三种Tyrphostin对重组人蛋白激酶CK2全酶的影响

目的 :观察三种 Tyrphostins AG110 9、AG5 5 5和 AG1394对重组人蛋白激酶 CK2全酶的直接作用。方法 :利用基因工程克隆、表达和纯化获得重组人蛋白激酶 CK2α和β亚基 ,在体外等摩尔数混合构成有最大生物活性的重组 CK2全酶 ,在不同条件下测定 CK2的活性。 CK2活性通过测定转移到 CK2底物上的 [γ-3 2 P] ATP或 [γ-3 2 P] GTP的 [3 2 P]放射活度来检测。结果 :重组人 CK2是一种 Ca2 +、c AMP和 c GMP等第二信使非依赖性蛋白激酶 ,与天然 CK2的性质一致。 AG110 9对重组人CK2全酶具有较强的抑制作用 ,IC50 为 9.7μmol/L ,抑制作用稍大于已知 CK2抑制剂 DRB和 A3。 AG5 5 5对重组人 CK2全酶具有一定的抑制作用 ,而 AG1394则对人 CK2全酶基本无影响。 AG110 9对重组人 CK2的动力学研究表明 :它与 GTP呈现以竞争性为主的混合型抑制作用 ,与酪蛋白呈非竞争性抑制作用。结论 :AG110 9不仅是酪氨酸蛋白激酶的抑制剂 ,而且是一种十分有效的蛋白激酶 CK2的抑制剂。重组人蛋白激酶 CK2可作为一种较为简便筛选和开发有效的 CK2抑制剂的分子靶点。