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题名家蚕AGO1蛋白结合RNA的分离与鉴定
被引量:1
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作者
杨帆
高珍
马亚飞
蒋彩英
吕正兵
盛清
聂作明
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机构
浙江理工大学生命科学与医药学院
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出处
《蚕业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第3期346-352,共7页
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基金
国家自然科学基金项目(No.31772677)
浙江省自然科学基金项目(No.LGF18H250004)
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文摘
RNA诱导的基因沉默复合体(RNA-induced silencing complex,RISC)核心蛋白为Argonaute(AGO)家族蛋白,作为miRNA及RNAi功能途径中的关键蛋白,能够结合miRNA和siRNA,降解靶标基因mRNA或抑制其翻译。因此,利用AGO蛋白抗体通过免疫沉淀分离其结合RNA是目前规模化分离鉴定miRNA及相关小RNA靶基因的重要方法。首先对家蚕AGO1基因进行克隆表达和抗体制备,用自制的兔多克隆抗体免疫沉淀家蚕组织内源BmAGO1蛋白,成功分离BmAGO1蛋白结合的RNA;同时在BmN细胞中采用6×His标签融合表达BmAGO1蛋白,用His单抗免疫沉淀His-BmAGO1蛋白,同样成功分离获得其结合RNA。qRT-PCR检测发现,BmAGO1蛋白结合的RNA中含有家蚕miRNA靶基因BmEm4的mRNA。研究结果为批量鉴定家蚕miRNA靶基因奠定了基础,同时也为深入研究BmAGO1蛋白在家蚕中的功能提供了依据。
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关键词
家蚕
Bmago1蛋白
免疫共沉淀
ago结合rna
mirna靶基因
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Keywords
Bombyx mori
Bmago1 protein
Co-Immunoprecipitation
ago Bound rnas
mirna target gene
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分类号
S881.24
[农业科学—特种经济动物饲养]
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