应用AFLP-DNA指纹技术鉴定梅花品种的研究

应用银染法AFLP技术,通过筛选的7对Mse I-EcoR I引物组合,建立了162个梅花品种的175个样品指纹。使用NTSYSpc2.1t软件,计算遗传相似性,以SAHN Clustering进行不加权成对算术平均法(UPGMA)聚类分析。其中引物组合E-ACT/M-CAG和E-GA/M-CTC分别仅有两个样品不能区分开,其余引物组合均能鉴别175个样品中的164个以上的样品。7对引物组合的平均鉴别效率达到95.89%,两对引物组合可以鉴别所有样品。以引物组合E-GA/M-CTC为例进行了品种鉴定的聚类分析。所以,用AFLP-DNA指纹图谱来鉴别梅花品种资源,效率是很高的。

Rice seed identification by computerized AFLP-DNA fingerprinting

We developed a computerized seed identification system. Fifteen rice varietiesthat were widely used in China were analyzed by AFLP fingerprinting. 12 primerpairs were screened, In order to simplify the procedure and cut down the cost inseed identification. the least number of primer pairs for practical seed identifi-cation should be seleeled. In this study. 3 primer pairs were selected. They

AFLP法构建人参、西洋参基因组DNA指纹图谱

目的 采用扩增片段长度多态性DNA(AFLP)分子遗传标志技术 ,分析人参、西洋参基因组DNA多态性。方法 人参、西洋参干燥根基因组DNA ,经EcoRI/MseI酶切并与其相应的人工接头连接后 ,使用选择性引物进行PCR扩增。结果 经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 ,成功构建出多态性丰富和重复性好的人参、西洋参DNA指纹图谱。结论 AFLP法有望成为一种独立的切实可行的手段 ,将在人参、西洋参等药用植物的鉴定、生物进化、系统发育研究及指导道地性药材的科学栽培等方面发挥重要作用。

应用AFLP分子标记鉴定苹果品种

在建立苹果品种AFLP分析体系的基础上 ,从 6 8对引物中筛选出了 4对多态性高、分辨能力强的引物 (即P32M4 6、P4 4M53、P59M4 1和P79M6 1)。分析了P32M4 6引物绘制的我国 2 5个苹果重要品种的AFLP指纹图谱的遗传多样性 ,确定了各供试品种的差异带 ,区分了供试的 2 5个苹果品种。对AFLP分析的关键步骤进行了讨论 ,并对生产上应用AFLP技术检测苹果品种真实性和纯度作了展望。

假俭草遗传多样性的AFLP指纹分析

采用AFLP技术对来自我国多个省区的 9份假俭草种质资源进行了DNA指纹图谱分析。从 6 4对引物组合中选出 2对引物组合构建了所研究种质的指纹图谱。 2对引物共扩增出 816条谱带 ,多态性比率超过 6 0 8%。遗传多样性分析表明 ,假俭草资源材料间的遗传距离为 0 135～ 0 994。根据以上的AFLP数据进行了聚类分析 ,结果表明假俭草 9个材料分别聚成了四个类型。聚类结果与形态学和同工酶研究结果是一致的 ,表明应用AFLP技术能在DNA分子水平上较好地揭示假俭草的遗传背景和亲缘关系。

香蕉种质资源的AFLP鉴别与分类中DNA模板的制备

在运用AFLP技术进行香蕉种质资源的鉴别与分类时,成功的关键之一是HMW基因组DNA的成功制备和避免降解,为了获得高纯度的HMW香蕉模板DNA和清晰的AFLP指纹图谱,以粉蕉为试材进行了用不同方法从不同植物体部位提取香蕉DNA的研究。结果表明,以香蕉未展开的幼叶、成熟叶、新根为材料提取的DNA量足以进行AFLP分析,但考虑到取材的方便性,最好选用未展开的幼叶或成熟叶;用改进后的SDS、CTAB法均可以获得HMW基因组DNA和AFLP指纹图谱,SDS法(用氯仿异-戊醇溶液抽提3次)提取的DNA量将近是CTAB法提取的DNA量的2倍,但SDS法提取的DNA纯度不如CTAB法提取的高。两种方法提取的DNA片段大小一致,大约在16kb左右。

石斛属4种植物的AFLP分析

目的 研究石斛属植物 DNA指纹图谱 ,初步探讨 AFL P分子标记技术在石斛地道性鉴别上的应用。方法采用扩增片段长度多态性 (AFL P)技术对石斛属内石斛组 4个种和一个外类群种进行基因组 DNA多态性分析。结果 从 6 4对引物组合中选出 5对引物组合构建了 5个种的 DNA指纹图谱。通过聚类分析 ,石斛属 4种植物聚成一个大类 ,彼此关系得到了很好的分辨 ,并获得 bootstrap校验的有力支持。结论 AFL

猕猴桃雌雄性别的AFLP鉴别中DNA模板的制备

基因组DNA的成功制备和避免降解是AFLP成功的关键。描述了猕猴桃AFLP研究中的DNA模板制备方法，尤其是DNA的提取和纯化，以及基因组DNA的酶切中常见的问题及其相应的解决措施。应用这些方法得到了猕猴桃清晰的AFLP指纹图谱。

板栗基因组AFLP银染反应体系的建立

为了建立准确、高效、实用的板栗品种鉴别体系和方法,采用改进的CTAB—DNA提取方法,从板栗的嫩叶和老叶中提取获得总DNA。所得DNA样品的D260nm/D280nm值为1.7～1.9,琼脂糖凝胶上主带清晰、较少降解、样品纯度高、蛋白去除干净且获得率高。该体系使用操作简便、快捷、高效,适合于板栗DNA提取,所提取的DNA样品不含PCR反应抑制剂及其他酶反应抑制剂,可被限制性内切酶MseI和EcoRI完全酶切,适合AFLP-PCR反应应用,得到清晰的指纹式样,适宜用作板栗品种鉴别的有效方法。

梅花基因组AFLP银染反应体系的建立和优化

采用改进的SDS DNA提取方法从梅花的嫩叶和老叶中提取获得总DNA .所得DNA样品的OD2 6 0 OD2 80 值在1 7～ 1 9之间 ,琼脂糖凝胶上主带清晰、较少降解、样品纯度高、蛋白去除干净且得率高 .该体系对原提取程序作了多处简化 ,使操作简便、快捷、高效 ,适合于梅花DNA提取 ,所提取的DNA样品不含PCR反应抑制剂及其他酶反应抑制剂 ,可被限制性内切酶MseⅠ和EcoRⅠ完全酶切 ,适合AFLP PCR反应应用 ,得到清晰的指纹式样 .

枳属36份特异种质的AFLP指纹图谱构建与分析

从 4 0个PstI/MseI酶切的AFLP引物对中筛选出多态性高的 7个 ,对 36份枳属特异种质进行了指纹分析。 7个引物对共获得 5 39条带 ,其中 14 6条带具有多态性。各种质材料之间的遗传相似性在 0 2 3～ 0 98之间 ,只需结合其中的 3个引物对即可区分所有的材料。根据 7个AFLP引物对所得谱带的UPGMA聚类分析表明 ,聚类结果与地理来源没有明显的联系 ,这可能正反映了近时间内地区之间枳资源的频繁交流。

核桃AFLP银染技术体系的建立

为了建立准确、高效、实用的核桃AFLP体系,应用于核桃品种鉴别、优异基因的分子标记,本试验针对核桃叶片中多糖、酚类等次生代谢物比较多的特点,采用改良CTAB法,通过添加抗氧化物质,得到了适合核桃AFLP分析的基因组DNA提取方法;在此基础上进行了AFLP体系中主要参数的优化研究,比较了两种银染方法的效果,并从64对选择性扩增引物中筛选出了18对适合核桃AFLP分析的引物,建立了能得到清晰指纹分析图像的核桃AFLP技术体系。

家猪AFLP分析体系的建立

以大白等 6个猪品种为试验材料 ,建立了家猪扩增酶切片段长度多态性 (AFLP)分析体系 ,对其分析过程中DNA提取、双酶切、连接、预扩增、选择性扩增、银染效果进行了检测。用E39M 4 8引物组合构建了供试猪的AFLP指纹图谱。条带清晰可辨 ,扩增信号强 ,无背景干扰。

芝麻空间诱变品系(种)的DNA指纹分析

【目的】揭示芝麻空间诱变品系(种)的DNA水平上的变异,探讨芝麻空间诱变的分子机理,以期为作物空间诱变育种提供理论基础。【方法】首次应用AFLP标记对芝麻空间诱变的3个品系(种)及原始对照种豫芝4号(未搭载处理的留地种子)进行DNA指纹分析。【结果】随机组合的30对AFLP引物对原始对照种及3个空间诱变品系(种)进行扩增,共获得1176条DNA谱带,其中多态性谱带625条,多态性位点比率为53.15%,每对引物均扩增出多态性,并且每一个空间诱变品系(种)与原始对照种间均扩增出多态性DNA谱带。利用NTSYS软件进行类平均法(UPGMA)聚类发现3个空间诱变品系(种)明显地聚在一起,与原始对照种存在较大差异。【结论】通过空间诱变能够在DNA水平上导致芝麻遗传物质变异,空间诱变是一种有效的育种途径。AFLP是一种研究植物空间诱变材料的高效率的分子生物学方法。

小麦AFLP片段序列多态性分析和AFLP-SCAR标记的研究

为了解相同长度的AFLP片段中DNA序列的多态性,对70条小麦AFLP片段进行回收、克隆以及测序分析,比较了不同品种间相同长度的AFLP片段、一条AFLP片段的不同单克隆以及品种间非多态性AFLP片段的DNA序列。对70个片段构成的98对同长片段进行DNA序列比对,结果表明：（1）只有3对片段的序列100%相同,其他95对片段之间DNA序列差异为1%-70%;（2）不同小麦品种间同长的AFLP片段中普遍存在DNA序列完全不同、部分不同和具有SNP的现象;（3）一条回收的AFLP带纹的不同单克隆之间也存在DNA序列完全不同、部分不同和具有SNP的现象;（4）品种间有些非多态性AFLP片段的DNA序列也存在多态性。揭示了小麦三套基因组间AFLP等位基因的多态性,以及不同AFLP位点同长片段的DNA序列多态性,对AFLP标记的使用提出了一些不同看法,并提出了利用AFLP片段的序列多态性设计SCAR引物的方法。

南瑞苕AFLP指纹图谱的构建与聚类分析

以甘薯生产中主要应用的亲本材料南瑞苕及其子代品种为材料,用建立的AFLP分子标记体系进行研究,筛选得到5对多态性高、分辨力强的引物EATT、MCCA等,通过这5对引物构建出了南瑞苕的指纹图谱。用16对引物对47个与南瑞苕相关的品种进行聚类分析,统计DNA多态性条带后用UPGMA方法获得了聚类分析图,根据结果将47个品种分为5大类型,该实验结果为甘薯育种工作者了解各个品种的相互关系和进一步应用某一材料的优良性状选育品种奠定了基础。

半夏栽培品遗传差异的AFLP分析

目的构建不同地区来源半夏栽培品的DNA指纹图谱,探讨利用AFLP分子标记在半夏遗传多样性、亲缘关系及种质鉴别上的可行性。方法运用扩增片段长度多态性技术(AFLP),对我国17个地区的51份半夏栽培品和4份掌叶半夏样品(外群)进行基因组DNA多态性分析。结果从64对引物组合中筛选出8对多态性丰富、鉴别效率高的AFLP引物组合,构建了51份半夏栽培品的AFLP指纹图谱。聚类分析结果表明:所有半夏栽培品完全被区分开,来源地相同的种质表现出相对密切的亲缘关系,浙江等华东地区的栽培半夏同其他地区半夏有着明显遗传差异,聚类分析结果获得了Bootstrap校验的支持。结论AFLP分子标记可用于半夏遗传多样性、亲缘关系及种质鉴别分析,浙江、江苏等华东地区栽培半夏的遗传特性相对独立。

利用AFLP技术筛选锯缘青蟹性别差异DNA片段

采用高盐和酚氯仿异戊醇 (PCI)结合法提取DNA ,利用AFLP技术 ,应用 5 2个引物组合 ,检测了锯缘青蟹 (Scyllaser rata)雌雄基因组DNA的多态性 ,筛选与锯缘青蟹性别相关的分子标记。实验中共扩增出 4 312条带 ,筛选出候选差异DNA片段 74 8条。这些差异DNA片段的获得 。

黄瓜AFLP反应体系的建立

以24个不同类型的黄瓜高代自交系为试材,通过对扩增长度多态性(AFLP)反应体系中的几个关键参数进行优化,建立了适合于黄瓜的AFLP反应体系。结果表明,用于酶切的基因组DNA以300 ng为宜,预扩增产物的稀释倍数以30倍为宜,选择性扩增引物的选择性碱基的数目以“2+3”组合为宜。采用优化好的体系,引物组合P12M12在供试材料中共扩增出稳定清晰的带纹35条,其中多态性带4条。