可溶性AGE受体对AGE诱导牛主动脉内皮细胞NF-κB激活的抑制作用

目的 :研究可溶性糖化终末产物 (AGE)受体 (sRAGE)对AGE诱导牛主动脉内皮细胞 (BAECs)NF κB激活的抑制作用。方法 :分别用AGE修饰白蛋白和羧甲基赖氨酸 (CML)修饰白蛋白培养BAECs ,凝胶迁移率改变实验检测加入sRAGE或RAGE反义寡核苷酸前后NF κB的DNA结合活性 ,并定量分析蛋白条带的密度积分。结果 :AGE修饰白蛋白和CML修饰白蛋白能通过结合BAECs表面RAGE诱导NF κB的激活 ,sRAGE和RAGE反义寡核苷酸均能有效的抑制AGE对NF κB的激活 ,sRAGE几乎能完全抑制AGE对NF κB的激活 ,而RAGE反义寡核苷酸抑制NF κB激活的作用是有限的。结论 :RAGE在AGE诱导BAECsNF κB的激活中起关键作用 。

比较肝素和低分子量肝素对人单核细胞表面AGE受体的影响

用放射性受体 配体结合分析法 ,观察肝素和低分子量肝素对正常人和慢性肾功能衰竭血液透析患者单核细胞表面晚期糖基化终产物 (AGE)受体的影响。结果表明 ,肝素对正常人和慢性肾功能衰竭血液透析患者单核细胞表面的AGE受体均有封闭作用 ,且这种封闭作用具有剂量依赖性 ;低分子量肝素对AGE受体无封闭作用。提示肝素可以干扰AGE的清除和降解 。

蛋白质的糖基化及其在肾脏病变中的作用

晚期糖基化终产物 (AGE)是蛋白质的氨基与糖的醛基发生非酶性糖基化反应的终产物 ,在慢性肾功能衰竭和糖尿病肾病并发症的发生和发展中起重要作用。

糖基化终末产物及相关药物研究进展

糖基化终末产物(AGEs)是蛋白质和脂类经非酶糖基化后生成的含多种结构分子的混合物,阻断AGEs的致病途径有望成为改善糖尿病慢性并发症,缓解衰老,治疗老年痴呆等的新途径。该文主要综述了体内AGEs的来源,病理生理学机制,及AGEs生成抑制剂,断裂剂及AGEs受体阻断剂的研究进展。

晚期糖基化终末产物的临床病理机制及抑制剂的研究进展

在糖尿病患者体内以及衰老进程中晚期糖基化终末产物 (AGEs)是不断积累的 ,其可以通过直接或间接的方式对机体产生病理作用。本文概述了AGEs对各种组织或细胞包括心血管组织、肾脏、大脑和骨组织等的间接病理作用和机制、介导该作用的AGEs受体或其他结合蛋白 。

晚期糖基化终产物与糖尿病周围神经病变

晚期糖基化终产物(AGEs)是蛋白质的氨基与糖的醛基发生非酶糖基化反应的终产物,在糖尿病周围神经病变的发生发展中起重要的作用。本文主要综述了AGEs的产生,受体与糖尿病周围神经病变,以及相关治疗的研究进展。

非酶糖化、晚期糖基化终产物与阿尔茨海默病

许多证据显示非酶糖化及其晚期产物-晚期糖基化终产物(AGEs)在阿尔茨海默病(AD)发病中的重要作用。AGEs促进蛋白交联;糖化β-淀粉样蛋白与AGEs受体相互作用激活小胶质和星形胶质细胞,促进氧化应激、分泌诱导型一氧化氮合酶和前炎症细胞因子,并损伤神经元,促进AD的发生发展。AGEs及其受体在AD中的可能作用机制为开发预防、治疗AD的新药提供理论基础。

大黄糖络丸调控AGEs/RAGE/IKK/NF-κB通路改善糖尿病肾病小鼠肾脏炎症损伤的机制

目的:探讨大黄糖络丸对db/db小鼠早期糖尿病肾病(DKD)的保护作用。方法:取8只db/m小鼠作为空白组,取40只雄性db/db小鼠通过尾静脉取血,检测空腹血糖(FBG),FBG≥16.7 mmol·L^(-1),尿量增多,且持续出现白蛋白尿提示造模成功。造模成功后随机分为模型组、达格列净组(1.5 mg·kg^(-1)·d^(-1))、大黄糖络丸高、中、低剂量组(3.6、1.8、0.9 g·kg^(-1)·d^(-1)),每组8只。各给药组均采用灌胃给药,空白组和模型组每日给予等体积蒸馏水灌胃,连续给药10周,观察小鼠生存状态并测定小鼠体质量、FBG及肾功能相关指标;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测肾组织中炎症相关指标;苏木素-伊红(HE)、马松(Masson)染色、电镜观察各组肾脏组织病理学改变;免疫荧光观察晚期糖基化终末产物(AGEs)、晚期糖基化终末产物受体(RAGE)蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠肾组织中AGEs、RAGE、核转录因子-κB(NF-κB)抑制蛋白激酶(IKK)、NF-κB mRNA和蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组小鼠体质量、FBG、血清肌酐(SCr)、尿微量白蛋白/尿肌酐(ACR)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)均明显增高(P<0.05);肾组织中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)明显增加(P<0.05);肾脏病理染色、电镜显示肾组织排列疏松,出现间隙,结构紊乱,系膜增生,纤维化明显;Real-time PCR结果显示,肾组织中RAGE、IKK、NF-κB mRNA表达明显增加(P<0.05);免疫荧光结果显示,肾组织中AGEs、RAGE蛋白表达明显增加(P<0.05);Western blot结果显示,肾组织中AGEs、RAGE、IKK、NF-κB蛋白表达明显增加(P<0.05)。给药干预后,与模型组比较,达格列净组和大黄糖络丸高剂量组小鼠体质量、FBG、SCr、ACR明显降低(P<0.05);达格列净组和大黄糖络丸高剂量组小鼠血清中TC明显降低(P<0.05);大黄糖络丸高剂量组小鼠血清中TG明显降低(P<0.05);各给药组肾组织中ICAM-1、IL-6和TNF-α表达明显降低(P<0.05)。肾脏病理染色、电镜显示各给药组小鼠肾脏损伤减轻,胶原纤维沉积减轻,系膜增生减少;Real-time PCR结果显示达格列净组和大黄糖络丸高、中剂量组肾组织中RAGE、IKK、NF-κB mRNA表达明显降低(P<0.05);免疫荧光结果显示,达格列净组和大黄糖络丸高、中剂量组肾组织中AGEs、RAGE蛋白表达明显降低(P<0.05);Western blot结果显示,达格列净组和大黄糖络丸高、中剂量组肾组织中AGEs、RAGE、IKK、NF-κB蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论:大黄糖络丸能够改善DKD小鼠肾脏病理结构和肾脏炎症损伤,其作用机制可能与抑制AGEs/RAGE/IKK/NF-κB通路有关。

中药复方益糖康颗粒通过AGE-RAGE轴介导SIRT1调控PI3K/Akt/FoxO1信号通路促进足细胞自噬的机制

目的:通过观察中药复方益糖康(YTK)颗粒对晚期糖基化终末产物(AGE)-晚期糖基化终产物受体(RAGE)轴介导沉默信息调节因子1(SIRT1)调控磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/叉头框蛋白O1(FoxO1)信号通路改善糖尿病肾脏疾病(DKD)大鼠足细胞自噬的影响,探讨YTK治疗DKD的可能作用机制。方法:选取8周龄SPF级健康雄性Wistar大鼠96只,使用随机数字表法分为空白组、模型组、YTK高、中、低剂量组(40、20、10 g·kg^(-1))、西药组(氯沙坦片,20 mg·kg^(-1)),采用高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素建立DKD大鼠模型。造模成功后,各组按照相应比例剂量连续给药8周后取材。严格按照试剂盒所示方法检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)的水平;苏木素-伊红(HE)染色观察肾脏组织病理形态学变化;免疫组化法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)、肌间质蛋白(Desmin)、裂孔膜蛋白(Nephrin)的平均积分吸光度值;蛋白免疫印迹法(Western blot)分析DKD大鼠肾组织中滑膜PI3K、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、Akt、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、RAGE、SIRT1、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、FoxO1的蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组SOD、GSH-Px、CAT表达水平明显降低,MDA显著升高(P<0.01);大鼠呈现严重肾损现象;足细胞标志蛋白α-SMA、FN、Desmin阳性表达显著增多,Nephrin、足突蛋白质(Podocin)显著下降(P<0.01);肾组织中PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、RAGE、Caspase-3蛋白表达水平显著升高,SIRT1、FoxO1蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。与模型组比较,YTK各剂量组大鼠血清中SOD、GSH-Px、CAT水平显著升高,MDA显著下降(P<0.01);肾损程度均发生了不同程度减轻;足细胞标志蛋白α-SMA、FN、Desmin平均积分吸光度值均明显降低,Nephrin、Podocin显著升高(P<0.01);肾组织中PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、RAGE、Caspase-3表达水平显著降低,SIRT1、FoxO1表达水平显著提升(P<0.01)。中药组表现出明显的量效趋势。结论:YTK可能通过AGE-RAGE轴介导SIRT1调控PI3K/Akt/FoxO1信号通路,改善足细胞自噬,从而减轻肾脏病理损害,减少蛋白尿,保护肾功能,达到延缓DKD进展的目的。且中药组具有量效趋势。

基于AGEs-RAGE/NF-κB信号通路探讨生肌玉红膏促进糖尿病足溃疡模型大鼠创面组织愈合的作用机制

目的基于晚期糖基化终产物(AGEs)-晚期糖基化终产物受体(RAGE)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路探讨生肌玉红膏促进糖尿病足溃疡模型大鼠创面组织愈合的潜在作用机制。方法将60只SPF级雄性大鼠采用随机数字表法分为空白组、模型组、爱可欣组、生肌玉红膏组4组,每组15只。除空白组外,其余各组采用20%蔗糖水及高脂饲料喂养、链脲佐菌素腹腔注射联合足底损伤法建立大鼠糖尿病足溃疡模型,并分别给予相应处理。比较致创后第3,7,15天各组大鼠体质量、随机血糖、湿热毒盛证候评分、创面愈合率,以及创面皮肤组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)、AGEs、RAGE含量;观察并比较致创后第3,7,15天各组大鼠创面皮肤组织病理学改变;采用Western blot法检测各组致创后第3,15天核转录因子-κB(NF-κB)p65蛋白表达水平。结果与空白组比较,致创后第3,7,15天模型组体质量明显下降,随机血糖,湿热毒盛证候评分,创面皮肤组织TNF-α、IL-6、CRP、AGEs、RAGE含量,致创后第7,15天创面愈合率均明显升高(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,致创后第7,15天爱可欣组及生肌玉红膏组湿热毒盛证候评分,创面愈合率,创面皮肤组织TNF-α、IL-6、CRP含量均明显降低,致创后第7,15天生肌玉红膏组创面皮肤组织AGEs含量均明显降低,致创后第3,7,15天生肌玉红膏组创面皮肤组织RAGE含量均明显降低(P<0.05或P<0.01);爱可欣组及生肌玉红膏组可不同程度地改善模型组大鼠创面皮肤结构紊乱,炎症细胞浸润,肌腱胶原纤维排列疏松、断裂等情况;与空白组比较,致创后第3,15天模型组创面皮肤组织NF-κB p65蛋白表达水平均明显升高(P<0.01);与模型组比较,致创后第3,15天生肌玉红膏组创面皮肤组织NF-κB p65蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。结论生肌玉红膏可通过抑制AGEs/RAGE/NF-κB信号通路促进糖尿病足溃疡模型大鼠创面修复愈合。

益糖康通过抑制AGE/RAGE信号通路改善骨骼肌细胞凋亡的机制

目的:研究益糖康通过抑制糖基化终末产物(AGE)/糖基化终末产物受体(RAGE)信号通路纠正骨骼肌细胞过度凋亡进而改善胰岛素抵抗(IR)的作用机制。方法:①体外实验,制备益糖康含药血清,将C2C12细胞设置空白组、模型组、益糖康含药血清高、中、低剂量(40、20、10 g·kg^(-1))组、RAGE抑制剂组,除空白组外,用棕榈酸诱导C2C12 IR模型细胞,然后分别采取相应的干预方式后检测各组细胞的活性及葡萄糖消耗量水平,用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测重要凋亡蛋白[B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、p53、胱天蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-9]的mRNA及蛋白表达水平。②体内实验,将96只符合研究标准的Wistar大鼠设置空白组、对照组、益糖康高、中、低剂量组(40、20、10 g·kg^(-1))、吡格列酮(1.35 mg·kg^(-1))组,运用高糖高脂糖尿病模型诱导饲料联合小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射建立胰岛素抵抗动物模型并运用高胰岛素-正常血糖钳夹(HEC)实验验证,模型判定成功后对各组大鼠按要求进行灌胃给药干预。用原位末端标记法(TUNEL)检测各组大鼠骨骼肌组织阳性凋亡细胞个数,Real-time PCR及Western blot技术检测Bcl-2、Bax、p53、Caspase-3、Caspase-9的mRNA及蛋白表达水平。结果:①体外实验,与空白组比较,模型组C2C12细胞凋亡率显著升高,细胞活性、葡萄糖消耗量均显著降低(P<0.01)。与模型组比较,益糖康含药血清各剂量组和RAGE抑制剂组C2C12细胞凋亡率显著降低,细胞活性、葡萄糖消耗量均显著升高(P<0.01);与模型组比较,益糖康含药血清各剂量组和RAGE抑制剂组C2C12细胞凋亡率显著降低,细胞活性、葡萄糖消耗量均显著升高(P<0.01)。与空白组比较,模型组C2C12细胞Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平显著降低,Bax、p53、Caspase-3、Caspase-9 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,益糖康含药血清各剂量组和RAGE抑制剂组C2C12细胞Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.01),Bax、p53、Caspase-3、Caspase-9 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。②体内实验,与空白组比较,模型组大鼠骨骼肌组织阳性凋亡细胞个数显著升高(P<0.01)。与模型组比较,益糖康高、中、低剂量组,吡格列酮组大鼠骨骼肌组织阳性凋亡细胞个数显著降低(P<0.01)。与空白组比较,模型组大鼠骨骼肌组织Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平显著降低,Bax、p53、Caspase-3、Caspase-9 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,益糖康各剂量组和吡格列酮组大鼠骨骼肌组织Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.01),Bax、p53、Caspase-3、Caspase-9 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。益糖康中剂量具有RAGE抑制剂类似的功效,且疗效等同于盐酸吡格列酮。结论:益糖康可能通过抑AGE/RAGE信号通路抑制骨骼肌细胞凋亡。

黄芪桂枝五物汤对糖尿病周围神经病变大鼠模型AGEs/RAGE/NF-κB信号通路的影响

目的:研究黄芪桂枝五物汤对糖尿病周围神经病变大鼠模型晚期糖基化终产物(AGEs)/晚期糖基化终产物受体(RAGE)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响,探讨黄芪桂枝五物汤减轻糖尿病周围神经病变的作用机制。方法:以高脂饮食加腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导法,制作糖尿病周围神经病变大鼠模型。造模成功后,按照随机数字表法分成模型组、黄芪桂枝五物汤高、中、低剂量组、甲钴胺组,共5组,另设正常组,自第5周开始黄芪桂枝五物汤干预,采用黄芪桂枝五物汤高、中、低剂量组(19.40,4.85,2.43 g·kg^-1·d^-1)连续灌胃12周;甲钴胺组采用甲钴胺0.25 mg·kg^-1·d^-1灌胃。实验结束后,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测糖尿病周围神经病变大鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测坐骨神经组织中RAGE,NF-κB p65 mRNA含量;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测坐骨神经组织中RAGE,NF-κB,磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白的表达变化。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清IL-1β,TNF-α含量,坐骨神经组织RAGE,NF-κB p65 mRNA含量,RAGE,NF-κB p65及p-NF-κB p65蛋白表达显著增加(P<0.01),p-NF-κB p65/NF-κB p65升高,p-NF-κB p65蛋白表达显著升高(P<0.01)。经黄芪桂枝五物汤干预后,与模型组比较,各给药组血清IL-1β,TNF-α含量,RAGE,NF-κB p65 mRNA含量,RAGE,NF-κB p65及p-NF-κB p65蛋白表达量均显著降低(P<0.01),黄芪桂枝五物汤高剂量组p-NF-κB p65/NF-κB p65显著降低(P<0.01),且呈剂量相关性,随黄芪桂枝五物剂量增加而效果明显。结论:黄芪桂枝五物汤可减轻糖尿病周围神经病变,其机制可能与阻断AGEs/RAGE/NF-κB信号通路中组织细胞表面RAGE的表达、抑制NF-κB激活及其引发TNF-α触发的氧化应激和过度炎症反应,从而避免细胞受损和功能紊乱有关。

晚期糖基化终末产物与糖尿病神经病变

非酶糖基化反应是糖尿病神经病变的重要发病机制之一。持久高血糖使体内晚期糖基化终末产物（AGEs）不断积累，沉积于神经组织的AGEs不仅修饰了细胞骨架蛋白、髓鞘蛋白及基质蛋白等，从而直接损害神经结构与功能，而且还通过增强氧化应激反应，或与神经元表面AGEs受体（RAGE）作用进一步导致神经功能紊乱。AGEs还可引起神经微循环障碍。单用或联用AGEs抑制剂、抗氧化剂、可溶性RAGE及抗RAGE IgG在防止、缓解、逆转糖尿病神经病变中显示出巨大的潜力。

体外重建皮肤模型（老化模型）中特定的晚期糖化终末产物诱导的生物学效应

人皮肤老化的特征包括弹性纤维减少、不溶性胶原蛋白蓄积以及创伤修复能力受损等。而对于皮肤曝光部位，促炎性改变还能导致富含胶原蛋白基质的重构，进一步加重上述变化。该基质重构过程可通过两种方式实现。第一种涉及晚期糖化终末产物（AGE）的产生（由葡萄糖和羰基醛经过化学反应生成），可导致细胞外基质发生蛋白质交联、固化及失去弹性等损害。第二种涉及富含AGE的真皮基质与真皮细胞之间的相互作用，通过AGE受体（RAGE）和其他受体途径引起细胞活化，导致生长因子和细胞因子的释放，从而使细胞外基质发生深度重构。