巢式RT-PCR定量检测肝癌、癌旁组织及正常肝组织内AFPmRNA

目的 :探讨肝癌、癌旁组织及正常肝组织内AFPmRNA的表达含量。方法 :应用巢式RT PCR定量检测肝癌、癌旁组织及正常肝组织内AFPmRNA。结果 :17例AFP(+ )癌旁组织内AFPmRNA表达强阳性( ) ,其癌旁组织内AFPmRNA表达呈中度阳性 ( )。 15例AFP(- )肝癌、癌旁组织及正常肝组织内AFPmR NA表达弱阳性 (+ )。结论 :AFP(+ )肝癌组织过量表达AFPmRNA基因 ,正常肝组织仅微弱表达AFPmRNA。

HBV所致肝癌前病变的中医辨证分型与AFP-L3及AFPmRNA相关性研究

我国总体人群乙肝病毒（HBV）流行率为57．63％，HBV携带者（ASC）约1亿人，慢性乙型肝炎患者（CHB）约3千万例，CHB和乙肝后肝硬化患者中每年约有1．17％和2．05％发展成肝癌，每年死于肝细胞癌（HCC）约15万人。全球60％～80％的HCC由HBV引起，HBV持续感染比非感染者的HCC发生率高100倍以上。。鉴于肝癌的危害性，

外周血中AFPmRNA检测对原发性肝癌高危人群监测的意义

目的 :探讨外周血中AFPmRNA检测对原发性肝癌 (以下简称肝癌 )高危人群监测的价值。材料和方法 :采取AFP升高 2次以上的慢性肝病患者 6 3例、12例肝癌、2 1例肝癌术后患者静脉血 5ml,用RT -PCR进行AFPmRNA检测。结果 :AFP定量与AFPmRNA阳性率无显著关系 (P >0 .0 5 ) ,AFP进行升高组、持续升高组和波动组间AFPmRNA阳性率无显著关系(6 4.71%、40 %、40 .5 8% ,P >0 .0 5 ) ,AFP进行升高组、持续升高组发癌率为 5 8.82 % (10 / 17) ,30 % (3/ 10 )显著高于AFP波动组 4.35 % (3/ 6 9,P <0 .0 1)。AFPmRNA阳性检出肝癌 41.6 7% (5 / 12 ) ,高危结节 6 0 % (6 / 10 )、肝癌术后复发 10 0 % (4/ 4)。AFP大于 2 0 0 μg/L能检出 5 8.82 % (10 / 17)肝癌和 2 5 % (1/ 4)的术后复发灶 ,AFP大于 2 0 0 μg/L、AFPmRNA阳性结合影像检测能检出 91.6 7% (11/ 12 )的肝癌和 10 0 % (4/ 4)的术后复发灶。结论AFP进行和持续升高是肝癌发生的高危人群 ,AFPmR NA阳性也是肝癌发生的高危人群 ,AFPmRNA能检测部分AFP阴性的肝癌患者 ,因此 ,AFP。

联合检测外周血中AFPmRNA和AFP在原发性肝癌诊断中的临床意义

目的采用巢式RT-PCR法检测外周血中AFPmRNA情况。探讨外周血中AFPmRNA和AFP在原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)联合诊断及在高危人群普查中的作用,为HCC诊断及普查提供一种新的敏感、特异、简单快捷的方法。方法采用巢式RT-PCR法对25例HCC患者,慢性肝炎、急性肝炎、肝硬化、健康人各30例以及肝外恶性肿瘤10例的外周血AFPmRNA情况进行检测。同时检测各组相应的AFP浓度和HCC患者血清HBsAg表达情况。结果(1)外周血AFPmRNA检查:25例HCC患者中19例存在AFPmRNA,阳性率为76%,其余各组均未检出AFPmRNA,特异性100%;(2)血清AFP水平检测:25例HCC患者中有16例存在AFP阳性,阳性率64%,其余各组有5例检出AFP阳性。(3)HCC血清HBsAg检测:HBsAg阳性的16例HCC患者中15例检出AFPmRNA,而9例HBsAg阴性的HCC患者中仅4例检测出AFPmRNA。HBsAg与外周血中AFPmRNA阳性检出率有相关性。结论外周血AFPmR-NA联合血清AFP检测,可以有效提高HCC诊断,为联合检测诊断HCC提供了有效的途径;可以用于HCC高危人群的普查及筛选。

脱氧核酶对肝癌细胞AFPmRNA表达的影响

目的本研究针对AFPmRNA(甲胎蛋白mRNA)设计脱氧核酶,观察其切割AFPmRNA的有效性,探索脱氧核酶在肝癌基因治疗的可能性。方法体外转录AFPmRNA底物,设计并合成DZ(脱氧核酶)、DZs(硫代修饰脱氧核酶,序列同DZ,但两侧各有两个脱氧核苷酸进行了硫代修饰)、ASO(反义寡聚脱氧核苷酸)、无关DZ对照。体外切割AF-PmRNA;经转染试剂将脱氧核酶转染入肝癌细胞HepG2,利用RT-PCR法检测AFPmRNA水平的变化;免疫细胞化学及图像分析系统检测AFP蛋白质表达情况;MTT法初步估计肝癌细胞的生长效应。结果DZ与DZs在体外均可切割AFPmRNA底物;经转染DZ、DZs的细胞均下降AFPmRNA的水平,而且DZs的作用更强;经转染DZ与DZs的细胞均下降AFP的表达,ASO也略下降AFP的表达;DZ、DZs有抑制细胞生长的作用。结论本实验设计的脱氧核酶能在细胞外有效切割AFPmRNA;在细胞内也能切割AFPmRNA、抑制AFP的表达、抑制肝癌细胞的生长,为肝癌的基因治疗提供可能性。

甲胎蛋白信使核糖核酸(AFPmRNA)的检测方法及其临床意义

目的 探讨AFPmRNA对诊断原发性肝癌的意义 ,并评估原发性肝癌的临床分期 ,预测转移倾向、预后和复发以及治疗。方法 建立并改进巢式逆转录多聚酶链反应 (nestedRT -PCR)检测外周静脉血肝癌细胞。结果 nestedRT -PCR在 1ml血中含有≥ 5个肝癌细胞时即可检测到AFPmRNA。 2 2例原发性肝癌中 18例血液标本检测到AFPmRNA ,而对照组中均未检测到AFPmRNA。AFPmRNA的检出率与肝癌分期 (TNM )、血清AFP浓度、肝内转移、门静脉癌栓、肿瘤大小及远处转移有明显联系 (P <0 .0 1)。结论 nestedRT -PCR是一个稳定而又敏感的检测方法 ,AFPmRNA可作为定性诊断原发性肝癌的血液学指标 ,也可作为肝癌细胞转移的标志 ,并可判断肝癌临床分期、转移倾向。

人外周血AFPmRNA的定性检测和原发性肝细胞癌转移的关系

目的 为探讨人外周血ＡＦＰｍ ＲＮＡ 与肝癌转移之间的关系。方法 采用分子生物学反转录—巢式ＰＣＲ 技术，检测了３８ 例不同肝病患者和９ 例非肝病患者外周血中的ＡＦＰｍ ＲＮＡ。结果 其检出结果分别为：对照组０／９ ；肝硬化组２／１１ ；肝癌未发生转移组２／７ ；局部转移组６／１２ ；远处转移组７／８ 。其中良性组与恶性组之间、肝癌无远处转移与远处转移组之间有显著性差异（ Ｐ＜ ０ ．０１ 及 Ｐ＜ ０ ．０５） 。另外，肝癌患者中，直径＞ ５ ｃｍ 组外周血中ＡＦＰｍ ＲＮＡ 阳性率明显高于直径＜ ５ｃｍ 组（ Ｐ＜ ０ ．０５） 。肝癌患者血清ＡＦＰ＞ ４００ｎｇ／ｍｌ 组外周血中ＡＦＰｍ ＲＮＡ 阳性率具有明显高于ＡＦＰ＜ ４００ｎｇ／ｍｌ组（Ｐ＜ ０ ．０１） 。肝功能分级与外周血中ＡＦＰｍ ＲＮＡ 阳性率无关。结论 人外周血中ＡＦＰｍ ＲＮＡ 的检测具有重要的临床指导意义，可用于预测肝癌远处转移。

围手术期检测肝细胞癌病人外周血AFPmRNA和MAGE-1mRNA的临床意义

近年来,巢式复合酶聚合酶链反应（RT-PCR）技术被广泛用于实质器官恶性肿瘤微转移及复发的检测（[1]）。AFP mRNA和MAGE-1 mRNA是肝细胞癌患者常用的检测指标（[2]）。本文分析这两种mRNA在肝细胞癌诊断方面的临床价值,探讨围手术期联合检测对于监测术后肿瘤复发的意义,现报道如下。1资料和方法1.1一般资料病例组（A组）：

AFPmRNA和CD44V6mRNA在肝癌患者外周血中检测的临床意义

目的:建立检出原发性肝癌(PHC)患者外周血中微转移的方法,并探讨其临床意义。方法:采集PHC患者50例,40例肝良性疾病患者(10例肝血管瘤,10例肝囊肿,10例肝硬化,10例慢性肝炎),20例肝转移肿瘤患者(直肠癌肝转移10例,胃癌肝转移10例),30例健康志愿者的外周血。用RT-PCR方法检测外周血中AFP mRNA和CD44v6 mRNA的表达。结果:50例PHC患者外周血中AFP mRNA和CD44v6 mRNA检出率分别为50%(25/50)和58%(29/50)。74%(37/50)的患者至少一种标志物阳性。AFP mRNA在肝炎肝硬化患者外周血中的检出率15%(3/20),转移性肝癌、肝血管瘤、肝囊肿患者及健康献血员中均未检出。CD44v6 mRNA在转移性肝癌患者外周血中的检出率45%(9/20),肝炎肝硬化、肝血管瘤、肝囊肿患者及健康献血员中均未检出。PHC患者外周血中AFPm-RNA检出率与血清AFP水平,肿瘤大小,门静脉癌栓,肝内转移无相关性(P>0.05)。与肝外转移密切相关(P<0.05)。CD44v6 mRNA检出率与肿瘤大小,门静脉癌栓,肝内外转移密切相关(P<0.05),而与血清AFP水平无相关性(P>0.05)。结论:在PHC患者外周血中联合检测AFPmRNA和CD44v6 mRNA的表达,有助于提高微转移检测的灵敏度和特异性,CD44v6mRNA预测肝癌转移、复发的意义优于AFP mRNA。

RT-PCR法检测外周血中AFPmRNA的研究

AFPmRNA是成人肝细胞癌变后AFP基因转录产物．RT-PCR法检测外周血中AFPmRNA对原发性肝癌的早期诊断、鉴别诊断及预测转移均有重要意义．探讨了AFPmRNA的基因特点、RT-PCR检测方法及AFPmRNA的临床检测意义．

人肝癌、癌旁组织中AFPmRNA的差异性分析

本研究用RT-PCR方法检测52例原发性肝癌(HCC)病人手术标本中AFPmRNA转录水平,结果发现,AFPmRNA在肝癌组织中阳性率为76.9%;有慢性肝病(尤其是中重度肝硬化)的病人癌组织中AFP表达的阳性率可达88.8%,癌旁为69.4%;无慢性肝病(肝硬化)的病人中,其癌组织中AFPmRNA阳性率为50%,癌旁组织中无AFP表达.由此可见,AFP蛋白是由肝癌细胞特异表达的,或由正发生突变的肝细胞表达的.另外,本文还研究了AFRmRNA与肿瘤大小、包膜、肝内转移以及与血清AFP水平的关系.

外周血AFPmRNA检测的研究进展

AFP是肝癌的血清标志物 ,它被广泛应用于肝癌的诊断。现阐述AFP基因的特点及外周血AFPmRNA检测的临床应用。

平调饮对原发性肝癌患者AFPmRNA、MAGE-1mRNA表达的影响

目的研究平调饮对原发性肝癌患者甲胎蛋白(AFP)mRNA、黑色素瘤抗原-1(MAGE-1)mRNA表达的影响,探讨平调饮对原发性肝癌的抑癌基质。方法原发性肝癌患者60例,随机分为治疗组和对照组,分别给予平调饮和华蟾素注射液,治疗2个疗程,采用RT-PCR技术检测原发性肝癌患者治疗前后外周血AFPmRNA、MAGE-1mRNA的表达,并取30例健康志愿者血样作为参考对照,结果用SPSS13.0软件统计。结果平调饮使原发性肝癌患者的AFPmRNA、MAGE-1mRNA表达明显降低,2组治疗前后比较差异均有统计学意义(P<0.01),治疗后治疗组与对照组MAGE-1mRNA表达(灰度比)分别为0.07±0.01、0.13±0.02,组间比较差异有统计学意义(P<0.01),治疗组作用优于对照组。结论平调饮能够明显降低原发性肝癌患者AFPmRNA、MAGE-1mRNA表达,对MAGE-1基因表达的降低作用优于对照组,说明抑制MAGE-1基因表达可能是平调饮抗肝癌机制的靶点之一。

Nested RT-PCR in detection of blood AFPmRNA in animal model of human hepatocellular carcinoma

OBJECTIVES: To detect blood AFPmRNA in the nude mice bearing with human hepatocellular carcinoma (HCC) by using nested reverse transcriptase polymerase chain reaction (nested RT-PCR), and assess its significance in HCC distant metastasis. METHOD: We detected 20 blood samples from the nude mice bearing with human HCC by nested RT-PCR to find out AFPmRNA. RESULT: AFPmRNA was detected in 6 blood samples from the nude mice hearing with human HCC (30. 0%), in which 4 mice developed distant metastasis. CONCLUSION: AFPmRNA may be used as an efficient and sensitive marker to detect blood spread of HCC cells. It can predict the occurrence of HCC distant metastasis.

射频热毁损治疗肝癌前后血液中AFPmRNA变化及意义

目的探讨肝癌射频热毁损(RFA)治疗前后血液中AFP-mRNA变化及其意义。方法应用RT-PCR检测技术对术前术后48小时,72小时,1周及术后2周肝癌患者周围静脉血液中AFPmRNA,并观察变化。结果183例术前血液中AFPmRNA阴性的肝癌患者中有62例术后72小时转为阳性,但术后1周时复转阴性;而129例术前血液中AFPmRNA阳性的肝癌患者112例术后2w转为阴性;其中17例术后2周仍为阳性,术后证实有病灶残留。结论射频热毁损治疗肝癌可引起血液AFPmRNA一过性升高;血液AFPmRNA可成为判断RFA术后复发或残留的客观性指标之一。

EXPRESSION OF BLOOD AFPmRNA IN THE PATIENTS WITH DISTANT METASTASIS OF HUMAN HEPATOCELLULAR CARCINOMA (HCC)

Objective: To study blood AFPmRNA expression in patients with distant metastasis of human hepatocellular carcinoma (HCC). Methods: Using nested reverse transcriptase polymerase chain reaction (nested RT-PCR) to detect 93 blood samples from human HCC cases. Results: AFPmRNA was detected in 21 blood samples from 72 human HCC (40.28%) without distant metastasis, all HCC patients with distant metastasis were detected with AFPmRNA (100%). Conclusions: AFPmRNA can be used as a distant metastasis marker of HCC.

肝癌切除手术前后周围静脉血液中AFPmRNA的变化及其意义

目的探讨肝癌切除手术前后周围静脉血液中AFPmRNA的变化及其意义。方法应用巢式RT-PCR检测术后48小时、72小时及术后1周肝癌患者周围静脉血液中AFPmRNA,并观察变化。结果28例术前血液中AFPmRNA阴性的肝癌患者中有4例术后48小时转为阳性(14.30%),但术后1周时复转阴性;而16例术前血液中AFPmRNA阳性的肝癌患者中有4例(25.00%)术后72小时转为阴性。结论手术操作可引起肿瘤细胞播散人血循环,但它不增加手术危险性。术后短期适量应用γ-干扰素或白介素2(IL-2)是必要的。