农杆菌介导AFP1基因转化小麦获得转基因植株

以nptⅡ基因为筛选基因,利用农杆菌转化系统向普通小麦品种核生3号和99P的愈伤组织中转入白粉病抗性基因Rs-AFP1;获得抗生素抗性克隆数目分别为27个和24个,其中再生绿苗的克隆分别为2个和8个;PCR分析检测所得nptⅡ阳性植株分别为2株和6株,AFP1基因阳性植株分别为1株和4株。

苦瓜afp1基因的克隆与序列分析

通过异硫氰酸胍法提取苦瓜总RNA,采用一步RT-PCR方法获得394bp苦瓜afp1基因序列。应用DNA star软件进行序列分析,表明这个片段包含了基因完整的编码。Blast分析表明,它与荠菜的防卫基因有很高的同源性,序列一致率为87%。该试验结果将为分子植物抗病育种提供基因材料。

利用CRISPR/Cas9技术编辑AFP1基因提高水稻耐逆性

【目的】为鉴定水稻AFP1在非生物胁迫响应中的作用,创制非生物胁迫抗性的水稻新材料。【方法】以优异籼稻恢复系华占为转化受体,利用CRISPR/Cas9技术创制afp1突变体,并对afp1突变体的耐逆性进行初步鉴定。【结果】AFP1靶点1和靶点2的编辑效率分别为66.67%和75.00%。所有突变株系中,突变类型仅有插入和缺失突变,90%突变株系的突变长度为小片段突变(<5 bp)。获得了6种无转基因成分的afp1纯合突变体。正常条件下,afp1突变体株高和结实率降低,有效分蘖增加,穗长显著升高,单株产量在-4.06%和11.75%之间变化。和野生型相比,afp1突变体的ABA敏感性和叶片水分散失率降低,耐干旱、热和渗透胁迫能力提高。【结论】编辑AFP1基因可提高水稻多种非生物胁迫抗性。

萝卜抗真菌蛋白1(Rs-AFP1)在大肠杆菌中的融合表达及其对大丽轮枝菌抑制活性的研究(英文)

利用聚合酶链式反应 (PCR)获得了萝卜 (RaphanussativusL .)抗真菌蛋白 1(Rs_AFP1)基因编码区核苷酸序列。将整个阅读框架片段和去除了N_端信号肽序列的片段分别装入原核表达载体pET_32b(+)中 ,在大肠杆菌中表达 ,发现带有信号肽的Rs_AFP1不能在大肠杆菌中表达 ,而当这一序列去除后 ,表达出约 2 7kD的Rs_AFP1的融合蛋白。用凝血酶处理融合蛋白以去除N_端His.tag的部分序列 ,然后用处理后的融合蛋白进行了抑制真菌生长的实验。结果表明 ,在加入 0 .3g/L的Rs_AFP1的融合蛋白的培养液中 ,大丽轮枝菌 (VerticilliumdahliaeKleb .)的生长受到抑制 ,分别比加入对照细菌蛋白和PBS下降 5 7.5 %和 6 9.8% ;孢子的萌发也受到抑制。显然 ,细菌表达的融合蛋白对大丽轮枝菌的生长有抑制作用。

肝脏卵圆细胞定向分化在二甲基亚硝胺大鼠肝硬化消减过程中的意义

[目的]探讨肝脏卵圆细胞在肝硬化形成及修复过程中的动态变化及其意义。[方法]二甲基亚硝胺10 mg.kg-1剂量大鼠腹腔注射,每周连续3 d,1次/d,共4周,制备肝硬化模型;于二甲基亚硝胺腹腔注射后3 d、2周、4周及终止造模刺激后2周、4周分别随机取造模大鼠6只、正常大鼠3只进行动态观察。透射电镜下观察肝脏卵圆细胞超微结构,免疫组织化学和免疫印迹方法检测肝组织α-SMA及Thy1.1;双重荧光免疫共聚焦激光扫描显微镜技术观测肝组织AFP与Thy1.1及CK19与Thy1.1共定位。[结果]模型动态变化:大鼠经DMN造模4周时形成典型肝硬化病理改变;终止造模刺激2周后,肝组织学变化明显减轻。AFP、CK19与Thy1.1共定位细胞:造模3 d明显表达;随着造模时间延长表达量逐渐增加;造模停止后2周达到峰值,显著高于造模4周(P<0.05);而造模停止后4周显著少于造模停止后2周时的水平(P<0.01),但仍高于造模2周。[结论]肝脏卵圆细胞增殖与分化在DMN所致大鼠肝硬化的形成与消减过程中、尤其对促进硬化肝脏的组织重构具有重要作用。