶混合液,16℃连接过夜;吸取未稀释的酶切连接液4μL,加入75ng预扩增引物,10mmol/LdNTP,1.5UTaq酶,1×buffer,加PCR水至40μL进行预扩,将预扩产物稀释20倍,吸取5μL,加入40ng选择性引物,1.25UTaq酶,7.5mmol/LdNTP,2%去离子甲酰胺,1×buffer,加PCR水至25μL进行选择性扩增。本研究为小麦抗叶锈基因的分子标记克隆及抗病育种的辅助选择提供有力的工具。
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关键词
小麦
基因组
aflp反应体系
抗叶锈近等基因系
分子标记克隆
抗病育种
辅助选择
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职称材料
药用植物草珊瑚AFLP反应体系的建立
被引量:
3
3
作者
唐美琼
姚绍嫦
+2 位作者
李林轩
蓝祖栽
凌征柱
《湖北农业科学》
北大核心
2012年第17期3879-3881,共3页
从草珊瑚(Sarcandra glabra)的幼嫩叶片中提取基因组DNA,建立草珊瑚AFLP反应体系,对AFLP反应体系中模板DNA的浓度、基因组DNA的双酶切时间、预扩增产物的稀释倍数和引物组合的筛选等关键因素进行摸索。优化的草珊瑚AFLP反应体系为模板DN...
从草珊瑚(Sarcandra glabra)的幼嫩叶片中提取基因组DNA,建立草珊瑚AFLP反应体系,对AFLP反应体系中模板DNA的浓度、基因组DNA的双酶切时间、预扩增产物的稀释倍数和引物组合的筛选等关键因素进行摸索。优化的草珊瑚AFLP反应体系为模板DNA的用量20 ng/μL、酶切反应时间4 h、预扩增产物稀释15倍,初步筛选出8对较为适合草珊瑚AFLP分析的引物组合。
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关键词
草珊瑚(Sarcandra
glabra)
aflp反应体系
建立
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职称材料
稻曲病菌AFLP反应体系的建立及其初步应用
被引量:
3
4
作者
潘雅姣
陈红漫
周永力
《生物技术通报》
CAS
CSCD
2005年第4期64-67,共4页
本研究通过一系列梯度试验建立了最佳的稻曲病菌AFLP(Amplifiedfragmentlengthpolymor-phism)反应体系,并从256对EcoRⅠ和MseⅠ引物组合中选择30对条带清晰、多态性好的引物组合分析了2003年北京昌平基地的40个稻曲病菌株的遗传多样性。
关键词
稻曲病菌
aflp反应体系
电泳图谱
内切酶
聚丙烯酰氨凝胶电泳
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职称材料
空间诱变辣椒AFLP反应体系的优化
被引量:
1
5
作者
周春阳
郭亚华
+5 位作者
谢立波
王雪
高永利
周宇
黄凤兰
彭木
《北方园艺》
CAS
北大核心
2011年第21期103-105,共3页
为了建立适合空间诱变辣椒的AFLP反应体系,以3~4叶期的辣椒叶片为试材,对体系中的DNA用量、酶切与连接、预扩增及产物的稀释倍数等关键因素进行了优化,确立了适合空间诱变辣椒的AFLP反应体系。结果表明:采用该体系对空间诱变辣椒进行A...
为了建立适合空间诱变辣椒的AFLP反应体系,以3~4叶期的辣椒叶片为试材,对体系中的DNA用量、酶切与连接、预扩增及产物的稀释倍数等关键因素进行了优化,确立了适合空间诱变辣椒的AFLP反应体系。结果表明:采用该体系对空间诱变辣椒进行AFLP分析,能够得到清晰稳定的分子标记图谱。
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关键词
空间诱变
辣椒
aflp反应体系
优化
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职称材料
辣椒AFLP反应体系的优化与建立
被引量:
5
6
作者
徐明磊
詹玉丝
+1 位作者
陈晓
樊红杰
《辣椒杂志》
2008年第3期34-37,共4页
以5个辣椒(Capsicum annuum L.)材料为研究对象,对AFLP反应体系中的DNA用量、酶切连接时间、预扩增产物的稀释倍数等关键因素进行优化分析,建立了适宜辣椒作物的AFLP反应体系。研究结果:酶切连接反应中,基因组DNA适宜用量为100ng,反应...
以5个辣椒(Capsicum annuum L.)材料为研究对象,对AFLP反应体系中的DNA用量、酶切连接时间、预扩增产物的稀释倍数等关键因素进行优化分析,建立了适宜辣椒作物的AFLP反应体系。研究结果:酶切连接反应中,基因组DNA适宜用量为100ng,反应时间是6h最为合适,预扩增产物适宜稀释倍数在30~50倍时较为理想。
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关键词
辣椒
aflp反应体系
优化建立
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职称材料
华北落叶松AFLP反应体系的建立和优化
被引量:
2
7
作者
李晓楠
狄晓艳
王孟本
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2011年第2期697-700,共4页
[目的]建立和优化华北落叶松(Larixprincipis-rupprechtii Mayr.)的AFLP反应体系。[方法]以华北落叶松为材料,对其AFLP分析过程中的5个主要影响因素(酶切时间、内切酶用量、DNA模板用量、连接产物和预扩增产物稀释倍数)进行了研究。[结...
[目的]建立和优化华北落叶松(Larixprincipis-rupprechtii Mayr.)的AFLP反应体系。[方法]以华北落叶松为材料,对其AFLP分析过程中的5个主要影响因素(酶切时间、内切酶用量、DNA模板用量、连接产物和预扩增产物稀释倍数)进行了研究。[结果]确立了适于华北落叶松AFLP分析的最佳反应体系,即在反应体积均为20.0μl的前提下,酶切时间为7 h(37℃3.5 h;65℃3.5 h),EcoRⅠ和MseⅠ内切酶用量均为1 U,DNA模板用量为3.0μl(50 ng/μl),连接产物稀释10倍取5.0μl用于预扩增,预扩增产物稀释70倍取4.0μl用于选择性扩增。[结论]采用该体系得到的电泳条带清晰可辨、多态性好、重复性强,可用于对华北落叶松遗传多样性和分子进化特征的深入研究。
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关键词
华北落叶松
aflp反应体系
建立
优化
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职称材料
葎草DNA的提取及AFLP标记反应体系的建立
被引量:
7
8
作者
肖理慧
高武军
+3 位作者
张小莉
卢龙斗
邓传良
路淑霞
《分子植物育种》
CAS
CSCD
2008年第2期393-398,共6页
本文对CTAB法、改良CTAB法和SDS法提取雌雄异株植物葎草(Humulus scandensL.)基因组的方法进行了比较分析,并在此基础上对影响葎草AFLP扩增的关键因素模板浓度、酶切时间、选择性扩增模板浓度进行了优化。结果表明,改良的CTAB法更适合...
本文对CTAB法、改良CTAB法和SDS法提取雌雄异株植物葎草(Humulus scandensL.)基因组的方法进行了比较分析,并在此基础上对影响葎草AFLP扩增的关键因素模板浓度、酶切时间、选择性扩增模板浓度进行了优化。结果表明,改良的CTAB法更适合葎草基因组DNA的提取;同时利用AFLP分子标记技术,采用EcoI-MseⅠ酶切组合,共筛选27对引物组合,确定了适用于葎草AFLP反应的最佳酶切连接、预扩和选扩体系。同时发现2对引物组合E-ACG+M-CTA和E-AAC+M-CAC共扩增出5条雌雄性别特异条带。
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关键词
葎草
DNA提取
aflp反应体系
的建立
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职称材料
华细辛AFLP反应体系的建立和优化
被引量:
4
9
作者
耿盼盼
杨冬之
+1 位作者
王勇波
刘忠
《中草药》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第4期625-629,共5页
目的建立优化的华细辛Asarum sieboldiiAFLP反应体系,为华细辛遗传多样性的研究提供技术支持。方法以华细辛叶片为材料,对基因组DNA提取、酶切连接、PCR扩增等操作过程中各关键因素进行分析,筛选最适条件,建立完善的AFLP反应体系。结果...
目的建立优化的华细辛Asarum sieboldiiAFLP反应体系,为华细辛遗传多样性的研究提供技术支持。方法以华细辛叶片为材料,对基因组DNA提取、酶切连接、PCR扩增等操作过程中各关键因素进行分析,筛选最适条件,建立完善的AFLP反应体系。结果建立了优化的华细辛AFLP分析体系:在基因组DNA提取时,提取液中添加巯基乙醇、样品温浴时间为30 min;Tru1Ⅰ和PstⅠ的酶切时间分别为3 h;在扩增反应中,Mg2+终浓度为1.5 mmol/L、TaqDNA聚合酶用量为0.2μL。结论本反应体系可获得良好的AFLP分析结果,可用于华细辛遗传多样性研究。
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关键词
华细辛
aflp反应体系
分子标记
原文传递
光皮桦AFLP分子标记体系的建立
被引量:
8
10
作者
尤卫艳
黄华宏
+1 位作者
童再康
朱玉球
《生物技术》
CAS
CSCD
2008年第6期42-45,共4页
为了建立光皮桦AFLP分子标记体系,利用SDS法、常规CTAB法和CTAB-硅珠法提取光皮桦(Betula luminiferaH.Wink.)嫩叶DNA,并进行检测比较。结果显示,CTAB-硅珠法更适合光皮桦基因组DNA的提取,所得在基因组DNA纯度高OD值在1.8左右,适用于AFL...
为了建立光皮桦AFLP分子标记体系,利用SDS法、常规CTAB法和CTAB-硅珠法提取光皮桦(Betula luminiferaH.Wink.)嫩叶DNA,并进行检测比较。结果显示,CTAB-硅珠法更适合光皮桦基因组DNA的提取,所得在基因组DNA纯度高OD值在1.8左右,适用于AFLP分析。利用AFLP分子标记技术,采用MseⅠ-EcoRⅠ酶切组合,从64个引物组合中筛选出51个带型分布均匀、多态性高且分辨能力强的引物组合。同时,通过对比实验确定了光皮桦AFLP反应的最佳模板DNA用量为300ng、酶切时间4h和预扩增产物稀释倍数30倍等,优化了相关AFLP反应体系,为今后利用AFLP分子标记技术研究光皮桦野生居群的遗传多样性分析和分子遗传图谱的构建打下坚实的基础。
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关键词
光皮桦
DNA提取
aflp反应体系
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职称材料
黄瓜基因组DNA提取及AFLP体系优化研究
被引量:
5
11
作者
宋晓飞
李晓丽
+1 位作者
冯志红
闫立英
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2009年第29期14035-14037,共3页
[目的]提取黄瓜基因组DNA,并对AFLP体系进行优化。[方法]以黄瓜嫩叶为材料,利用改进的CTAB法提取高质量的黄瓜叶片总DNA,通过优化酶切连接、预扩增、选择性扩增等试验条件建立适合黄瓜的AFLP银染体系,得到清晰的黄瓜AFLP指纹图谱。[结果...
[目的]提取黄瓜基因组DNA,并对AFLP体系进行优化。[方法]以黄瓜嫩叶为材料,利用改进的CTAB法提取高质量的黄瓜叶片总DNA,通过优化酶切连接、预扩增、选择性扩增等试验条件建立适合黄瓜的AFLP银染体系,得到清晰的黄瓜AFLP指纹图谱。[结果]DNA模板的质量影响酶切以及后续的连接扩增反应,改良的CTAB提取法可用于黄瓜AFLP分析,形成清晰的AFLP指纹。优化的酶切连接体系为:以37℃酶切连接12 h为宜,酶切连接的基因组DNA用量为200ng,预扩增时Taq酶用量为0.5U/20μl体系,预扩增产物稀释40倍作为选择性扩增的模板。在此优化的体系下引物E41M47扩增出清晰的条带。[结论]为黄瓜品种的分子标记和黄瓜品种间亲缘关系等研究奠定了基础。
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关键词
黄瓜
DNA提取
aflp反应体系
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职称材料
蜡梅AFLP分子标记技术体系的建立
被引量:
11
12
作者
赵冰
张启翔
《武汉植物学研究》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第1期93-97,共5页
利用简易CTAB法、改良的CTAB法和SDS法提取蜡梅[Chimonanthus praecox(L.)Link]成熟叶和嫩叶的基因组,并进行了检测比较。结果显示,改良的CTAB法更适合蜡梅基因组DNA的提取,蜡梅叶片的年龄并不影响蜡梅基因组DNA的提取;同时利用AFLP分...
利用简易CTAB法、改良的CTAB法和SDS法提取蜡梅[Chimonanthus praecox(L.)Link]成熟叶和嫩叶的基因组,并进行了检测比较。结果显示,改良的CTAB法更适合蜡梅基因组DNA的提取,蜡梅叶片的年龄并不影响蜡梅基因组DNA的提取;同时利用AFLP分子标记技术,采用MseI-EcoR I酶切组合,从168对引物中筛选出10对带型分布均匀、多态性高且分辨能力强的引物,分别为:M23E46、M24E46、M25E46、M23E47、M24E47、M41E47、M41E94、M64E94、M64E66和M24E75,并确定了适用于蜡梅AFLP反应的最佳酶切连接、预扩和选扩体系,从而为今后利用AFLP分子标记技术研究蜡梅的品种分类和野生居群的遗传多样性分析打下坚实的基础。
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关键词
蜡梅[Chimonanthus
praecox(L.)Link]品种
DNA提取
aflp反应体系
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职称材料
耧斗菜属AFLP体系的建立和优化
被引量:
2
13
作者
朱蕊蕊
高亦珂
张启翔
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2010年第B08期38-40,共3页
通过对AFLP反应体系的主要的四个影响因素:Mg2+、dNTPs、Taq酶、引物进行四水平筛选试验,利用三种耧斗菜Aquilegia parviflora、A.viridiflora、A.vulgaris优化了耧斗菜属的AFLP反应体系,采用64对引物组合对三种耧斗菜进行了PCR扩增和...
通过对AFLP反应体系的主要的四个影响因素:Mg2+、dNTPs、Taq酶、引物进行四水平筛选试验,利用三种耧斗菜Aquilegia parviflora、A.viridiflora、A.vulgaris优化了耧斗菜属的AFLP反应体系,采用64对引物组合对三种耧斗菜进行了PCR扩增和聚丙烯酰胺电泳检测。其中9对引物组合表现出较高的稳定性、清晰度和多态性。初步建立了耧斗菜的AFLP反应体系,得到质量比较好的AFLP胶图。从而为AFLP分子标记技术应用于耧斗菜属的研究奠定坚实基础。
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关键词
aflp反应体系
耧斗菜
PCR
聚丙烯酰胺凝胶电泳
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职称材料
题名
燕麦AFLP反应体系的建立与优化
被引量:
10
1
作者
刘欢
赵桂琴
耿小丽
刘翠茹
机构
甘肃农业大学草业学院
出处
《草业科学》
CAS
CSCD
2008年第2期84-89,共6页
基金
农业行业科研专项(nyhyzx07009-06)
农业部"948"燕麦(2006-G10)
文摘
在利用扩增片断长度多态性(AFLP)技术研究燕麦Avena sativa遗传多样性过程中,从引物筛选、酶切连接、扩增条件、检测方法等几个方面进行优化,建立燕麦AFLP最适反应体系为:800 ng/μL DNA用10U EcoRⅠ和4 U MseⅠ在37℃7 h,65℃4 h温浴双酶切;16℃下连接过夜;预扩增取连接产物1μL,10μmol/L预扩引物各0.6μL,10×buffer 2μL,dNTPS 2μL,ddH2O补平至20μL;取5μL稀释20倍后的预扩增产物,50 ng/μL EcoRⅠ、MseⅠ选扩引物各0.8μL,总体系20μL进行选择性扩增。在此优化体系下,可以得到重复性好、稳定且多态性高的燕麦AFLP条带。
关键词
燕麦
aflp反应体系
优化
Keywords
oat
aflp
reaction system
optimization
分类号
S512.6 [农业科学—作物学]
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职称材料
题名
小麦基因组AFLP反应体系的建立
被引量:
11
2
作者
贾璇
杨文香
刘大群
机构
河北农业大学植物保护学院
出处
《河北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第2期55-59,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(30170602)
文摘
利用小麦抗叶锈近等基因系研究了小麦基因组AFLP反应体系,建立了适于小麦基因组的AFLP反应体系:40μL酶切体系中采用7.5UPstⅠ和5UMseⅠ37℃3h,65℃3h双酶切0.1~0.2μgDNA,然后加入10μL接头、T4连接酶混合液,16℃连接过夜;吸取未稀释的酶切连接液4μL,加入75ng预扩增引物,10mmol/LdNTP,1.5UTaq酶,1×buffer,加PCR水至40μL进行预扩,将预扩产物稀释20倍,吸取5μL,加入40ng选择性引物,1.25UTaq酶,7.5mmol/LdNTP,2%去离子甲酰胺,1×buffer,加PCR水至25μL进行选择性扩增。本研究为小麦抗叶锈基因的分子标记克隆及抗病育种的辅助选择提供有力的工具。
关键词
小麦
基因组
aflp反应体系
抗叶锈近等基因系
分子标记克隆
抗病育种
辅助选择
Keywords
wheat
genome
aflp
affecting factors
分类号
S512.1 [农业科学—作物学]
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职称材料
题名
药用植物草珊瑚AFLP反应体系的建立
被引量:
3
3
作者
唐美琼
姚绍嫦
李林轩
蓝祖栽
凌征柱
机构
广西药用植物园/广西药用资源保护与遗传改良重点实验室
出处
《湖北农业科学》
北大核心
2012年第17期3879-3881,共3页
基金
广西科学研究与技术开发计划项目﹙桂科攻1099063-13﹚
文摘
从草珊瑚(Sarcandra glabra)的幼嫩叶片中提取基因组DNA,建立草珊瑚AFLP反应体系,对AFLP反应体系中模板DNA的浓度、基因组DNA的双酶切时间、预扩增产物的稀释倍数和引物组合的筛选等关键因素进行摸索。优化的草珊瑚AFLP反应体系为模板DNA的用量20 ng/μL、酶切反应时间4 h、预扩增产物稀释15倍,初步筛选出8对较为适合草珊瑚AFLP分析的引物组合。
关键词
草珊瑚(Sarcandra
glabra)
aflp反应体系
建立
Keywords
Sarcandra glabra
aflp
reaction system
establishment
分类号
S567.23 [农业科学—中草药栽培]
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职称材料
题名
稻曲病菌AFLP反应体系的建立及其初步应用
被引量:
3
4
作者
潘雅姣
陈红漫
周永力
机构
沈阳农业大学生物技术学院
中国农业科学院作物科学研究所农作物基因资源与基因改良国家重大科学工程
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
2005年第4期64-67,共4页
基金
国家自然科学基金(30471021)
文摘
本研究通过一系列梯度试验建立了最佳的稻曲病菌AFLP(Amplifiedfragmentlengthpolymor-phism)反应体系,并从256对EcoRⅠ和MseⅠ引物组合中选择30对条带清晰、多态性好的引物组合分析了2003年北京昌平基地的40个稻曲病菌株的遗传多样性。
关键词
稻曲病菌
aflp反应体系
电泳图谱
内切酶
聚丙烯酰氨凝胶电泳
Keywords
Ustilaginoidea. virens
aflp
Genetic diversity
分类号
S435.111.46 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
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职称材料
题名
空间诱变辣椒AFLP反应体系的优化
被引量:
1
5
作者
周春阳
郭亚华
谢立波
王雪
高永利
周宇
黄凤兰
彭木
机构
东北农业大学园艺学院
黑龙江省农业科学院园艺分院
内蒙古民族大学生命科学学院
出处
《北方园艺》
CAS
北大核心
2011年第21期103-105,共3页
基金
航天育种工程资助项目(2006HT20012)
国家大宗蔬菜产业技术体系资助项目(CARS-25-G-11)
+1 种基金
黑龙江省自然科学基金重点资助项目(ZD200818-01)
黑龙江省自然科学基金资助项目(C200943)
文摘
为了建立适合空间诱变辣椒的AFLP反应体系,以3~4叶期的辣椒叶片为试材,对体系中的DNA用量、酶切与连接、预扩增及产物的稀释倍数等关键因素进行了优化,确立了适合空间诱变辣椒的AFLP反应体系。结果表明:采用该体系对空间诱变辣椒进行AFLP分析,能够得到清晰稳定的分子标记图谱。
关键词
空间诱变
辣椒
aflp反应体系
优化
Keywords
induced by space
hot pepper
aflp
analysis system
optimization
分类号
S641.303.6 [农业科学—蔬菜学]
下载PDF
职称材料
题名
辣椒AFLP反应体系的优化与建立
被引量:
5
6
作者
徐明磊
詹玉丝
陈晓
樊红杰
机构
河南省农业科学院园艺研究所
出处
《辣椒杂志》
2008年第3期34-37,共4页
文摘
以5个辣椒(Capsicum annuum L.)材料为研究对象,对AFLP反应体系中的DNA用量、酶切连接时间、预扩增产物的稀释倍数等关键因素进行优化分析,建立了适宜辣椒作物的AFLP反应体系。研究结果:酶切连接反应中,基因组DNA适宜用量为100ng,反应时间是6h最为合适,预扩增产物适宜稀释倍数在30~50倍时较为理想。
关键词
辣椒
aflp反应体系
优化建立
Keywords
hot pepper (Capsicum annuum L.)
aflp
analysis system
optimization and establishment
分类号
S641.3 [农业科学—蔬菜学]
TQ323.8 [化学工程—合成树脂塑料工业]
下载PDF
职称材料
题名
华北落叶松AFLP反应体系的建立和优化
被引量:
2
7
作者
李晓楠
狄晓艳
王孟本
机构
山西大学黄土高原研究所
出处
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2011年第2期697-700,共4页
基金
山西省自然科学基金项目(2010011041-1)
文摘
[目的]建立和优化华北落叶松(Larixprincipis-rupprechtii Mayr.)的AFLP反应体系。[方法]以华北落叶松为材料,对其AFLP分析过程中的5个主要影响因素(酶切时间、内切酶用量、DNA模板用量、连接产物和预扩增产物稀释倍数)进行了研究。[结果]确立了适于华北落叶松AFLP分析的最佳反应体系,即在反应体积均为20.0μl的前提下,酶切时间为7 h(37℃3.5 h;65℃3.5 h),EcoRⅠ和MseⅠ内切酶用量均为1 U,DNA模板用量为3.0μl(50 ng/μl),连接产物稀释10倍取5.0μl用于预扩增,预扩增产物稀释70倍取4.0μl用于选择性扩增。[结论]采用该体系得到的电泳条带清晰可辨、多态性好、重复性强,可用于对华北落叶松遗传多样性和分子进化特征的深入研究。
关键词
华北落叶松
aflp反应体系
建立
优化
Keywords
Larix principis-rupprechtii
aflp
reaction system
Establishment
Optimization
分类号
S791.22 [农业科学—林木遗传育种]
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职称材料
题名
葎草DNA的提取及AFLP标记反应体系的建立
被引量:
7
8
作者
肖理慧
高武军
张小莉
卢龙斗
邓传良
路淑霞
机构
河南师范大学生命科学学院
河南大学生命科学学院
出处
《分子植物育种》
CAS
CSCD
2008年第2期393-398,共6页
基金
河南省教育厅自然科学基金(2006180014)
新乡市科技攻关项目(07N050)资助
文摘
本文对CTAB法、改良CTAB法和SDS法提取雌雄异株植物葎草(Humulus scandensL.)基因组的方法进行了比较分析,并在此基础上对影响葎草AFLP扩增的关键因素模板浓度、酶切时间、选择性扩增模板浓度进行了优化。结果表明,改良的CTAB法更适合葎草基因组DNA的提取;同时利用AFLP分子标记技术,采用EcoI-MseⅠ酶切组合,共筛选27对引物组合,确定了适用于葎草AFLP反应的最佳酶切连接、预扩和选扩体系。同时发现2对引物组合E-ACG+M-CTA和E-AAC+M-CAC共扩增出5条雌雄性别特异条带。
关键词
葎草
DNA提取
aflp反应体系
的建立
Keywords
Humulus scandens L., DNA extraction, Establishment of
aflp
reaction system
分类号
Q943.2 [生物学—植物学]
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职称材料
题名
华细辛AFLP反应体系的建立和优化
被引量:
4
9
作者
耿盼盼
杨冬之
王勇波
刘忠
机构
上海交通大学药学院
郑州大学生物工程系
出处
《中草药》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第4期625-629,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(30772725)
文摘
目的建立优化的华细辛Asarum sieboldiiAFLP反应体系,为华细辛遗传多样性的研究提供技术支持。方法以华细辛叶片为材料,对基因组DNA提取、酶切连接、PCR扩增等操作过程中各关键因素进行分析,筛选最适条件,建立完善的AFLP反应体系。结果建立了优化的华细辛AFLP分析体系:在基因组DNA提取时,提取液中添加巯基乙醇、样品温浴时间为30 min;Tru1Ⅰ和PstⅠ的酶切时间分别为3 h;在扩增反应中,Mg2+终浓度为1.5 mmol/L、TaqDNA聚合酶用量为0.2μL。结论本反应体系可获得良好的AFLP分析结果,可用于华细辛遗传多样性研究。
关键词
华细辛
aflp反应体系
分子标记
Keywords
Asarum sieboldii Miq.
aflp
reaction system
molecular marker
分类号
R282.21 [医药卫生—中药学]
原文传递
题名
光皮桦AFLP分子标记体系的建立
被引量:
8
10
作者
尤卫艳
黄华宏
童再康
朱玉球
机构
浙江林学院林业与生物技术学院
出处
《生物技术》
CAS
CSCD
2008年第6期42-45,共4页
基金
浙江省科学技术攻关项目(2004C12022)
浙江省林业重点项目(2006SY01)资助
文摘
为了建立光皮桦AFLP分子标记体系,利用SDS法、常规CTAB法和CTAB-硅珠法提取光皮桦(Betula luminiferaH.Wink.)嫩叶DNA,并进行检测比较。结果显示,CTAB-硅珠法更适合光皮桦基因组DNA的提取,所得在基因组DNA纯度高OD值在1.8左右,适用于AFLP分析。利用AFLP分子标记技术,采用MseⅠ-EcoRⅠ酶切组合,从64个引物组合中筛选出51个带型分布均匀、多态性高且分辨能力强的引物组合。同时,通过对比实验确定了光皮桦AFLP反应的最佳模板DNA用量为300ng、酶切时间4h和预扩增产物稀释倍数30倍等,优化了相关AFLP反应体系,为今后利用AFLP分子标记技术研究光皮桦野生居群的遗传多样性分析和分子遗传图谱的构建打下坚实的基础。
关键词
光皮桦
DNA提取
aflp反应体系
Keywords
Betula luminifera.
DNA extraction
aflp
reaction system
分类号
S792.2 [农业科学—林木遗传育种]
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职称材料
题名
黄瓜基因组DNA提取及AFLP体系优化研究
被引量:
5
11
作者
宋晓飞
李晓丽
冯志红
闫立英
机构
河北科技师范学院
出处
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2009年第29期14035-14037,共3页
基金
河北省自然基金项目(C2007000725)
文摘
[目的]提取黄瓜基因组DNA,并对AFLP体系进行优化。[方法]以黄瓜嫩叶为材料,利用改进的CTAB法提取高质量的黄瓜叶片总DNA,通过优化酶切连接、预扩增、选择性扩增等试验条件建立适合黄瓜的AFLP银染体系,得到清晰的黄瓜AFLP指纹图谱。[结果]DNA模板的质量影响酶切以及后续的连接扩增反应,改良的CTAB提取法可用于黄瓜AFLP分析,形成清晰的AFLP指纹。优化的酶切连接体系为:以37℃酶切连接12 h为宜,酶切连接的基因组DNA用量为200ng,预扩增时Taq酶用量为0.5U/20μl体系,预扩增产物稀释40倍作为选择性扩增的模板。在此优化的体系下引物E41M47扩增出清晰的条带。[结论]为黄瓜品种的分子标记和黄瓜品种间亲缘关系等研究奠定了基础。
关键词
黄瓜
DNA提取
aflp反应体系
Keywords
Cucumber( Cucnmis sativus L. )
Extraction of DNA
aflp
reaction system
分类号
S642.2 [农业科学—蔬菜学]
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职称材料
题名
蜡梅AFLP分子标记技术体系的建立
被引量:
11
12
作者
赵冰
张启翔
机构
北京林业大学园林学院
出处
《武汉植物学研究》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第1期93-97,共5页
基金
国家十五攻关项目(2004BA525B11)资助
文摘
利用简易CTAB法、改良的CTAB法和SDS法提取蜡梅[Chimonanthus praecox(L.)Link]成熟叶和嫩叶的基因组,并进行了检测比较。结果显示,改良的CTAB法更适合蜡梅基因组DNA的提取,蜡梅叶片的年龄并不影响蜡梅基因组DNA的提取;同时利用AFLP分子标记技术,采用MseI-EcoR I酶切组合,从168对引物中筛选出10对带型分布均匀、多态性高且分辨能力强的引物,分别为:M23E46、M24E46、M25E46、M23E47、M24E47、M41E47、M41E94、M64E94、M64E66和M24E75,并确定了适用于蜡梅AFLP反应的最佳酶切连接、预扩和选扩体系,从而为今后利用AFLP分子标记技术研究蜡梅的品种分类和野生居群的遗传多样性分析打下坚实的基础。
关键词
蜡梅[Chimonanthus
praecox(L.)Link]品种
DNA提取
aflp反应体系
Keywords
Wintersweet cultivars( Chimonanthus praecox (L.) Link)
DNA extraction
aflp
reaction system
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
S685.99 [农业科学—观赏园艺]
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职称材料
题名
耧斗菜属AFLP体系的建立和优化
被引量:
2
13
作者
朱蕊蕊
高亦珂
张启翔
机构
北京林业大学园林学院
国家花卉工程技术研究中心
出处
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2010年第B08期38-40,共3页
基金
国家环境保护部全国生物物种资源联合执法检查和调查项目(物种09-二-3-1)
文摘
通过对AFLP反应体系的主要的四个影响因素:Mg2+、dNTPs、Taq酶、引物进行四水平筛选试验,利用三种耧斗菜Aquilegia parviflora、A.viridiflora、A.vulgaris优化了耧斗菜属的AFLP反应体系,采用64对引物组合对三种耧斗菜进行了PCR扩增和聚丙烯酰胺电泳检测。其中9对引物组合表现出较高的稳定性、清晰度和多态性。初步建立了耧斗菜的AFLP反应体系,得到质量比较好的AFLP胶图。从而为AFLP分子标记技术应用于耧斗菜属的研究奠定坚实基础。
关键词
aflp反应体系
耧斗菜
PCR
聚丙烯酰胺凝胶电泳
Keywords
aflp
Aquilegia
PCR
PAGE
分类号
S882 [农业科学—特种经济动物饲养]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
燕麦AFLP反应体系的建立与优化
刘欢
赵桂琴
耿小丽
刘翠茹
《草业科学》
CAS
CSCD
2008
10
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职称材料
2
小麦基因组AFLP反应体系的建立
贾璇
杨文香
刘大群
《河北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2003
11
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职称材料
3
药用植物草珊瑚AFLP反应体系的建立
唐美琼
姚绍嫦
李林轩
蓝祖栽
凌征柱
《湖北农业科学》
北大核心
2012
3
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职称材料
4
稻曲病菌AFLP反应体系的建立及其初步应用
潘雅姣
陈红漫
周永力
《生物技术通报》
CAS
CSCD
2005
3
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职称材料
5
空间诱变辣椒AFLP反应体系的优化
周春阳
郭亚华
谢立波
王雪
高永利
周宇
黄凤兰
彭木
《北方园艺》
CAS
北大核心
2011
1
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职称材料
6
辣椒AFLP反应体系的优化与建立
徐明磊
詹玉丝
陈晓
樊红杰
《辣椒杂志》
2008
5
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职称材料
7
华北落叶松AFLP反应体系的建立和优化
李晓楠
狄晓艳
王孟本
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2011
2
下载PDF
职称材料
8
葎草DNA的提取及AFLP标记反应体系的建立
肖理慧
高武军
张小莉
卢龙斗
邓传良
路淑霞
《分子植物育种》
CAS
CSCD
2008
7
下载PDF
职称材料
9
华细辛AFLP反应体系的建立和优化
耿盼盼
杨冬之
王勇波
刘忠
《中草药》
CAS
CSCD
北大核心
2009
4
原文传递
10
光皮桦AFLP分子标记体系的建立
尤卫艳
黄华宏
童再康
朱玉球
《生物技术》
CAS
CSCD
2008
8
下载PDF
职称材料
11
黄瓜基因组DNA提取及AFLP体系优化研究
宋晓飞
李晓丽
冯志红
闫立英
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2009
5
下载PDF
职称材料
12
蜡梅AFLP分子标记技术体系的建立
赵冰
张启翔
《武汉植物学研究》
CAS
CSCD
北大核心
2007
11
下载PDF
职称材料
13
耧斗菜属AFLP体系的建立和优化
朱蕊蕊
高亦珂
张启翔
《华北农学报》
CSCD
北大核心
2010
2
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职称材料
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