蛋白AG检测多种动物弓形虫抗体AG-ELISA的效果评价

利用建立的可检测多种动物弓形虫抗体的AG-ELISA方法,检测了人工感染及自然感染4种动物血清中的弓形虫抗体。对人工感染猪血清的检测结果表明,AG-ELISA法可于感染后第10天全部检出阳性,早于MAT方法的第14天,其检出率、敏感性及准确度等指标亦优于MAT法。在对临床上304份动物血清检测中,AG-ELISA法对猪、羊血清的阳性检出率高于MAT法,而对犬、猫血清的检出率则与MAT法相同。Kappa一致性试验表明,AG-ELISA法与MAT法符合良好。上述结果证实AG-ELISA法可用于多种动物弓形虫抗体的检测。

牛病毒性腹泻病毒抗原捕获ELISA检测方法的标准化研究

用纯化牛病毒性腹泻病毒免疫蛋鸡制备出的卵黄抗体作为包被抗体,采用自制的单抗为一抗,建立牛病毒性腹泻病毒抗原捕获ELISA方法。通过试验确定,抗牛病毒性腹泻病毒卵黄抗体最佳包被浓度为1:50;McAb最适稀释浓度为1:10,HRP-羊抗鼠IgG工作浓度为1:800。通过引入牛病毒性腹泻病毒质控血清进行质控检验,该方法所得检测结果均在质量控制范围内,达到预定标准化要求。标准化的抗原捕获ELISA方法具有特异、灵敏、可靠、方便、快捷等特点,可广泛应用推广,为我国牛病毒性腹泻病毒监测提供了行之有效的技术手段。

血清MG7-Ag对胃癌诊断的应用价值

目的测定血清MG7-Ag以探讨其对胃癌诊断的临床价值。方法采用ELISA法定量检测54例胃癌患者,51例胃癌前病变患者,94例胃炎患者及46例胃癌术病人的血清MG7-Ag,并对其结果进行比较。结果胃癌患者血清中MG7-Ag的阳性表达率为83.33%,胃癌前病变组阳性表达率为47.05%,胃炎病变组为4.25%。经统计学处理,胃癌组与其它组比较有非常显著性差异(P<0.01)。46例胃癌患者术后血清MG7-Ag阳性率比术前明显下降。胃癌患者血清MG7-Ag的敏感性比CEA,CA19-9高,且有统计学意义(P<0.05)。结论血清MG7-Ag对胃癌诊断有特异性,可作为胃癌早期诊断的有效指标,也可作为监测病情、判断疗效之用。

酶联免疫吸附分析方法(ELISA)检测血浆中糖基化终极产物

目的 建立竞争性ELISA方法 ,测定血液中的高级糖化终产物的含量。方法 对兔及牛血浆白蛋白进行体外葡萄糖修饰 ,得到糖基化终极产物抗原 ;用兔此抗原免疫新西兰大白兔得到与其特异结合的抗体。结果 1 经过TNBS方法及聚丙稀凝胶电泳鉴定修饰抗原 ,发现修饰前后蛋白携带自由氨基数至少 35 %已被葡萄糖修饰且分子量也发生变化。 2 免疫获得抗糖基化终极产物的多克隆抗体 ,并鉴定了此多抗只抗葡萄糖修饰的蛋白而不抗载体蛋白。3 用葡萄糖修饰的蛋白及其多克隆抗体制成ELISA试剂盒 ,批间、批内变异系数分别为 5 8%和 9 8% ,灵敏度为 0 5u/ml。结论 得到检测血浆糖基化终极产物的ELISA试剂盒。

HBVpreS_1-Ag、HBVpreS_2-Ag、HBV-DNA、HBVM的相关性分析及其意义

探讨HBV感染者血清中HBVM、HBV -DNA、HBVpreS1-Ag及HBVpreS2 -Ag的相关性及其意义。采用ELISA法检测HBVM、HBVpreS1抗原和HBVpreS2 抗原 ,FQ -PCR定量检测HBV -DNA。HBeAg与HBVpreS1抗原、HBVpreS2 抗原、HBV -DNA在HBV感染者血清中具有良好的平行关系 ,其阴 /阳性符合率均高于 73 1%。HBV -DNA、HBVpreS1抗原、HBVpreS2 抗原之间均无显著性差异 (P >0 0 5 )。HBeAg、HBV -DNA、HBVpreS1抗原、HBVpreS2抗原之间高度相关。HBVpreS1抗原和HBVpreS2 抗原较HBeAg敏感。应用HBVpreS1抗原、HBVpreS2 抗原、HBV -DNA及HBVM同时进行联合检测 ,对HBV感染的早期诊断 ,了解HBV复制、转归 ,更确切地掌握病情的发生。

皮肤切创组织IL-2、TNF-α时间相关性表达的ELISA分析

目的了解细胞因子在创伤及修复过程中的表达的含量变化与损伤时间的关系。方法用免疫酶联吸附方法(ELISA)检测不同损伤时间(生前伤0.5～168h)实验动物皮肤切创组织中IL-2和TNF-a的表达水平。结果IL-2、TNF-a在造创后0.5h即升高,并分别在造创后3h和1h到达峰值,在造创后48h均有反弹,在72h和168h持续升高。结论上述细胞因子在创口修复中的蛋白表达水平呈时间相关性特点。

应用免疫印迹技术和ELISA对猪囊尾蚴抗原对比分析

应用SDS-PAGE、ELIB,ELISA等方法,对猪囊尾蚴的水溶性抗原(Ag-W)和尿素溶性抗原(Ag-u)进行对比分析。发现Ag-w和Ag-u分别有14条和9条主带被囊尾蚴病病人血清所识别;有10条和4条主带被包虫病病人血清所识别;有8条和4条主带被华支睾吸虫病患者血清所识别。ELISA检测显示、血清1:400稀释时,囊尾蚴病病人血清(60例)。Ag-w和Ag-u的阳性率分别为86.6％和96.9％,华支睾吸虫病病人血清(24例)和正常人血清均为阴性。包虫病人血清(30例)分别为46.6％和16.6％。表明两种抗原虽有与其它寄生虫产生交叉反应的成份,但Ag-u明显少于Ag-w,Ag-u的敏感性和特异性明显优于Ag-w。用Ag-u代替Ag-w进行囊尾蚴病的免疫学诊断,可提高诊断效价。

简捷-ELISA筛检学龄儿童血吸虫病人的应用价值研究

用简捷－ＥＬＩＳＡ在洞庭湖血吸虫病重度流行区（居民感染率＞１５％）１个乡的３所学校，对学龄儿童血吸虫病进行了筛检，并与Ｋａｔｏ－Ｋａｔｚ法和尼龙绢集卵孵化法作了比较。结果表明，简捷－ＥＬＩＳＡ的阳性检出率明显高于两种寄生虫学检查方法。经济学分析表明，简捷－ＥＬＩＳＡ的单位成本，成本与效果之比均低于此两种寄生虫学检查方法，显示了较高的成本效率。用简捷－ＥＬＩＳＡ筛检学龄儿童血吸虫病具有高效、经济、快速的特点。

肝特异性F抗原ELISA检测法的建立及其临床应用研究

应用两株抗人肝特异性Ｆ抗原的单克隆抗体建立测定血清Ｆ抗原的夹心ＥＬＩＳＡ法。结果显示本法标准曲线工作范围（５ － ２００）μｇ／ｍｌ，平均回收率９５ ．６ ％ 。正常对照、良性肝病、急性肝炎、肝硬化、肝癌患者Ｆ抗原含量（μｇ／ｍｌ） 分别为０ ．２０ ±０．０７ 、０ ．４５ ±０ ．１４ 、３５ ．５０ ±８ ．４０ 、２２ ．１６±７ ．１２ 、４１．５０ ±１４ ．１７ ，其中急性肝炎及肝癌血清Ｆ抗原水平显著升高。该法可为肝损伤，尤其是肝癌提供早期辅助诊断。

血清MG7-Ag测定法在卵巢癌患者诊断中的应用

目的:观察血清MG7-Ag测定在卵巢癌患者诊断中的临床价值。方法:选择卵巢恶性肿瘤组患者54例,卵巢良性肿瘤组患者67例,采用ELISA法检测全部患者血清中MG7-Ag的水平,并与同期进行体检的50例正常妇女(设为正常体检组)血清中MG7-Ag水平进行对照,对其结果进行比较。结果:卵巢恶性肿瘤组患者的MG7-Ag水平及阳性检出率均高于良性肿瘤组及正常妇女组,组间比较差异显著(P<0.05);而卵巢良性肿瘤组患者与正常妇女组相比,MG7-Ag的平均含量及阳性率均无显著性差异(P>0.05);黏液性肿瘤的MG7-Ag阳性表达率为57.14%(24/42),显著高于浆液性肿瘤31.03%(9/29)。结论:血清MG7-Ag测定对卵巢癌患者的诊断有特异性,可作为卵巢癌早期诊断的有效指标。

标准品血清在ELISA室内质量控制及结果判定中的运用

目的探讨低浓度定标法在酶联免疫吸附试验(ELISA)室内质量控制中的运用,按照统计学原理分析血清浓度界值法判定临界值附近结果的稳定性。方法以乙型肝炎表面抗原(HBs Ag)的测定为例,运用不同厂家、不同批次试剂盒同时对系列标准血清进行测定,依据相应标准品的浓度(x)与吸光度(y)建立直线回归方程(y=ax+b)。根据所测质控品吸光度及相应线性回归方程,可得定标后的质控品浓度。以质控品浓度均值为靶值,建立Levey-Jennings质控图。采用两厂家不同批次ELISA试剂盒对经微粒子酶免疫分析法(MEIA)定量的108份低浓度HBs Ag阳性血清进行检测,分别用cut-off界值法和血清浓度界值法判断结果,并通过统计学分析进行稳定性评价。结果使用浓度定标的质控方法结果变异小,不受不同厂家及批号更换的影响。血清浓度界值法解决了目前厂家设定临界值(cutoff)不合理的问题,结果稳定,可靠。结论采用低浓度定标法的ELISA室内质控方法明显优于以吸光度/临界值(OD/CO)为指标的ELISA室内质控方法。血清浓度界值法客观、科学,可更好的判断临界值附近样本的结果,减少漏检。

血清SCC-Ag、VEGF联合检测在宫颈癌诊断中的意义

目的联合检测子宫颈癌患者血清中血清鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)和抗血管内皮生长因子(VEGF)水平,探讨其临床意义及两者的相关性。方法通过酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测宫颈癌30例,宫颈上皮内瘤变(CIN)患者30例和正常人30名血清中SCC-Ag和VEGF的水平。结果宫颈癌组患者血清SCC-Ag和VEGF水平及阳性率均高于上皮内瘤变组及正常组,上皮内瘤变组高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论联合检测宫颈癌患者血清中SCC-Ag和VEGF水平有助于判断患者的病情及预后,在临床上必将有着广阔的应用前景。

应用Pre-S1 Ag诊断HBV感染的可行性研究

目的通过HBV Pre-S1抗原检测,结合乙肝HBsAg、HBeAg与HBV-DNA检测进行比较分析,研究Pre-S1抗原作为诊断乙肝患者的血清标志物的可能性。方法用ELISA检测的HBsAg、HBeAg和HBV Pre-S1抗原,采用荧光定量PCR方法检测HBV核酸。结果相对于其他模式,"大三阳"的HBV Pre-S1抗原的检出率较高(89.32%),乙肝病毒DNA的copies也较高;在90例在HBsAg(-)、HBeAg(-)患者中,检出3例HBV Pre-S1抗原(3.33%);恢复期的3091例患者中也检查出4例Pre-S1 Ag(+)。结论HBV Pre-S1抗原可作为一种HBV感染血清标志物,HBsAg(-)并不能作为无HBV感染的指标,Pre-S1检测对于乙肝患者的诊断具有重大的价值。

人凝血因子Ⅷ抗原含量ELISA检测方法的建立、验证及应用

目的双抗体夹心法测定标本中人凝血因子Ⅷ(human coagulation factor Ⅷ, FⅧ)抗原水平并进行验证和应用。方法建立检测人FⅧ抗原(FⅧ∶Ag)含量的双抗体夹心ELISA法;用人FⅧ/VWF标准血浆(NIBSC 07/316)标定内控标准品(S.A.R.P);根据方法学验证的要求对此方法进行线性、准确度、精密度、样品稳定性的研究分析。将验证后的该方法用于FⅧ纯化工艺的监控及产品质量分析。结果以NIBSC 07/316标定分装冻存的S.A.R.P的FⅧ∶Ag为1.12 Ag/mL,标准曲线的线性范围为(0.003—0.112)Ag/mL,各浓度回收率在97.62%—102.19%,CV<5%,R^2≥0.99;不同浓度样品检测结果的批内准确度在90.70%—95.23%,批间准确度在91.50%—94.20%;批内精密度CV值在1.69%—4.98%,批间精密度CV值在2.63%—4.83%。样品添加实验的回收率在87.50%—89.50%,特异性回收率在94.64%—101.78%。具有生物学活性的样品应-80℃冻存,复融1次后立即检测。武汉血制公司FⅧ纯化工艺中聚乙二醇4000(PEG 4000)沉淀和离子交换层析去除了大约60%的FⅧ抗原,工艺稳定性较好,生产规模可线性放大,不同来源产品FⅧ∶C/FⅧ∶Ag的比值接近。结论本方法具有良好的线性、准确度和精密度。用该方法进行FⅧ抗原含量检测可作为FⅧ纯化工艺内部质量控制的一个指标。

阳泉市中小学生HBs Ag检测结果分析

目的 :了解阳泉市中小学生HBsAg携带情况 ,为制定防治措施提供依据。 方法 :采集被监测者血用酶联免疫吸附实验做HBsAg检测 ,结果用Excel统计分析。 结果 :监测 1986名学生HBsAg阳性者 4 3名 ,总阳性率为 2 .16 % ;其中 ,私立学校阳性率为 2 .31% ,公办学校阳性率 2 .0 5 % ;男生阳性率为 2 .76 % ,女生阳性率 1.39% ;私立学校小学、初中、高中生HBsAg阳性率分别为 1.4 4%、2 .2 6 %、2 .87% ,有随年龄增长而增加的特点。结论 :阳泉市中小学生HBsAg阳性率明显低于全国总体水平 ,但HBsAg防治工作不能放松 ,要加强对住校生的管理工作 ,对易感者普遍接种乙肝疫苗。

HBsAg阳性者前S1抗原和HBVDNA检测的相关性探讨

目的探讨HBsAg阳性者血清中HBV DNA及乙型肝炎病毒前S1抗原(PreS1Ag)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)的关系及其临床应用价值。方法对368例临床血清标本采用ELISA方法检测HBeAg和PreS1Ag,荧光定量PCR法检测HBV DNA。结果 HBeAg阳性组PreS1Ag阳性率为87.2%,HBV DNA阳性率为91.0%;HBeAg阴性组PreS1Ag阳性率为54.7%,HBV DNA阳性率为55.7%。患者血清PreS1Ag与HBV DNA结果无明显差异(P>0.05)。结论 PreS1Ag与HBV DNA符合率较高,比HBeAg更能反映病毒复制情况,可作为一项新的病毒复制指标。

山西省育龄妇女TORCH感染调查分析

[目的]了解山西省育龄妇女TORCH感染率,为预防TORCH感染和做好优生优育工作提供依据。[方法]采用间接ELISA方法对山西省4个县区(中阳县、榆次城区、长治县、阳泉郊区)1 797名育龄妇女进行TORCH感染的血清学检测。[结果]TORCH感染检测结果中,风疹病毒、单纯疱疹病毒I型、单纯疱疹病毒II型、弓形体和巨细胞病毒五种病原体IgG抗体阳性率分别为91.2%、27.1%、26.0%、16.4%和33.6%。TORCH感染率在育龄妇女各年龄组间无统计学差异,在不同地区间差异有统计学意义。[结论]山西省育龄妇女风疹病毒感染率较高,有强的免疫屏障,而巨细胞和单纯疱疹病毒感染率较低;TORCH感染有明显的地区差异。提示应及早进行育龄妇女TORCH筛查,以做好优生优育工作,提高出生人口素质。

成都地区儿童血清抗弓首线虫幼虫抗体的检测

用犬弓首线虫幼虫排泄分泌抗原(TES-Ag)ELISA检测了成都地区学龄前儿童血清抗弓首线虫(Toxocara spp)幼虫特异性抗体。阳性率分别为:家隹成都市区儿童2.1％(4/186);成都市郊县农村儿童17.7％(59/333);近期有人蛔虫感染的成都市区儿童2.6％(1/38)。从有弓首线虫幼虫感染临床表现的病儿血清检出抗弓首线虫幼虫抗体阳性者10人。ELISA抑制试验结果表明TES-Ag对抗弓首线虫幼虫抗体有明显抑制作用,表明用此TES-Ag作ELISA检测受检者血清抗弓首线虫幼虫抗体具有较强的特异性。积极开展弓首线虫幼虫致病、诊断、流行和防治等研究,对保护儿童健康有重要意义。

广西巴马长寿地区壮族老人幽门螺杆菌感染状况

目的:探讨我区长寿之乡巴马县农村壮族老人幽门螺杆菌(Hp)的感染状况。方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测171例老人血清抗Hp-IgG及CagA-HpIgG。结果:171例老人Hp感染率为53.8%;CagA-HpIgG阳性率为14.6%;90岁以上年龄组Hp感染率显著高于60～69及70～79岁两组(P<0.05);Hp感染与年龄显著相关(P<0.05);女性感染率高于男性(P<0.05);饮用河水者感染率高于饮用山泉水者(P<0.0001)。结论:Hp在壮族老年人群中有较高的感染率,感染率随年龄的增大而增加;以长寿老人感染率最高;

重组鸡白细胞介素2的诱导表达与生物学活性测定

将去除信号肽的鸡IL-2基因编码框克隆到原核表达载体pBAD/HisB,实现了重组鸡IL-2(rchIL-2)蛋白在大肠杆菌中的高效表达。SDS-PAGE分析显示,表达蛋白的分子量约为18kD。用rchIL-2为抗原制备了单克隆抗体和多克隆抗体,建立了检测rchIL-2含量的抗原捕获ELISA,探讨了天然chIL-2蛋白的体外表达动力学。非变性条件下纯化的rchIL-2(0.4ng)对ConA活化的鸡T淋巴细胞具有明显的增殖活性,而对鸭及鹅的T淋巴细胞无增殖活性。抗chIL-2多克隆抗体可完全中和rchIL-2和天然chIL-2蛋白的生物学活性,而单克隆抗体无中和rchIL-2和天然chIL-2蛋白生物学活性的功能。这些研究结果证实,大肠杆菌表达的rchIL-2及其多克隆抗体拥有生物学功能,而获得的单克隆抗体不具有chIL-2的中和特性。