痰瘀同治法对糖尿病大鼠心肌微血管病变AGEs/RAGE轴及氧化应激的影响

目的观察痰瘀同治对高糖诱导心肌微血管内皮细胞损伤的保护作用并从AGEs/RAGE轴探讨其作用机制。方法利用酶消化法从大鼠心脏中分离出原代心肌微血管内皮细胞(CMECs),经免疫荧光法鉴定后,培养传代备用。在不同时间段采用不同浓度的葡萄糖对大鼠CMECs进行诱导干预,MTT检测方法发现葡萄糖浓度在33 mmol/L且干预48 h为最佳造模条件;予不同浓度的含药血清,同上法检测得10%含药血清干预48 h为最佳干预方法。将造模成功的CMECs分成5组:模型组(MC)、化痰组(RP)、化瘀组(DBS)、痰瘀同治组(RPDBS)、ALT-711组,予以10%含药血清和ALT-711细胞干预制剂进行干预;另设一组空白对照组(NC)。采用ELISA法检测各组内皮细胞AGEs含量;免疫荧光法、Western blot法和RT-qPCR法检测各组内皮细胞RAGE蛋白及基因表达水平;细胞色素c还原法检测各组内皮细胞还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶活性水平;二氢乙锭荧光探针法检测各组内皮细胞活性氧自由基(ROS)活性水平。结果MC组较NC组,细胞内晚期糖基化终末产物(AGEs)含量、RAGE蛋白及基因表达水平、NADPH氧化酶活性水平和ROS活性水平均升高(P<0.01)。与MC组比较,各治疗组的上述指标均降低(P<0.01)。在降低AGEs含量、RAGE蛋白及基因表达水平和NADPH氧化酶活性水平上,RPDBS组较RP组与DBS组显著下降(P<0.01,P<0.05);在降低ROS水平上,RPDBS组与DBS组差异无统计学意义(P>0.05),较RP组显著下降(P<0.01)。结论痰瘀同治法可能通过抑制AGEs/RAGE轴及氧化应激对高糖损伤的CMECs起到保护作用,从而防治糖尿病心肌微血管病变,且痰瘀同治法优于单独化痰法和单独化瘀法。

桂枝附子汤调控AGEs/RAGE/NF-κB信号通路对类风湿关节炎大鼠的影响

目的研究桂枝附子汤对类风湿关节炎(RA)大鼠的干预作用及对晚期糖基化终末产物(AGEs)/晚期糖基化终末产物受体(RAGE)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法将50只大鼠随机分为空白组、模型组、桂枝附子汤组(6.1 g/kg)、RAGE抑制剂组(0.5 mg/kg)、桂枝附子汤+RAGE抑制剂组(6.1 g/kg+0.5 mg/kg),每组10只。用牛Ⅱ型胶原与不完全弗氏佐剂(IFA)混合乳化诱导建立RA大鼠模型,造模后连续灌胃给药30 d。给药结束后,测定大鼠关节炎指数和关节肿胀度,HE染色观察大鼠踝关节软骨及滑膜组织病理变化,ELISA法检测大鼠血清白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,Western blot法检测大鼠踝关节软骨组织RAGE、p-NF-κB p65蛋白表达,免疫组化(IHC)法观察大鼠踝关节软骨组织AGE和软骨及滑膜组织TNF-α、白细胞介素-1β(IL-1β)阳性细胞表达。结果与模型组比较,桂枝附子汤组、抑制剂组和桂枝附子汤+抑制剂组均能有效降低RA大鼠关节炎指数、关节肿胀度、血清炎性因子IL-6、TNF-α水平、软骨组织AGE、RAGE、p-NF-κB p65蛋白表达和软骨及滑膜组织TNF-α、IL-1β蛋白表达(P<0.01),并能减轻软骨破坏,改善滑膜的炎性细胞浸润。结论桂枝附子汤对RA大鼠软骨和滑膜具有保护作用,该作用与抑制AGEs/RAGE/NF-κB信号通路活化,进而下调下游炎性因子表达有关。

基于AGEs/RAGE/NF-κB通路探讨补肝散改善D-半乳糖致衰大鼠学习记忆障碍机制研究

目的探讨复方补肝散(BGSD)干预D-半乳糖致衰大鼠学习记忆能力的潜在作用机制。方法40只大鼠被随机分为对照组、模型组、BGSD[14.06 g/(kg·d)]组和吡拉西坦[0.4 g/(kg·d)]组,每组10只。腹腔注射D-半乳糖[400 mg/(kg·d)]建立衰老大鼠模型。每周记录大鼠体质量、摄水量、摄食量和抓力;八臂迷宫和跳台实验评估大鼠学习记忆能力;称取肝脏、胸腺、脾脏和脑组织重量以计算相应脏器指数;检测血清丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;苏木精-伊红(HE)染色观察海马病理学改变;酶联免疫吸附法(ELISA)检测海马肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6及IL-1β水平;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测海马晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、核因子-κB(NF-κB)、TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA表达;蛋白免疫印迹法(WB)检测海马晚期糖基化终末产物(AGEs)、RAGE和NF-κB蛋白表达。结果补肝散可显著增加D-半乳糖致衰大鼠的摄食量、摄水量、体质量、抓力及脏器指数(P<0.05),减少八臂迷宫中工作记忆错误(WME)、参考记忆错误(RME)以及总记忆错误次数(TE)(P<0.05),降低跳台实验中错误次数并延长跳台潜伏期(P<0.05)。此外,补肝散可减少海马神经元损伤,提高血清SOD活性,降低MDA含量及下调促炎因子TNF-α、IL-6和IL-1β水平(P<0.05)。进一步研究结果显示,补肝散可显著降低海马AGEs、RAGE和NF-κB表达(P<0.05)。结论补肝散可通过抑制AGEs/RAGE/NF-κB信号通路调节D-半乳糖致衰大鼠神经炎症损伤从而改善学习记忆能力。

中药通过干预RAGE信号轴治疗类风湿关节炎的研究进展

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)发病机制复杂,晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end product,RAGE)及其配体在RA的发生发展中扮演着重要角色,也是近年来研究的热点。中药复方治疗RA具有明显的优势,研究表明多种中药复方及其活性成分可以通过干预RAGE信号轴的活性,以减轻RAGE及其配体对关节的损伤,减轻滑膜炎症,抑制血管翳的形成等,从而改善RA的临床症状,延缓疾病进展。应用中药复方及其活性成分干预自身免疫性疾病中的RAGE信号通路,提供了一种新的、安全、有效的治疗方法,将具有广阔的发展前景。

sRAGE通过AGEs-RAGE信号轴抑制小鼠SGCs的凋亡

目的探讨可溶性RAGE(soluble form of receptor for advanced glycation-end products,sRAGE)对晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)-晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycation-end products,RAGE)介导的C57BL/6J小鼠SGCs(spiral ganglion cells,SGCs)凋亡及RAGE受体表达的影响。方法不同浓度的sRAGE作用于培养5天后的螺旋神经节细胞和加入AGEs-BSA作用2 h后的SGCs细胞,采用免疫荧光法鉴定SGCs,通过流式细胞术检测细胞凋亡,以及RT-PCR检测RAGE的mRNA的表达,琼脂糖凝胶电泳对扩增结果进行确认,同时采用western blot技术检测凋亡相关蛋白Bax、BCL-2及caspase-3的表达情况。结果原代培养获得足够数量以及活性良好的SGCs,并用小鼠抗神经微丝蛋白抗体染色以鉴定。单纯向SGCs加入不同浓度的sRAGE,细胞凋亡无明显增加,RAGE受体的表达无明显增多;而不同浓度sRAGE加入AGEs作用的SGCs后,可见SGCs的凋亡随sRAGE浓度增加而减少,呈浓度相关性,RAGE受体的mRNA表达也随之减弱。凋亡相关蛋白中,BCL-2表达升高,Bax及cleaved caspase-3表达降低。结论 s RAGE可以减少AGEs诱导的SGCs的凋亡,并减少膜上RAGE受体的表达,可能与s RAGE竞争性结合AGEs而不产生相应生物学效应有关。

当归四逆汤对大鼠DPN抑制作用及AGEs/RAGE的调节

目的观察当归四逆汤对糖尿病大鼠坐骨神经传导速度的影响及糖基化终末产物(AGEs)和AGEs受体(RAGE)的调节作用。方法采用链脲佐菌素(STZ)复制糖尿病大鼠模型,模型鼠随机分为中药组、西药组、模型组,另设健康鼠为正常组。分别干预8 w后,检测糖尿病大鼠坐骨神经传导速度、坐骨神经病理形态、AGEs含量、RAGE mRNA表达水平。结果与模型组相比,中药能够保护坐骨神经结构,显著降低AGEs含量、下调RAGE mRNA水平(P<0. 05)。结论当归四逆汤能够通过下调AGEs/RAGE含量提高坐骨神经传导速度、保护坐骨神经结构,进而抑制大鼠糖尿病周围神经病变(DPN)的发生发展。

固本健脑法对老年健忘大鼠海马组织中AGEs/RAGE信号通路的影响

目的:比较固本健脑法、补脾健脑法、补肾健脑法对老年健忘大鼠海马组织中AGEs/RAGE信号通路的影响。方法:腹腔注射D-半乳糖及Na NO2建立老年健忘大鼠模型,分别灌胃固本健脑方、归脾丸、六味地黄丸和石杉碱甲;并设空白组和模型组,灌以生理盐水。给药结束后,取大鼠海马组织,采用免疫组化法检测AGEs的含量,Western blot检测RAGE、NF-κB p65的表达,ELISA检测IL-1β、TNF-α的含量。结果:与空白组比较,模型组、西药组、补脾组、补肾组、固本组上述指标的表达均上调;与模型组比较,西药组、补脾组、补肾组、固本组上述指标的表达均下调;与固本组比较,西药组、补脾组、补肾组上述指标的表达下调;补脾组、补肾组、西药组组间比较,差异无统计学意义。结论:固本健脑法、补脾健脑法、补肾健脑法均能在一定程度上改善老年健忘大鼠的记忆功能,但固本健脑法作用最佳,固本健脑法改善记忆功能的分子机制与AGEs/RAGE信号通路密切相关。

糖尿病大鼠心肌纤维化与心肌AGEs/RAGE水平的变化

目的通过构建Ⅱ型糖尿病大鼠模型,研究该模型心肌纤维化和心肌AGEs/RAGE水平的变化情况。方法雄性SD大鼠高脂饲料饲喂6周后,过夜空腹12 h,腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ,30 mg/kg)。注射3、7 d后检测大鼠随机血糖浓度,两次随机血糖≥16.7 mmol/L为Ⅱ型糖尿病大鼠建模成功。在建模成功后第4、8和12周,检测大鼠血FBG、insulin和左心室AGEs、Hyp含量及Masson染色、RAGE表达的变化。结果造模成功后第4、8和12周,糖尿病对照组(4D,8D,12D)血FBG水平均较同周次正常对照组(4C,8C,12C)显著升高,体重显著下降;造模成功后第12周时,糖尿病对照组(12D)大鼠Insulin显著高于同周次正常对照组(12C)和4周时糖尿病对照组(4D);从造模成功后第8周开始,糖尿病对照组(8D,12D)心肌Hyp、CVF、AGEs和RAGE与正常对照组(8C,12C)相比均显著升高;2型糖尿病大鼠心肌AGEs/RAGE水平与CVF呈显著正相关。结论高脂饮食饲喂加腹腔注射小剂量STZ,能够成功复制Ⅱ型糖尿病大鼠模型。随着病程的延长,心肌纤维化和心肌AGEs含量、RAGE蛋白表达均呈逐渐上升趋势,且Ⅱ型糖尿病大鼠心肌AGEs/RAGE水平与心肌纤维化存在有正相关关系。

基于TGF-β1/Smad3通路和AGEs/RAGE分子研究丹蛭降糖胶囊干预糖尿病大鼠心肌纤维化的作用

目的从转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad3信号通路和晚期糖基化终末产物(AGEs)/AGEs受体(RAGE)分子水平研究丹蛭降糖胶囊干预糖尿病大鼠心肌纤维化的作用及其机制。方法采用高糖高脂饮食联合腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)方法建立2型糖尿病大鼠模型,饲养6周后将造模成功30只大鼠随机分为二甲双胍组、丹蛭降糖组、模型组各10只,另取10只健康大鼠作为空白组。二甲双胍组给予二甲双胍150 mg/kg灌胃,丹蛭降糖组给予丹蛭降糖胶囊540 mg/kg灌胃,模型组和空白组给予等容量蒸馏水灌胃。连续灌胃8周后,麻醉状态下取材。采用HE染色法观察心肌组织病理学变化;用ELISA法检测左心室AGEs、结缔组织生长因子(CTGF)和RAGE的表达水平;Western blot法和实时荧光定量PCR法检测心肌组织中TGF-β1及其信号蛋白Smad3蛋白和基因表达水平。结果与空白组比较,模型组大鼠光镜下心肌纤维走行较为紊乱,部分溶解、断裂,胞核位置不一,细胞间界限不清,间质出现纤维细胞增生。与模型组比较,二甲双胍组和丹蛭降糖组光镜下心肌细胞的病变明显减轻,左心室AGEs、RAGE、CTGF表达水平及TGF-β1、Smad3、p-Smad3蛋白和基因表达水平均明显降低(P均<0.05),且丹蛭降糖组各指标水平均明显低于二甲双胍组(P均<0.05)。结论丹蛭降糖胶囊可能通过抑制心肌TGF-β1/Smad3信号通路和AGEs/RAGE分子表达,延缓糖尿病大鼠心肌纤维化,发挥心肌保护作用。

AGEs/AGE-RAGE与糖尿病血管并发症

糖尿病血管并发症是糖尿病患者死亡的主要原因之一，许多研究旨在探索其病因以及发生发展的机制。近年来，关于晚期糖基化终末产物（advanced glycation end products，AGEs）及其受体（receptor for advanced glycation end products，RAGE）系统对糖尿病血管损伤影响的研究较为深入，笔者选取其中具有重要意义的几个方面做简要说明，醚AGEs／AGE—RAGE系统如何影响糖尿病血管并发症的转归，探讨目前针对AGEs／AGE—RAGE治疗上的一些最新进展.

中药抑制AGEs-RAGE系统治疗糖尿病血管并发症的研究进展

中药应用于糖尿病患者血管并发症的临床治疗具有明显效果。高血糖所形成的AGEs(高级糖基化的终产物)与RAGE(其受体)所介导的信号路径于糖尿病的血管并发症其发生与发展中都起着重要的作用。

黄蜀葵花中5种黄酮类化合物对肠道L细胞AGEs/RAGE/p38MAPK/NF-κB信号通路的调节作用

目的探讨黄蜀葵花中5种黄酮类化合物对肠道L细胞AGEs/RAGE/p38MAPK/NF-κB信号通路的调节作用。方法200 mg·L^(-1)AGEs作用肠道于L细胞株GLUTag细胞,Western blot检测细胞中RAGE、p22^(Phox)、p47^(Phox)、p53、Bax蛋白的相对表达量,ELISA法检测TNF-α、IL-1、IL-6、caspase-3、caspase-9的含量。实验分为7组:空白对照组(NG)、模型组(AGEs)、槲皮素组(QT)、异槲皮苷组(IQT)、金丝桃苷组(HY)、槲皮素-3'-O-葡萄糖苷组(QG)、棉皮素-8-O-葡萄糖醛酸苷组(GG)。NG细胞培养于DMEM低糖培养基中;AGEs细胞培养于含200 mg·L^(-1)AGEs的DMEM低糖培养基中;给药组细胞分别培养于含50μmol·L^(-1)各黄酮单体及含200 mg·L^(-1)AGEs的DMEM低糖培养基中。各组细胞经药物干预24 h后,Western blot检测细胞中RAGE、p22^(Phox)、p47^(Phox)、p53、Bax、p-p38MAPK、NF-κB蛋白的相对表达量,ELISA法检测TNF-α、IL-1、IL-6的含量及caspase-3、caspase-9的活性。结果模型组细胞中RAGE、p22^(Phox)、p47^(Phox)、Bax、caspase-3、caspase-9、Phospho-p38MAPK、NF-κB相对表达量及细胞上清液中TNF-α、IL-1、IL-6的分泌量明显上调(P<0.01),p53相对表达量明显下调(P<0.01)。50μmol·L^(-1)槲皮素、异槲皮苷、金丝桃苷、槲皮素-3'-O-葡萄糖苷、棉皮素-8-O-葡萄糖醛酸苷分别给药后,各蛋白的相对表达量及炎症因子的分泌量接近正常组。结论黄属葵花中5种黄酮类化合物能明显抑制肠道L细胞AGEs/RAGE/p38MAPK/NF-κB信号通路。

中药抑制AGEs-RAGE系统治疗糖尿病血管并发症的研究进展

中药在临床治疗糖尿病血管并发症上具有显著的疗效。由高血糖形成的高级糖基化终产物(AGEs)及其受体(RAGE)介导的信号途径在糖尿病血管并发症的发生、发展中起重要作用,该文综述了近年来中药复方及单体在干预AGEs-RAGE系统治疗糖尿病血管并发症的研究进展。

基于RAGE/NF-κB/mTOR信号通路探讨滋阴活血解毒方对AGEs诱导VEC损伤的干预作用

目的观察滋阴活血解毒方对糖基化终末产物(advanced glycosylation end products,AGEs)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)损伤的影响及RAGE/NF-κB/mTOR信号通路的变化,探讨该方对AGEs诱导静脉内皮细胞(vein endothelial cell,VEC)损伤的保护作用。方法培养的HUVEC细胞以100 mg/ml的AGEs诱导损伤,随机分为7个组,除空白组外,其中3组分别加入RAGE抑制剂FPS-ZM1、NF-κB抑制剂PDTC和mTOR抑制剂雷帕霉素(RAP),余下3组加入各种抑制剂后加入50 mg/m L滋阴活血解毒方浓缩药液。以western-blot法检测RAGE和mTOR的表达,以免疫组化方法检测NF-κB核转移状况。结果细胞添加AGEs后细胞内出现异常增殖,细胞数量明显增多,多数细胞变形皱缩,胞膜轮廓模糊,细胞内出现粗糙样颗粒变化;抑制剂组及抑制剂加中药组都表现出不同程度的逆转这种损伤的作用,特别是抑制剂加中药组,见梭形正常细胞较多,圆缩形细胞减少。中药加抑制剂组RAGE表达量比单纯抑制剂组显著降低(P<0.01);中药加抑制剂组mTOR表达量比单纯抑制剂组显著降低(P<0.01);中药加抑制剂NF-κB的核转移阳性检测率比单纯抑制剂组显著降低(P<0.01)。结论滋阴活血解毒方能降低AGEs对VEC的损伤,降低RAGE、NF-κ、mTOR的表达。

梓醇、马钱苷及其配伍干预AGEs-RAGE通路对糖尿病睾丸病变的保护作用研究

目的研究梓醇、马钱苷及其配伍对糖尿病睾丸病变的保护作用及机制。方法采用KK-Ay自发性糖尿病小鼠模型和糖基化终末产物诱导小鼠精母细胞株(GC-2)损伤模型,分组干预,HE染色检测睾丸的病理改变;试剂盒法检测睾丸特异性标志酶、SOD活性和ATP、ROS水平;AO/EB染色法检测GC-2的凋亡;Western blot法测定AGEs-RAGE通路相关蛋白的表达。结果梓醇、马钱苷及其配伍均可改善糖尿病小鼠睾丸病理损伤,降低血糖,升高睾丸特异性标志酶活力,降低AGEs诱导的GC-2细胞凋亡率,改善氧化应激,配伍组改善效果较优,同时梓醇、马钱苷及其配伍可下调模型组睾丸组织、GC-2细胞的RAGE及其下游蛋白Nox4的表达、抑制p38MAPK磷酸化。结论梓醇、马钱苷及其配伍对糖尿病睾丸病变有明显的保护作用,配伍组药效优于单用组,其作用机制与干预AGEs-RAGE通路相关。

小檗碱对糖尿病认知功能障碍模型小鼠AGEs/RAGE/NF-κB信号通路的影响

目的:观察小檗碱对糖尿病认知功能障碍模型小鼠AGEs/RAGE/NF-κB信号通路的作用,并探讨小檗碱缓解糖尿病认知功能障碍的相关机制。方法:将实验小鼠随机分为空白组,模型组,小檗碱低、中、高剂量组,除空白组外,其他各组制备糖尿病认知功能障碍模型。造模成功后小檗碱低、中、高剂量组分别给予不同剂量的小檗碱,空白组和模型组给予等体积的生理盐水。Morris水迷宫检测小鼠的学习记忆能力,尼氏染色观察小鼠海马病理形态变化,ELISA检测小鼠血清中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)的表达,Real time-PCR和Western bolt检测海马中晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)、晚期糖蛋白终末产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)、核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)的基因和蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组小鼠上平台潜伏期、游泳总路程和第1次抵原平台时间明显增加(P<0.01),穿越平台次数、目标象限时间则明显减少(P<0.01)。与模型组相比,小檗碱高剂量组小鼠上平台潜伏期、游泳总路程和第1次抵原平台时间均有不同程度减少(P<0.05),穿越平台次数、目标象限时间则有不同程度增加(P<0.05)。空白组小鼠海马CA3区神经元排列均匀整齐,细胞核饱满,尼氏体染色均匀,大小均一。模型组小鼠海马CA3区神经元减少,尼氏体固缩、深染。小檗碱高剂量组神经元恢复较好,排列较整齐,尼氏体固缩、深染明显好转。与空白组相比,模型组小鼠血清中TNF-α、IL-1β表达水平及海马中AGEs、RAGE、NF-κB的mRNA和蛋白表达水平均升高(P<0.05),与模型组相比,小檗碱高剂量组小鼠血清中TNF-α、IL-1β水平及海马中AGEs、RAGE、NF-κB的mRNA和蛋白表达均下降(P<0.05)。结论:小檗碱能缓解糖尿病认知功能障碍模型小鼠的记忆缺陷,其机制可能与其下调AGEs/RAGE/NF-κB信号通路有关。

TianmaGouteng yin attenuates ischemic stroke-induced brain injury by inhibiting the AGE/RAGE pathway

Background:Ischemic stroke is characterized by permanent or transient obstruction of blood flow,leading to a growing risk factor and health burden.Tianmagouteng yin(TMG)is commonly used in Chinese medicine to treat cerebral ischemia.The aim of this study was to investigate the neuroprotective effects of TMG against ischemic stroke.Methods:Either permanent middle cerebral artery occlusion(pMCAO)or sham operation was performed on anesthetized Wistar male rats(n=36).Results:Results demonstrated that TMG administration reduced the infarction volume and mitigated the neurobehavioral deficits.Hematoxylin and eosin(HE)staining and Prussian blue staining revealed that TMG attenuated tissue disruption and microbleeds in hippocampus tissues.In addition,TMG down-regulated the receptor of advanced glycation end products(RAGE)and p-JAK2.It also inhibited the concentrations of advanced glycation end products(AGEs),ferritin,malondialdehyde(MDA),and reactive oxygen species(ROS).Conclusion:As repetitive clinical trials of neuroprotectants targeting stroke have failed previously,our results suggested that the natural product,TMG,can probably help in the vicious cycles of ischemic stroke pathology.

二甲双胍对2型糖尿病模型大鼠肾组织AGEs表达的影响

目的观察二甲双胍(MET)对2型糖尿病(T2DM)模型大鼠肾组织非酶糖基化终末产物(AGEs)及其受体(RAGE)mRNA表达的影响,探讨MET对糖尿病肾病的保护机制。方法用高脂饲料喂养结合腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)建立2型糖尿病大鼠模型。模型大鼠随机分组,给予二甲双胍干预治疗(MET组,300 mg·kg^(-1)·d^(-1))、格列本脲干预(GLY组,5 mg·kg^(-1)·d^(-1)),并设立糖尿病模型组(T2DM组)和正常对照组(NC组)。给药8周后,观察各组大鼠血糖(BG)、糖化血红蛋白(Hb A1c)、尿素氮(BUN)、尿白蛋白和尿AGEs排泄的情况;免疫组化测肾小球AGEs蛋白表达;Real-time PCR检测肾组织RAGE mRNA表达。结果 8周末,MET组及GLY组BG、Hb A1c、FINS、尿白蛋白/尿肌酐(UACR)、基底膜厚度(GBMT)明显低于T2DM组,高于NC组(P<0.05),MET组与GLY组BG、Hb A1c和FINS差异无统计学意义(P>0.05);MET组尿AGEs/尿肌酐(UGCR)、肾组织AGEs蛋白和RAGE mRNA表达明显低于糖尿病模型组(P<0.05),但比NC组高(P<0.05);MET组UGCR、肾组织AGEs和RAGE mRNA表达低于GLY组(P<0.05)。结论 MET可减少AGEs在糖尿病大鼠肾组织的积累,并下调糖尿病大鼠肾组织RAGE mRNA的过度表达,该作用可能与其肾脏保护作用有关。

马钱苷对AGEs致巨噬细胞极化的影响

目的观察马钱苷对晚期糖基化终末产物(AGEs)致巨噬细胞极化的影响。方法建立AGEs刺激巨噬细胞模型,设置空白对照组,模型组,氨基胍组,马钱苷低剂量组(1μmol/L)和马钱苷高剂量组(10μmol/L)。除空白对照组外,加入100mg/L的AGEs刺激24h后采用ELISA法检测细胞上清促炎性细胞因子IL-12、TNF-α和抑炎性细胞因子IL-10水平,采用流式细胞仪检测巨噬细胞M1型标记蛋白CD86和M2型标记蛋白CD206表达水平;免疫荧光法检测M1型标记蛋白iNOS和M2型标记蛋白CD206表达;Western blot法检测RAGE和巨噬细胞极化相关蛋白RBP-J、IRF8表达。结果 AGEs可上调IL-12、TNF-α水平(P<0.01),促进巨噬细胞iNOS、RAGE、RBP-J和IRF8蛋白表达(P<0.01);而马钱苷预孵能够下调IL-12、TNF-α水平(P<0.01),上调IL-10水平,抑制RAGE、iNOS、RPB-J、IRF8蛋白表达(P<0.05~0.01)。结论马钱苷可通过抑制RAGE/RBP-J/IRF8通路,抑制M1巨噬细胞极化,下调促炎因子IL-12、TNF-α水平,上调抑炎因子IL-10分泌,改善肾脏巨噬细胞炎症反应。

中药复方益糖康颗粒通过AGE-RAGE轴介导SIRT1调控PI3K/Akt/FoxO1信号通路促进足细胞自噬的机制

目的:通过观察中药复方益糖康(YTK)颗粒对晚期糖基化终末产物(AGE)-晚期糖基化终产物受体(RAGE)轴介导沉默信息调节因子1(SIRT1)调控磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/叉头框蛋白O1(FoxO1)信号通路改善糖尿病肾脏疾病(DKD)大鼠足细胞自噬的影响,探讨YTK治疗DKD的可能作用机制。方法:选取8周龄SPF级健康雄性Wistar大鼠96只,使用随机数字表法分为空白组、模型组、YTK高、中、低剂量组(40、20、10 g·kg^(-1))、西药组(氯沙坦片,20 mg·kg^(-1)),采用高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素建立DKD大鼠模型。造模成功后,各组按照相应比例剂量连续给药8周后取材。严格按照试剂盒所示方法检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)的水平;苏木素-伊红(HE)染色观察肾脏组织病理形态学变化;免疫组化法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)、肌间质蛋白(Desmin)、裂孔膜蛋白(Nephrin)的平均积分吸光度值;蛋白免疫印迹法(Western blot)分析DKD大鼠肾组织中滑膜PI3K、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、Akt、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、RAGE、SIRT1、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、FoxO1的蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组SOD、GSH-Px、CAT表达水平明显降低,MDA显著升高(P<0.01);大鼠呈现严重肾损现象;足细胞标志蛋白α-SMA、FN、Desmin阳性表达显著增多,Nephrin、足突蛋白质(Podocin)显著下降(P<0.01);肾组织中PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、RAGE、Caspase-3蛋白表达水平显著升高,SIRT1、FoxO1蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。与模型组比较,YTK各剂量组大鼠血清中SOD、GSH-Px、CAT水平显著升高,MDA显著下降(P<0.01);肾损程度均发生了不同程度减轻;足细胞标志蛋白α-SMA、FN、Desmin平均积分吸光度值均明显降低,Nephrin、Podocin显著升高(P<0.01);肾组织中PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、RAGE、Caspase-3表达水平显著降低,SIRT1、FoxO1表达水平显著提升(P<0.01)。中药组表现出明显的量效趋势。结论:YTK可能通过AGE-RAGE轴介导SIRT1调控PI3K/Akt/FoxO1信号通路,改善足细胞自噬,从而减轻肾脏病理损害,减少蛋白尿,保护肾功能,达到延缓DKD进展的目的。且中药组具有量效趋势。